細胞工程習題

1、第4章1、 細胞全能性：一個植物細胞具有產(chǎn)生一個植株的潛力。2、 細胞分化：細胞后代在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程。3、 脫分化：已分化的細胞轉(zhuǎn)化成具有分生能力的細胞的過程。4、 再分化：已分化的細胞經(jīng)過脫分化再次分化的現(xiàn)象。5、 外植體：從植物體分離并用于離體培養(yǎng)的材料。6、 愈傷組織：脫分化的細胞，經(jīng)細胞分裂形成無特定結(jié)構(gòu)、松散的薄壁細胞團。7、 胚狀體：離體培養(yǎng)下沒經(jīng)過受精，但經(jīng)過胚胎發(fā)育所形成的胚的類似物。8、 植物組織培養(yǎng)的定義、一般過程？答：植物組織在離體條件下和無菌條件下利用人工培養(yǎng)條件培養(yǎng)、生長、發(fā)育再生出完整植株的過程。過程：離體的植物器官、組織、細胞（脫分化）愈傷組織（再

2、分化）根芽植物9.離體條件下生長素與細胞分裂素在細胞分化的作用？答：生長素主要作用是誘導愈傷組織的形成、胚狀體的產(chǎn)生以及試管苗的生根， 細胞分裂素主要作用是促進細胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強蛋白質(zhì)的合成、抑制頂端優(yōu)勢、促進側(cè)芽的生長及顯著改變其它的激素作用。更重要的是配合一定比例的細胞分裂素誘導腋芽及不定芽的產(chǎn)生。10.常用的植物激素有哪些？寫出英文縮寫。答：生長素：吲哚乙酸（IAA）； 萘乙酸（NAA）；2，4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）； 吲哚丁酸（IBA）；植物分裂素：6芐基酰嘌呤（6-BA）；激動素（KT）；玉米素（ZT）。 第5、6章11、胚胎培養(yǎng)及分類?答：胚胎培養(yǎng)是

3、指將植物的胚胎與母體分離，在人工的培養(yǎng)基上培養(yǎng)形成幼苗的過程。根據(jù)培養(yǎng)中所取外植體的部位不同，包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。12、莖尖脫毒的一般步驟？答：診斷：首先了解供試材料感染病毒的種類；莖尖培養(yǎng)脫毒或結(jié)合熱處理 鑒定；繁殖；馴化移植13、快繁的一般步驟？答：1.無菌母體植株的制備（取材、植物激素、 防止褐化和有害物積累）2.不定芽增殖（增殖的途徑：誘導形成大量胚狀體；誘導形成大量不定芽；促進腋芽的快速形成；愈傷組織增殖）3. 完整植株的形成4. 再生植株的馴化5. 再生植株的鑒定（植物形態(tài)學鑒定；細胞學鑒定）14、請簡述玉米胚胎培養(yǎng)的基本步驟？答：1）玉米種子

4、消毒2）在黑暗條件下，將種子放在無菌濕潤的含濾紙的培養(yǎng)皿中培育6hr。3）將吸漲的種子在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)將胚分離出來4）無菌水沖洗3次5）在MS培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)。6）觀察：2d出現(xiàn)胚根，3-4 d出現(xiàn)胚芽，10d長成幼苗。15、胚胎培養(yǎng)的意義？答：克服雜種胚的敗育，獲得稀有雜種獲得單倍體和多倍體植株打破種子休眠，促進胚萌發(fā)，縮短育種周期克服種子生活力低下和自然不育性，提高種子發(fā)芽率第7章16、 試比較花粉培養(yǎng)和花藥培養(yǎng)的異同之處？答：(1)花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)。(2)花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進行接種。(3)花藥培養(yǎng)包括：選擇材料-消毒-接種培養(yǎng)-愈傷組織生成-分化出單倍體植株。

5、(4)花粉培養(yǎng)包括：花粉的分離-預處理-培養(yǎng)過程。17、在花藥培養(yǎng)中應注意哪些主要環(huán)節(jié)？答：選擇合適的材料；選擇最佳預處理時期；接種；環(huán)境。第8章18、 如何得到單離的細胞？答：誘導愈傷組織，通過繼代，去松散的愈傷組織，通過霉處理得到單體細胞。 直接從外植體，通過機械法或霉處理方法獲得。19、 單細胞培養(yǎng)有哪些方法？答：平板培養(yǎng)；看護培養(yǎng)；微室培養(yǎng)；懸浮培養(yǎng)；液體淺層培養(yǎng)。第9章20、 原生質(zhì)體：指除去細胞壁的細胞或是說一個被質(zhì)膜所包圍的裸露細胞。21、 亞原生質(zhì)體：在原生質(zhì)體分離過程中，有時會引起細胞內(nèi)含物的斷裂而形成一些較小的原生質(zhì)體就叫做亞原生質(zhì)體。22、微小原生質(zhì)體：由原生質(zhì)膜和薄層細

6、胞質(zhì)包圍細胞核形成的小原生質(zhì)體。也稱為微小原生質(zhì)體。23、胞質(zhì)體：不含細胞核而僅含有部分細胞質(zhì)的原生質(zhì)體。24、為什么原生質(zhì)體要培養(yǎng)在等滲培養(yǎng)基中？答：正常狀態(tài)下，細胞壁使原生質(zhì)不易受傷害，而原生質(zhì)體細胞壁去除后，裸露的原生質(zhì)體處于滲透壓不同的情況下有可能吸水脹破或試水褶皺，所以在等諗培養(yǎng)基中保護原生質(zhì)體的活力和紙膜的穩(wěn)定性。25、植物體兩細胞雜交的概念和類型？答：植物體細胞雜交是指將植物不同種、屬，甚至科間的原生質(zhì)體通過人工方法誘導融合，然后進行離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術(shù)。 類型：對稱融合；非對稱融合。26、PEG融合、電融合的原理和各自的優(yōu)缺點?答：PEG融合：由于PEG分子具有輕微

7、的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，從而在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進而促使原生質(zhì)體的融合。其優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。 電融合：在交變電場作用下，使原生質(zhì)體因極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串；在強度足夠的直流電泳池，使膜發(fā)生電擊穿，從而導致緊密接觸的細胞融合在一起。優(yōu)點：一是不存在對細胞的毒害問題；二是融合效率高；三是融合技術(shù)操作簡便。缺點：不適用于大小下相差較大的原生質(zhì)體融合；設(shè)備昂貴。第10章27、 種質(zhì)保存的概念？答：

8、利用天然或人工創(chuàng)造的適宜環(huán)境，使個體中所含有的遺傳物質(zhì)保持其遺傳完整性，高活力，能通過繁殖將遺傳物質(zhì)傳遞下去。28、 種質(zhì)保存的方法有哪些？答：1、種子保存2、種植保存3、離體保存4、超低溫冷凍保存29、 離體保存的意義？答：可使一些無性繁殖作物種質(zhì)資源低溫長期保存，避免資源的丟失。節(jié)省土地和勞力，方法簡單，花費少并能在保存中脫毒。一旦利用可快速繁殖；也利于種質(zhì)交換。30、 超低溫冷凍保存的原理是什么？答：也叫冷凍保存，指在-196的液氮超低溫下使細胞代謝和生長處于基本停止的狀態(tài)，在適宜條件下可繁殖，再生出新的植株，并保持原來的遺傳特性。第11章31、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組織

9、培養(yǎng)基有何獨特之處？答：主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。、獨特之處：液體培養(yǎng)基 成分中有動物血清等32、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？答：因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強。33、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？答：成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)。34、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？答：不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體。35、簡述BSS的組成及用途。答：主要組成：無機鹽、葡萄糖。作用：維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定，提供簡單的營養(yǎng)。主用途：要用于取材

10、時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其它試劑等。 第12章36、什么是細胞系和細胞株？進行動物單細胞克隆的方法主要有哪些？答：細胞系：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細胞系, 細胞株：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養(yǎng)細胞稱為細胞株。主要方法：有限稀釋法、軟瓊脂克隆分離法。37、大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的技術(shù)主要有哪些？答：氣升式培養(yǎng)系統(tǒng) 微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中空纖維培養(yǎng)系統(tǒng) 微囊培養(yǎng)系統(tǒng)第13章38、比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的異同。答：比較項目細胞融合的原理細胞融合的方法誘導手段用 途相同植物體細胞雜交細胞膜的流動性細胞的全能性形成植株去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融

11、合離心、電刺激、振動、顯微操作、聚乙二醇等試劑誘導克服遠源雜交不親和，獲得雜種植株都有雜種細胞形成動物細胞融合細胞膜的流動性雜種細胞使細胞分散后誘導細胞融合同上，再加滅活的病毒誘導制備單克隆抗體的技術(shù)之一39、制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞？答：B淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，兩種細胞融合后，可以產(chǎn)生既能體外增值又能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞。40、雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟。答：細胞的選擇與培養(yǎng) 細胞融合試驗單克隆抗體檢測 克隆化培養(yǎng) 雜交瘤細胞的鑒定 單

12、克隆抗體的大量制備單克隆抗體的鑒定 單克隆抗體的純化第14章41、什么是克?。靠寺∮心膸讉€層次？答：只由一個范本分子、母細胞或母本直接形成新一代分子、細胞或個體，就是無性繁殖，即克隆。在分子水平上-重組載體通過宿主細胞的無性繁殖使目的基因擴增，再用某探針選取、釣取目的基因。在細胞水平上-單克隆抗體：利用動物細胞融合技術(shù)將骨髓瘤細胞和能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞融合得到雜交瘤細胞，再去培養(yǎng)，篩選到雜交瘤細胞系。在個體水平上-不通過兩性細胞的結(jié)合，從一個單一的細胞繁殖出生物個體。42、核移植技術(shù)的一般操作程序？答：核移植克隆哺乳動物的技術(shù)操作過程主要包括核受體和核供體的處理和制備、核移植、重組胚的體外或體內(nèi)培養(yǎng)、核移植胚胎移入代孕母畜（寄母）等步驟 。43、什么是治療性克?。恐委熜钥寺〉哪康暮陀猛臼鞘裁?？答：治療性克隆指把患者體細胞移植到去核卵母細胞中形成重組胚，把重組胚