消毒滅菌檢測(cè)制度和方法

1、消毒、滅菌效果的監(jiān)測(cè)制度與方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)其消毒設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常、消毒藥劑是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否達(dá)標(biāo)的唯一手段，在醫(yī)院消毒、滅菌工作中必不可少。因此，特制定消毒、滅菌效果的監(jiān)測(cè)制度與方法的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，以幫助各科室做好消毒、滅菌效果的監(jiān)測(cè)工作。主要內(nèi)容包括：消毒滅菌設(shè)備的監(jiān)測(cè)、醫(yī)療器械消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)和醫(yī)院環(huán)境微生物學(xué)監(jiān)測(cè)。一、消毒滅菌設(shè)備的監(jiān)測(cè)主要包括壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)、環(huán)氧乙烷（EO）滅菌效果監(jiān)測(cè)和紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)。（一）壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)1.化學(xué)監(jiān)測(cè)1）化學(xué)指示卡（管）監(jiān)測(cè)方法：需每包監(jiān)測(cè)。將既能指示蒸

2、汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示管（卡）放入每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示管（卡）,根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。2）化學(xué)指示膠帶監(jiān)測(cè)法：需每包監(jiān)測(cè)。將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外,經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過(guò)滅菌處理。3）結(jié)果判定：檢測(cè)時(shí)，所放置的指示管（卡卜膠帶的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件,判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過(guò)程不合格。4）B-D試驗(yàn)：對(duì)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌，每日進(jìn)行一次B-D試驗(yàn)。將B-D測(cè)試紙包水平放于滅菌柜內(nèi)滅菌架（車(chē)）的底層靠近排氣口處，柜內(nèi)除測(cè)試包外無(wú)任何物品。經(jīng)132C,

3、3.5min后，取出一次性B-D包觀察顏色變化。均勻一致變色,說(shuō)明冷空氣排除效果良好,滅菌器可以使用，反之，則滅菌器有冷空氣殘留，測(cè)試不合格。新安裝的設(shè)備和大修后設(shè)備應(yīng)該進(jìn)行B-D試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)包測(cè)試，試驗(yàn)應(yīng)t重復(fù)3次。5）注意事項(xiàng)：監(jiān)測(cè)所用化學(xué)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。2.生物監(jiān)測(cè)1）生物指示物監(jiān)測(cè)應(yīng)1月1次。2）指示菌株：為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC795微SSIK31株）。3）檢測(cè)方法：將兩個(gè)菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)（也可使用自含式生物指示物），置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包（由3件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大毛巾，3

4、0塊10cmx10cm8層紗布敷料包裹成25cmx30cmx30cm大?。?。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入澳甲酚紫葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，經(jīng)56c±1C培養(yǎng)7d（自含式生物指示物按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行），觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測(cè)時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。4）結(jié)果判定：每個(gè)指示菌片接種的培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌過(guò)程不合格。5）注意事項(xiàng)：監(jiān)測(cè)所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。（二）環(huán)氧乙烷（EO）滅菌效果監(jiān)測(cè)1 .物理檢測(cè)法每次滅菌均應(yīng)進(jìn)行程序監(jiān)測(cè)。2 .化學(xué)檢測(cè)法每次消毒過(guò)程均用化學(xué)指示

5、物檢測(cè)，只有當(dāng)消毒工藝符合要求，化學(xué)指示物變色符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)色要求的情況下，產(chǎn)品才可放行。3 .生物指示物檢測(cè)法（1）每月用生物指示物檢測(cè)一次。生物指示物用枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372。（2）檢測(cè)方法：將一個(gè)裝有菌片又含培養(yǎng)基的自含式生物指示物，放于一個(gè)20ml注射器內(nèi)，去掉針頭和針頭套，生物指示劑帶孔的塑料帽應(yīng)朝注射器針頭處，再將注射器芯放在原位（注意不要碰及生物指示物）；再用一條全棉小毛巾兩層包裹，一起放入一剝離式包裝袋內(nèi)。放在最難滅菌的部位，并均勻分布于整個(gè)滅菌物品中。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出的指示菌片接種于含有復(fù)方中和劑的0.5%的葡萄糖肉湯培養(yǎng)基管中，以未經(jīng)處理的陽(yáng)性菌片做相同

6、接種，兩者均置于36C±1C培養(yǎng)。（3）結(jié)果判定：經(jīng)培養(yǎng)，陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)；監(jiān)測(cè)樣品若連續(xù)培養(yǎng)觀察5天，全部無(wú)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告生物指示物培養(yǎng)陰性，滅菌合格。4 .注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用化學(xué)和微生物指示物必須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。（三）紫外線消毒效果的監(jiān)測(cè)紫外線燈管輻照度值的測(cè)定需每季度進(jìn)行一次。1 .檢測(cè)方法：開(kāi)啟紫外線燈5min后，將測(cè)定波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2 .結(jié)果判定：普通30w直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度>90科W/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)

7、度>70W/cm2為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度180dW/cm2為合格。3 .注意事項(xiàng)：測(cè)定時(shí)電壓220V±5V,溫度20c25C,相對(duì)濕度V60%,紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門(mén)檢定的有效期內(nèi)使用。二、醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(cè)1 .采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。2 .無(wú)菌檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無(wú)菌器械以及適合于無(wú)菌間查的其它品種是否無(wú)菌的一種方法。無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。（1）無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備無(wú)菌檢驗(yàn)前應(yīng)做洗脫液

8、與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn)并制備陽(yáng)性對(duì)照管菌液。（2）無(wú)菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管（其中一管作陽(yáng)性對(duì)照）與4管霉菌培養(yǎng)管。1）取5副注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5、次,洗下管內(nèi)細(xì)菌，混和后接種需-厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）。2汗術(shù)鉗、鐐子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照）與霉菌培養(yǎng)基（共4管）。3）結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為

9、澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次,除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。3.注意事項(xiàng)（1）送檢時(shí)間不得超過(guò)6h,若樣品保存于0c4C,則不得超過(guò)24ho（2）被采樣本表面積v100cm2取全部表面；被采樣本表面積100cm2,取100cm2。（3）若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。三、醫(yī)院環(huán)境微生物學(xué)監(jiān)測(cè)（一）手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測(cè)1 .采樣時(shí)間：在消毒后立即采樣。2 .采樣方法（1）手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈

10、面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30cm2）,并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。(2)皮膚粘膜采樣：用5cmx5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。3 .檢測(cè)方法將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的4

11、5c48c的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml18ml,邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36c±1C溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：平板上菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)=采樣面積(cm2)4 .結(jié)果判定在醫(yī)療機(jī)構(gòu)不同環(huán)境下工作的醫(yī)務(wù)人員，手衛(wèi)生應(yīng)達(dá)到如下要求：I、n類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)W5cfu/cm2,并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌銅綠假單胞菌為消毒合格。出類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)w10cfu/cm2,并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌為消毒合格。IV類(lèi)區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)w15cfu/cm2,并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌為消毒合格。母嬰室、嬰兒室、新生兒室及兒

12、科病房的工作人員手上，不得檢出沙門(mén)菌、大腸埃希菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。5 .注意事項(xiàng)皮膚粘膜采樣處，若表面不足5cmx5cm可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。(二)物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測(cè)6 .采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。7 .采樣方法用5cmx5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積100cm2,連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門(mén)把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。8 .結(jié)果判定I、n類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w5

13、cfu/cm2,并未檢出致病菌為消毒合格。出類(lèi)區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)w10cfu/cm2,并未檢出致病菌為消毒合格。IV類(lèi)區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)w15cfu/cm2,并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)菌。（三）空氣消毒效果監(jiān)測(cè)9 .采樣時(shí)間：在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。10 采樣方法（1）布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積w30m3,設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積30m3,設(shè)4角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位距墻壁1m處。（2）平板暴露法：將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（直徑為9cm）放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5m采樣時(shí)將平板蓋打開(kāi)，扣

14、放于平板旁，暴露15min,蓋好立即送檢。（3）空氣微生物采樣器采樣法：將空氣微生物采樣器放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)，采樣高度距地面1.5m,采樣1min立即送檢。11 檢測(cè)方法：將送檢的平板置37c溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌。平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/AT式中：A為平板面積（cm2）;T為平板暴露時(shí)間（min）;N為平均菌落數(shù)（cfu）。12 結(jié)果判定（1）平板暴露法I類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w10cfu/m3（或0.2cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；n類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w200cfu/m3（或4cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球

15、菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；出類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w500cfu/m3（或10cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。（2）空氣微生物采樣器法I類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w10cfu/m3,未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格;n類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w200cfu/m3,未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；m類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)w500cfu/m3,未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。I類(lèi)區(qū)域包括層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房；n類(lèi)區(qū)域包括普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房；出類(lèi)區(qū)域包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類(lèi)普通病房和房間。13 注意事項(xiàng)采樣前，關(guān)好門(mén)、窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10min進(jìn)行采樣。四、中和劑化學(xué)消毒劑處理過(guò)的各種采樣標(biāo)本必須經(jīng)過(guò)中和作用，方可作微生物檢驗(yàn)，不同消毒劑所對(duì)應(yīng)的中和劑詳見(jiàn)下表。消毒劑使用濃度（）相應(yīng)中和劑使