DNA的粗提取與鑒定_實驗報告

1、DNA在在在NaClNaCl溶液濃度低于溶液濃度低于0.14 mol/L0.14 mol/L時，時，DNADNA的溶的溶解度隨解度隨NaClNaCl溶液濃度的溶液濃度的增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在增 加 而 逐 漸 降 低 ； 在0.14 mol/L0.14 mol/L時，時，DNADNA溶解溶解度最小；當度最??；當NaClNaCl溶液濃溶液濃度繼續(xù)增加時，度繼續(xù)增加時，DNADNA的溶的溶解度又逐漸增大。解度又逐漸增大。當氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時，DNA的溶解度最大，濃度為 014 molL時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出。DNA的粗

2、提取與鑒定的粗提取與鑒定實驗原理實驗原理DNA在不同濃度在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA與其他細胞成分在酒精中溶解度不同與其他細胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同和蛋白質(zhì)對酶、高溫和洗滌劑耐受性不同DNA與二苯胺呈現(xiàn)藍色反應與二苯胺呈現(xiàn)藍色反應DNA粗提取粗提取選擇適宜材料選擇適宜材料破碎細胞破碎細胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的純化的純化鑒定鑒定DNA與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍色反應與二苯胺混合，沸水浴，呈現(xiàn)藍色反應DNA的鑒定方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1.制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細胞細胞

3、核物質(zhì) 20 m1蒸餾水 3.溶解細胞核內(nèi)的DNA 2 mo1 L 的 NaCl 溶液 40 mL 4.析出含DNA 的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含DNA 的黏稠物 6.將DNA 的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.過濾含DNA 的NaCl 溶液 8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA 冷卻的95的酒精50 mL A:(1)向試管中加入2molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入 2mol L 的NaCl溶液5mL (2)4 mL 二苯胺試劑 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝

4、固加速血細胞破裂加速血細胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀釋至溶液稀釋至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地釋出最大限度地釋出 使含使含DNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上使含使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)的濾液中的雜質(zhì)提取提取DNA A出現(xiàn)藍色出現(xiàn)藍色 B無變化無變化DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定一、實驗原理一、實驗原理 1.1.血細胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導致細胞膜和細血細胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導致細胞膜和細胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有胞核膜的破裂。利用

5、此特性可得到含有DNA的溶液。的溶液。2.2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。的變化而改變的。DNA在在物質(zhì)的量濃度為物質(zhì)的量濃度為0.14 molL的氯化鈉溶液中的溶解度最低，的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出析出。 3.3.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但細胞中的但細胞中的某些物質(zhì)則可以溶某些物質(zhì)則可以溶于酒精。于酒精。利用這一原理，可以進一步利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少提取出含雜質(zhì)較少的的DNA。 4.4.DNA遇

6、二苯胺（沸水浴）會變成藍色，因此，遇二苯胺（沸水?。兂伤{色，因此，二苯胺二苯胺可以作為鑒定可以作為鑒定DNA的試劑的試劑。 二、方法與過程二、方法與過程 1.1.制雞血細胞液制雞血細胞液（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得）（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得）0.1g/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100mL活雞鮮血活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒燒杯中，玻棒攪拌攪拌，離心、分離或靜置沉淀。離心、分離或靜置沉淀。2.提取提取DNA取血細胞取血細胞5-10mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌快速攪拌。紗布紗布過濾過濾：濾液中含：濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。和其他核物質(zhì)，

7、如蛋白質(zhì)。原理：血細胞的細胞膜、核摸吸水脹破，玻璃棒原理：血細胞的細胞膜、核摸吸水脹破，玻璃棒快速快速攪拌攪拌，機械加速血細胞破裂。，機械加速血細胞破裂。.提取提取血血細胞核物質(zhì)：細胞核物質(zhì)：.溶解核內(nèi)的溶解核內(nèi)的DNA： 濾液濾液2mol/L的的NaCl溶液溶液40mL，玻棒沿一個方向，玻棒沿一個方向輕緩攪拌輕緩攪拌。.析出析出含含DNA的粘稠物：的粘稠物：.濾取含濾取含DNA的粘稠物：的粘稠物：. DNA粘稠物的再溶解：粘稠物的再溶解： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕輕攪拌輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當絲狀物不在增加時，停止加，出現(xiàn)絲狀物；當絲

8、狀物不在增加時，停止加水（此時水（此時NaCl溶液的濃度相當于溶液的濃度相當于0.14mol/L）。）。 用多層紗布用多層紗布過濾過濾，含，含DNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 20mL 2mol/L的的NaCl溶液溶液步驟步驟含含DNA的粘稠物的粘稠物在20mL燒杯中燒杯中輕緩攪拌輕緩攪拌3min，使盡可能多的，使盡可能多的DNA溶解在溶解在NaCl溶液溶液。.過濾含有過濾含有DNA的的NaCl溶液：溶液： 用放有兩層紗布的漏斗用放有兩層紗布的漏斗過濾過濾步驟步驟所得的溶液，所得的溶液，濾液中含有濾液中含有DNA。.提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的DNA： 步驟步驟所得的濾液

9、體積分數(shù)為所得的濾液體積分數(shù)為95%的冷卻酒精的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌輕緩攪拌，溶液中（，溶液中（析出析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。吸取上面的水分。3.DNA的鑒定：的鑒定： 加入二苯胺試劑加入二苯胺試劑4mL，用玻棒，用玻棒攪拌攪拌使使DNA溶解，溶解，沸水浴沸水浴5min，觀察溶液是否出現(xiàn)藍色。，觀察溶液是否出現(xiàn)藍色。1.共有共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌三次過濾，兩次析出，七次攪拌”2.加入加入“兩次蒸餾水，兩次蒸餾水，三次三次NaCl溶液，一次酒精，一次酒精”三

10、、實驗小結(jié)三、實驗小結(jié)練習練習1、請解釋提取、請解釋提取DNA的實驗操作中主要的步的實驗操作中主要的步驟的目的。驟的目的。答：提取答：提取DNA的第一步是材料的選取，其目的的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會含量較高的生物材料，否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二步是難；第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實驗的釋放和溶解，這一步是實驗成功與否的關鍵，要盡可能使細胞內(nèi)的成功與否的關鍵，要盡可能使細胞內(nèi)的DNA全部全部溶解；第三步是溶解；第三步是DNA的純化，即根據(jù)的純化，即根據(jù)DNA的

11、溶解的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將限度地將DNA與雜質(zhì)分開；最后一步是對與雜質(zhì)分開；最后一步是對DNA進進行鑒定，這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。行鑒定，這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。2、你認為從細胞中提取某種特定的蛋、你認為從細胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)與提取白質(zhì)與提取DNA一樣容易嗎？一樣容易嗎？答：提取蛋白質(zhì)比提取答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因的難度大。這是因為，與為，與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)等條件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的

12、空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設計特據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設計特定的方法。定的方法。2.實驗中實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和0.14 molL對對DNA有何影響有何影響?1.在在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.使血細胞破裂、降低使血細胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出C.使血細胞破裂、增大使血細胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNAB答：答：前者是溶解前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會染成會染成( )