細(xì)胞免疫組織化學(xué)特殊染色方法ppt課件

1、 細(xì)胞免疫組織化學(xué)細(xì)胞免疫組織化學(xué)特殊染色方法特殊染色方法特殊染色用于顯示標(biāo)本中的一些構(gòu)造，特殊染色用于顯示標(biāo)本中的一些構(gòu)造，使其在顯微鏡下與其它組織或細(xì)胞區(qū)別使其在顯微鏡下與其它組織或細(xì)胞區(qū)別. 特殊染色特殊染色單一特殊染色單一特殊染色復(fù)合特殊染色復(fù)合特殊染色一種染料對(duì)一種組織一種染料對(duì)一種組織構(gòu)造或細(xì)胞進(jìn)展染色構(gòu)造或細(xì)胞進(jìn)展染色多種染料對(duì)多種組多種染料對(duì)多種組織構(gòu)造或細(xì)胞進(jìn)展織構(gòu)造或細(xì)胞進(jìn)展染色染色糖原染色方法：糖原染色方法： 糖原為細(xì)胞內(nèi)的多糖或粘多糖，糖原為細(xì)胞內(nèi)的多糖或粘多糖，肝細(xì)胞和肌細(xì)胞內(nèi)的糖原最多。肝細(xì)胞和肌細(xì)胞內(nèi)的糖原最多。糖原的多少，可以反映機(jī)體糖代謝的情況。糖原的多少，可

2、以反映機(jī)體糖代謝的情況。例如：例如：先天性糖代謝紊亂先天性糖代謝紊亂- -葡萄糖葡萄糖-6-6-磷酸酶缺乏、磷酸酶缺乏、淋巴肉瘤、間皮瘤、腎上腺瘤，肝細(xì)胞內(nèi)淋巴肉瘤、間皮瘤、腎上腺瘤，肝細(xì)胞內(nèi)都可聚集過(guò)多的糖原。都可聚集過(guò)多的糖原。 過(guò)碘酸過(guò)碘酸-雪夫反響雪夫反響periodic acid Schiff reaction， PAS)原理：原理： 用過(guò)碘酸氧化多糖構(gòu)造的碳鍵，用過(guò)碘酸氧化多糖構(gòu)造的碳鍵， 使其構(gòu)成使其構(gòu)成2-醛基，與無(wú)色的品紅結(jié)合生成醛基，與無(wú)色的品紅結(jié)合生成紫紅色品紅復(fù)合物，沉淀于細(xì)胞內(nèi)糖原分布部位，紫紅色品紅復(fù)合物，沉淀于細(xì)胞內(nèi)糖原分布部位，從而可證明多糖或粘多糖的存在。從而

3、可證明多糖或粘多糖的存在。 1、試劑配制、試劑配制11%過(guò)碘酸水溶液：過(guò)碘酸水溶液： 過(guò)碘酸過(guò)碘酸 1g 雙蒸水雙蒸水 100ml 將過(guò)碘酸溶于雙蒸水中將過(guò)碘酸溶于雙蒸水中2Schiff試劑：試劑： 雙蒸水雙蒸水 200ml 堿性品紅堿性品紅 1g 1mol/L 鹽酸鹽酸 20ml 偏重亞硫酸鈉偏重亞硫酸鈉 2g 或亞硫酸氫鈉或亞硫酸氫鈉 活性炭活性炭 300mg 雙蒸水煮沸后離火，漸漸參與品紅，雙蒸水煮沸后離火，漸漸參與品紅，攪拌至完全溶解，冷卻至攪拌至完全溶解，冷卻至50時(shí)過(guò)濾，時(shí)過(guò)濾，參與鹽酸，冷卻至參與鹽酸，冷卻至25時(shí)參與偏重亞硫酸鈉時(shí)參與偏重亞硫酸鈉搖蕩，密封置于暗處或搖蕩，密封置

4、于暗處或4冰箱內(nèi)冰箱內(nèi)24h 。溶液呈草黃色時(shí)，參與活性炭搖蕩溶液呈草黃色時(shí)，參與活性炭搖蕩1min快速過(guò)濾。避光快速過(guò)濾。避光4保管備用。保管備用。 (3)亞硫酸氫納溶液亞硫酸氫納溶液 10%偏重亞硫酸氫納偏重亞硫酸氫納 5ml 1mol/L鹽酸鹽酸 5ml 蒸餾水蒸餾水 90ml 用前配制用前配制(4)1mol/L鹽酸鹽酸 36%鹽酸鹽酸 85.6ml 蒸餾水蒸餾水 914.4ml2、染色步驟、染色步驟1) 切片入切片入1%過(guò)碘酸液過(guò)碘酸液 氧化氧化2-5 min。 充分水洗后，過(guò)蒸餾水。充分水洗后，過(guò)蒸餾水。2入入Schiff 液液10-20 min室溫室溫 暗處暗處3入亞硫酸氫納液洗入

5、亞硫酸氫納液洗3次每次次每次2min 去非特異性染色流水沖洗去非特異性染色流水沖洗10min， 過(guò)蒸餾水。過(guò)蒸餾水。4)Mayer蘇木精復(fù)染蘇木精復(fù)染2-3min。流水沖洗，。流水沖洗， 過(guò)蒸餾水，吸干。過(guò)蒸餾水，吸干。 從從95%乙醇開(kāi)場(chǎng)脫水、透明、封片。乙醇開(kāi)場(chǎng)脫水、透明、封片。3、對(duì)照、對(duì)照用用1%淀粉糖化酶處置對(duì)照片淀粉糖化酶處置對(duì)照片20 min.或用唾液或用唾液無(wú)氣泡消化對(duì)照片無(wú)氣泡消化對(duì)照片30 min 2次。次。4、結(jié)果、結(jié)果細(xì)胞內(nèi)糖原呈紫紅色；對(duì)照片為陰性細(xì)胞內(nèi)糖原呈紫紅色；對(duì)照片為陰性5、本卷須知：、本卷須知：1糖原易溶于水，要用冷糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定液固

6、定2配制配制Schiff試劑堿性品紅雜質(zhì)太多，試劑堿性品紅雜質(zhì)太多，或亞硫酸氫納潮解，都不能使堿性品紅脫色；或亞硫酸氫納潮解，都不能使堿性品紅脫色；盛盛Schiff試劑的瓶子不宜過(guò)大，以免試劑的瓶子不宜過(guò)大，以免SO2逸出；逸出；假設(shè)假設(shè)Schiff試劑變成粉紅色即失效。試劑變成粉紅色即失效。Carnoy固定液固定液:取純乙醇、氯仿、冰醋酸，按取純乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制，的比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。普通固定現(xiàn)配現(xiàn)用。普通固定1-2 h。固定后的組織塊。固定后的組織塊可直接入可直接入95%的乙醇脫水。的乙醇脫水。疏松結(jié)締組織各種成分顯示方法：疏松結(jié)締組織各種成分顯示方法：疏松結(jié)締組

7、織中含有：疏松結(jié)締組織中含有：膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維；膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維；巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞。巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞。 一、一、 網(wǎng)狀纖維網(wǎng)狀纖維 分布：肝、腎、脾、淋巴結(jié)等器分布：肝、腎、脾、淋巴結(jié)等器官內(nèi)。官內(nèi)。纖維直徑纖維直徑0.2-2.0m，分支多，分支多，交錯(cuò)成網(wǎng)。交錯(cuò)成網(wǎng)。網(wǎng)狀纖維主要由網(wǎng)狀纖維主要由型膠原蛋白組成，型膠原蛋白組成，外表被覆糖蛋白，在鍍銀切片呈黑外表被覆糖蛋白，在鍍銀切片呈黑色稱為嗜銀纖維。色稱為嗜銀纖維。 Gomoris鍍銀法顯示網(wǎng)狀纖維鍍銀法顯示網(wǎng)狀纖維1、取材：淋巴結(jié)、取材：淋巴結(jié)2、試劑配制、試劑配制1硝酸銀溶液：硝酸銀溶液： 硝酸銀硝酸銀 10

8、.2g，溶于，溶于100ml蒸餾水。蒸餾水。2氫氧化鈉溶液：氫氧化鈉溶液： 氫氧化鈉氫氧化鈉 3.1g，溶于，溶于100ml蒸餾水。蒸餾水。 3銀氨溶液的配置：銀氨溶液的配置：取取5ml 硝酸銀溶液，硝酸銀溶液，緩慢滴加氨水至溶液變得清亮；緩慢滴加氨水至溶液變得清亮；再參與再參與5ml氫氧化鈉溶液，氫氧化鈉溶液，此時(shí)溶液變黑色再滴加氨水至溶液清亮后，此時(shí)溶液變黑色再滴加氨水至溶液清亮后，補(bǔ)加補(bǔ)加4滴氨水，加蒸餾水稀釋至滴氨水，加蒸餾水稀釋至100ml，保管于棕色瓶中備用。保管于棕色瓶中備用。4高錳酸鉀溶液：高錳酸鉀高錳酸鉀溶液：高錳酸鉀0.5g， 蒸餾水蒸餾水95ml，3%硫酸硫酸5ml5氯化

9、金溶液：氯化金氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸餾水蒸餾水100ml6草酸溶液：草酸草酸溶液：草酸2ml，蒸餾水，蒸餾水98ml7硫酸鐵溶液：硫酸鐵硫酸鐵溶液：硫酸鐵2g， 蒸餾水蒸餾水100ml8甲醛溶液：甲醛甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸餾水蒸餾水80ml 3、染色程序、染色程序1新穎組織新穎組織10%甲醛固定，石蠟切片，甲醛固定，石蠟切片， 常規(guī)脫蠟入水；常規(guī)脫蠟入水；2入高錳酸鉀溶液中入高錳酸鉀溶液中5min，水洗，水洗1min；3入草酸溶液中漂白入草酸溶液中漂白2min，水洗，水洗2min；4硫酸鐵中媒染硫酸鐵中媒染2min，水洗，水洗1min； 5銀氨溶液中處置銀氨溶液中處置1-5m

10、in25 ， 蒸餾水洗蒸餾水洗2次，各次，各2min；6甲醛溶液中復(fù)原甲醛溶液中復(fù)原5min， 蒸餾水洗蒸餾水洗2次，各次，各2min；7氯化金溶中調(diào)色氯化金溶中調(diào)色1-3min，蒸餾水洗，蒸餾水洗2次；次；895%及無(wú)水乙醇脫水，及無(wú)水乙醇脫水， 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。 4、結(jié)果、結(jié)果 淋巴結(jié)內(nèi)可見(jiàn)黑色網(wǎng)狀纖維，淋巴結(jié)內(nèi)可見(jiàn)黑色網(wǎng)狀纖維， 粗細(xì)不等，交錯(cuò)成網(wǎng)。粗細(xì)不等，交錯(cuò)成網(wǎng)。5、本卷須知、本卷須知 配制氨銀時(shí)氨液不可過(guò)多。配制氨銀時(shí)氨液不可過(guò)多。二、彈性纖維二、彈性纖維 分布廣泛，彈性纖維較細(xì)，直徑分布廣泛，彈性纖維較細(xì)，直徑0.2-1.0m，交錯(cuò)成網(wǎng)。富有

11、彈性，與膠原纖維交錯(cuò)在一同。交錯(cuò)成網(wǎng)。富有彈性，與膠原纖維交錯(cuò)在一同。彈性纖維中心部分由均質(zhì)的彈性蛋白組成；彈性纖維中心部分由均質(zhì)的彈性蛋白組成；外周覆蓋微原纖維。外周覆蓋微原纖維。在皮膚學(xué)和檢測(cè)幼年機(jī)體組織中的彈性構(gòu)造。在皮膚學(xué)和檢測(cè)幼年機(jī)體組織中的彈性構(gòu)造。常用的顯示彈性纖維的染色有：常用的顯示彈性纖維的染色有：地衣紅染色、地衣紅染色、 Gomoris醛品紅染色、醛品紅染色、Weigert染色等。染色等。地衣紅染色顯示彈性纖維地衣紅染色顯示彈性纖維1、取材、取材 皮下組織皮下組織2、染液配制、染液配制地衣紅染液：地衣紅染液： 地衣紅地衣紅0.1g ，70%乙醇乙醇100ml，硝酸，硝酸2m

12、l。3、染色程序、染色程序1石蠟切片脫蠟下行至石蠟切片脫蠟下行至70%乙醇。乙醇。2地衣紅染液，室溫，地衣紅染液，室溫，12h或過(guò)夜，或或過(guò)夜，或37,15-30min.370%乙醇分色，必要時(shí)可用乙醇分色，必要時(shí)可用0.5%-1%鹽酸乙醇分色，鹽酸乙醇分色， 去除膠原纖維顏色。去除膠原纖維顏色。4常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。4、結(jié)果、結(jié)果 彈性纖維為棕紅色，背景淡棕色。彈性纖維為棕紅色，背景淡棕色。三、膠原纖維三、膠原纖維膠原纖維，粗細(xì)不等，直徑膠原纖維，粗細(xì)不等，直徑0.5-10m，波浪，波浪狀，有分支交錯(cuò)成網(wǎng)。膠原纖維由狀，有分支交錯(cuò)成網(wǎng)。膠原

13、纖維由型膠原蛋型膠原蛋白組成。膠原纖維對(duì)酸性染料的親和力強(qiáng)，白組成。膠原纖維對(duì)酸性染料的親和力強(qiáng)，如常用的酸性復(fù)紅及苯胺藍(lán)等，對(duì)膠原纖維有如常用的酸性復(fù)紅及苯胺藍(lán)等，對(duì)膠原纖維有選染性，而其它組織不易著色，從而有利于其選染性，而其它組織不易著色，從而有利于其他組織的復(fù)染。他組織的復(fù)染。顯示膠原纖維的主要方法：顯示膠原纖維的主要方法：如如van Gieson法、法、 Mallory法、法、 Masson法等。法等。Masson s三色染色法顯示膠原纖維三色染色法顯示膠原纖維1、取材：皮下組織或腸系膜鋪片、取材：皮下組織或腸系膜鋪片2、固定：、固定：ZenkerBouin 10%中性福爾馬林緩沖液

14、中性福爾馬林緩沖液3、染液配制、染液配制1Weigert鐵蘇木精鐵蘇木精A液：蘇木精液：蘇木精 10g, 95%乙醇乙醇100mlB液：液：29%三氯化鐵水溶液三氯化鐵水溶液 4ml 25%鹽酸鹽酸 1ml 蒸餾水蒸餾水 95ml用時(shí)甲乙兩液等份混合，只能用數(shù)天。用時(shí)甲乙兩液等份混合，只能用數(shù)天。2Masson 酸性復(fù)紅染液：酸性復(fù)紅染液：酸性復(fù)紅酸性復(fù)紅1g，冰醋酸，冰醋酸 1ml，蒸餾水，蒸餾水 99ml。3磷鉬酸磷鉬酸-磷鎢酸水溶液：磷鎢酸水溶液：磷鉬酸磷鉬酸 2.5g，磷鎢酸，磷鎢酸2.5g，蒸餾水，蒸餾水 100ml。4苯胺藍(lán)染液：苯胺藍(lán)染液：苯胺藍(lán)苯胺藍(lán) 2.5g，冰醋酸，冰醋酸

15、2ml，蒸餾水，蒸餾水 100ml。51%醋酸水溶液：醋酸水溶液：冰醋酸冰醋酸 1ml ，蒸餾水，蒸餾水 99ml。 4、染色步驟、染色步驟1石蠟切片脫蠟下行至蒸餾水。石蠟切片脫蠟下行至蒸餾水。2Weigert 鐵蘇木精染色，鐵蘇木精染色，10-20min。3流水沖洗，流水沖洗，10min，光鏡下查看。也可用，光鏡下查看。也可用1%鹽酸乙醇鹽酸乙醇70%分色。流水沖洗，分色。流水沖洗，5min，蒸餾水浸洗。蒸餾水浸洗。4Masson 酸性復(fù)紅染液，酸性復(fù)紅染液，15min，蒸餾水洗。，蒸餾水洗。5磷鉬酸磷鉬酸-磷鎢酸水溶液分色，磷鎢酸水溶液分色，10-15min，或至膠原纖維無(wú)紅色?；蛑聊z原纖

16、維無(wú)紅色。6苯胺藍(lán)染液，苯胺藍(lán)染液，10-20min，蒸餾水洗。，蒸餾水洗。7 1%醋酸水溶液分色，醋酸水溶液分色，3-5min。鏡下查看分色程度。鏡下查看分色程度。895%乙醇脫水上行，二甲苯透明，樹(shù)膠封固。乙醇脫水上行，二甲苯透明，樹(shù)膠封固。 5、結(jié)果：、結(jié)果：膠原纖維為藍(lán)色；肌纖維為紅色，細(xì)胞核為黑色。膠原纖維為藍(lán)色；肌纖維為紅色，細(xì)胞核為黑色。6、本卷須知：、本卷須知：標(biāo)本為標(biāo)本為10%福爾馬林固定，切片染色前需用福爾馬林固定，切片染色前需用Bouin再固定，再固定，56 固定固定1h，或室溫過(guò)夜。，或室溫過(guò)夜。伊紅伊紅-醛復(fù)紅染色法醛復(fù)紅染色法 同時(shí)顯示膠原纖維和彈性纖維同時(shí)顯示膠原

17、纖維和彈性纖維 Gomori氏醛氏醛-復(fù)紅染液是復(fù)紅染液是Gomori在實(shí)驗(yàn)期間偶爾在實(shí)驗(yàn)期間偶爾發(fā)現(xiàn)的由堿性品紅、三聚乙醛、濃鹽酸配制而成。發(fā)現(xiàn)的由堿性品紅、三聚乙醛、濃鹽酸配制而成。一、試劑配制一、試劑配制Gomori醛醛-復(fù)紅染液：復(fù)紅染液：70%乙醇乙醇100ml，堿性品紅，堿性品紅0.5g，三聚乙醛三聚乙醛1ml，濃鹽酸，濃鹽酸1ml。留意：先將堿性品紅溶于乙醇中，留意：先將堿性品紅溶于乙醇中，然后參與三聚乙醛和濃鹽酸，靜置然后參與三聚乙醛和濃鹽酸，靜置1-2d，待溶液變?yōu)樯钭仙?，過(guò)濾置于冰箱待用。待溶液變?yōu)樯钭仙?，過(guò)濾置于冰箱待用。 三、制造過(guò)程三、制造過(guò)程1、取皮下組織鋪于干

18、凈的載玻片上，自然晾干。、取皮下組織鋪于干凈的載玻片上，自然晾干。2、放在甲醛、放在甲醛-乙醇固定液內(nèi)固定乙醇固定液內(nèi)固定5min；3、水洗、水洗3min；4、置于醛、置于醛-復(fù)紅染液中，室溫下染色復(fù)紅染液中，室溫下染色5min；5、水洗、水洗5min；6、置伊紅染液中，染色、置伊紅染液中，染色30s；7、常規(guī)脫水、透明、封片。、常規(guī)脫水、透明、封片。四、結(jié)果四、結(jié)果 膠原纖維為紅色，長(zhǎng)帶狀，波浪狀走行；膠原纖維為紅色，長(zhǎng)帶狀，波浪狀走行； 彈性纖維為紫色，細(xì)絲狀，直行，末端卷曲。彈性纖維為紫色，細(xì)絲狀，直行，末端卷曲。二、取材二、取材 皮下組織皮下組織甲苯胺藍(lán)染色顯示肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色顯示

19、肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞內(nèi)含粗大的嗜堿性、異染性的水溶性顆粒，肥大細(xì)胞內(nèi)含粗大的嗜堿性、異染性的水溶性顆粒，顆粒內(nèi)含有組胺、肝素等活性物質(zhì)，顆粒內(nèi)含有組胺、肝素等活性物質(zhì)，這些物質(zhì)含有高分子的多硫酸脂和硫酸黏多糖類(lèi)，可以與這些物質(zhì)含有高分子的多硫酸脂和硫酸黏多糖類(lèi)，可以與甲苯胺藍(lán)、美籃、中性紅、硫堇等染料結(jié)合。甲苯胺藍(lán)、美籃、中性紅、硫堇等染料結(jié)合。 1、取材、取材 皮下組織皮下組織2、固定、固定 Carnoy液液 或或 10%中性福爾馬林液中性福爾馬林液 皮下組織鋪于干凈的載玻片上，自然晾干后固定，皮下組織鋪于干凈的載玻片上，自然晾干后固定， 或石蠟切片，冰凍切片更好或石蠟切片，冰凍切片更好3、染液

20、配制、染液配制甲苯胺藍(lán)溶液：甲苯胺藍(lán)甲苯胺藍(lán)溶液：甲苯胺藍(lán)0.2g 60%乙醇乙醇100ml 混勻即可反復(fù)運(yùn)用?；靹蚣纯煞磸?fù)運(yùn)用。4、染色過(guò)程、染色過(guò)程1石蠟切片脫蠟下行至蒸餾水；石蠟切片脫蠟下行至蒸餾水；2入甲苯胺藍(lán)溶液染色，室溫入甲苯胺藍(lán)溶液染色，室溫10-30min；3蒸餾水洗；蒸餾水洗；4丙酮或丙酮或100%乙醇脫水兩次，各乙醇脫水兩次，各2min；5二甲苯透明，樹(shù)膠封固。二甲苯透明，樹(shù)膠封固。5、結(jié)果、結(jié)果 肥大細(xì)胞顆粒呈紫色，核淺藍(lán)色。肥大細(xì)胞顆粒呈紫色，核淺藍(lán)色。胰島內(nèi)分泌細(xì)胞胰島內(nèi)分泌細(xì)胞Massons三色染色法三色染色法胰島在胰尾部分布較多，胰島細(xì)胞由胰島在胰尾部分布較多，胰

21、島細(xì)胞由A、B、D、PP四種細(xì)胞組成，細(xì)胞間有豐富的毛細(xì)血管。四種細(xì)胞組成，細(xì)胞間有豐富的毛細(xì)血管。用用 Massons，Mallory 等特殊染色等特殊染色 方法可區(qū)別方法可區(qū)別A、B、D細(xì)胞。細(xì)胞。1、取材、取材 胰腺胰腺2、固定、固定 ZenkerBouin10%甲醛甲醛 3、染液配制、染液配制1麗春紅酸性品紅液：麗春紅酸性品紅液： 麗春紅麗春紅 0.7g，酸性品紅，酸性品紅0.4g，冰醋酸，冰醋酸 1ml， 蒸餾水蒸餾水99ml， 用用1%的冰醋酸的冰醋酸 溶解麗春紅和酸性品紅。溶解麗春紅和酸性品紅。22%亮綠液：亮綠亮綠液：亮綠2g，冰醋酸，冰醋酸 2ml 蒸餾水蒸餾水98ml， 用

22、用2%冰醋酸溶解亮綠。冰醋酸溶解亮綠。4、染色程序、染色程序1切片脫蠟至水；切片脫蠟至水；2入入0.5%碘乙醇碘乙醇5-10min， 自來(lái)水洗，蒸餾水洗；自來(lái)水洗，蒸餾水洗；3入入0.5%硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉3-5min；4Weigert 鐵蘇木精鐵蘇木精10-20min，自來(lái)水洗；，自來(lái)水洗；51%鹽酸乙醇分化，自來(lái)水洗藍(lán)化；鹽酸乙醇分化，自來(lái)水洗藍(lán)化； 6入麗春紅酸性品紅液入麗春紅酸性品紅液3-5min，蒸餾水速洗；，蒸餾水速洗；7入入1%磷酸鉬水溶液磷酸鉬水溶液5min；8傾去磷酸鉬，直接用傾去磷酸鉬，直接用2%亮綠液染亮綠液染3-5min；90.5%冰醋酸沖洗切片，將亮綠全部洗掉；冰醋

23、酸沖洗切片，將亮綠全部洗掉；1095%乙醇，無(wú)水酒精脫水，乙醇，無(wú)水酒精脫水， 二甲苯透明，樹(shù)膠封固。二甲苯透明，樹(shù)膠封固。 5、結(jié)果、結(jié)果 A 細(xì)胞染成紅色，位于胰島周邊；細(xì)胞染成紅色，位于胰島周邊； B細(xì)胞染成紫紅色，位于胰島中央；細(xì)胞染成紫紅色，位于胰島中央； D細(xì)胞染成綠色，位于細(xì)胞染成綠色，位于A 細(xì)胞與細(xì)胞與B細(xì)胞之間。細(xì)胞之間。6、留意、留意 用用10%甲醛固定，甲醛固定， 再用重鉻酸鉀液處置，再用重鉻酸鉀液處置， 也獲得較好效果。也獲得較好效果。甲綠甲綠-派假設(shè)寧染色顯示派假設(shè)寧染色顯示DNA和和RNA染色原理：甲綠和派假設(shè)寧是堿性染料，染色原理：甲綠和派假設(shè)寧是堿性染料， 染

24、色中甲綠染色中甲綠-派假設(shè)寧染色與派假設(shè)寧染色與 DNA和和RNA的聚合程度有關(guān)。的聚合程度有關(guān)。甲綠與聚合程度高的甲綠與聚合程度高的DNA親和力較強(qiáng)；親和力較強(qiáng)；派假設(shè)寧與聚合程度低的派假設(shè)寧與聚合程度低的RNA有親和力。有親和力。一、固定一、固定 ZenkerCarnoy (4) 二、染液配制二、染液配制1、2%甲綠水溶液：甲綠水溶液： 甲綠甲綠2g，蒸餾水，蒸餾水100ml甲綠提純法：將甲綠溶解后，放入分液漏斗中，甲綠提純法：將甲綠溶解后，放入分液漏斗中，加等量的純氯仿洗，充分搖蕩數(shù)分鐘，靜置，加等量的純氯仿洗，充分搖蕩數(shù)分鐘，靜置，待液體分層，放掉下層紫色氯仿液。按此法反復(fù)洗，待液體分層，放掉下層紫色氯仿液。按此法反復(fù)洗，直至洗不下紫色為止，需洗直至洗不下紫色為止，需洗5次左右。次左右。4保管。保管。2、2%派假設(shè)寧水溶液：派假設(shè)寧水溶液： 派假設(shè)寧派假設(shè)寧 2g，蒸餾水，蒸餾水100ml此液提純，應(yīng)按甲綠方法進(jìn)展。此液提純，應(yīng)按甲綠方法進(jìn)展。 3、醋酸緩沖液、醋酸緩沖液pH值值4.8： 0.2mol/L 醋酸醋酸 41ml， 0.2mol/L醋酸鈉醋酸鈉 59ml。4、甲綠、甲綠-派假設(shè)寧染液：派