蛋白質(zhì)的離子交換層析技術(shù)研究進(jìn)展

1、蛋白質(zhì)離子交換層析技術(shù)蛋白質(zhì)離子交換層析技術(shù) 蛋白質(zhì)離子交換層析技術(shù)蛋白質(zhì)離子交換層析技術(shù)1234561.離子交換層析的原理 以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動相中的以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動相中的組分離子組分離子與交換與交換劑上的劑上的平衡離子平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小結(jié)合力大小的差別而進(jìn)的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。行分離的一種層析方法。 蛋白質(zhì)（以蛋白質(zhì)（以靜電引力靜電引力為主）的離子交換層析為主）的離子交換層析兩性分子，不同pH，所帶電荷種類和數(shù)目不同所帶電荷種類和數(shù)目不同高級結(jié)構(gòu)，大分子，大分子，多位點(diǎn)吸附除靜電力還有氫鍵、疏水作用、范德華力等待分離的目標(biāo)分

2、子和雜質(zhì)一起進(jìn)入平衡后的離子交換劑，目標(biāo)分子和待分離的目標(biāo)分子和雜質(zhì)一起進(jìn)入平衡后的離子交換劑，目標(biāo)分子和雜質(zhì)因帶電量不同，與離子交換劑有不同的結(jié)合程度，通過逐漸增加雜質(zhì)因帶電量不同，與離子交換劑有不同的結(jié)合程度，通過逐漸增加鹽離子濃度，將目標(biāo)分子和雜質(zhì)分別洗脫下來，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子和鹽離子濃度，將目標(biāo)分子和雜質(zhì)分別洗脫下來，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子和雜質(zhì)的分離。雜質(zhì)的分離。2.12.22.32.1離子交換劑的基本結(jié)構(gòu)基質(zhì)應(yīng)具備的特點(diǎn)：基質(zhì)應(yīng)具備的特點(diǎn)： 機(jī)械穩(wěn)定性強(qiáng)機(jī)械穩(wěn)定性強(qiáng)，適合高流速，適合高流速 化學(xué)穩(wěn)定性好化學(xué)穩(wěn)定性好，在很寬的，在很寬的pH范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，能耐去污范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，能耐去污劑

3、、有機(jī)溶劑。劑、有機(jī)溶劑。 球形，顆粒均勻。球形，顆粒均勻。 親水性親水性。 高交換容量高交換容量，要有較大的孔徑，要有較大的孔徑。平衡離子平衡離子2.2離子交換劑的指標(biāo)：離子交換劑能結(jié)合溶液中可交換離子的能力，離子交換劑能結(jié)合溶液中可交換離子的能力，通常用有效交換容量和實(shí)際交換容量來表示。通常用有效交換容量和實(shí)際交換容量來表示。 膨脹度：膨脹度：干態(tài)的交換劑吸水后造成體積膨脹的程度。干態(tài)的交換劑吸水后造成體積膨脹的程度。 粒徑：粒徑：一一般都在般都在3-300m 交聯(lián)度及網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)：交聯(lián)度及網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)：交交聯(lián)度越高，機(jī)械強(qiáng)度越好，耐壓性聯(lián)度越高，機(jī)械強(qiáng)度越好，耐壓性能越好。能越好。 電荷密度：電

4、荷密度：基質(zhì)顆粒單位表面積的取代基數(shù)量。對于蛋白基質(zhì)顆粒單位表面積的取代基數(shù)量。對于蛋白質(zhì)，介質(zhì)的電荷密度往往較低。以免結(jié)合過牢，難以洗脫質(zhì)，介質(zhì)的電荷密度往往較低。以免結(jié)合過牢，難以洗脫且易變性。且易變性。粒徑粒徑分辨率分辨率，分離效果，分離效果，但流速，但流速實(shí)際交換容量實(shí)際交換容量有效交換容量有效交換容量2.3離子交換劑的分類 根據(jù)活性基團(tuán)的酸堿性質(zhì)和解離性質(zhì)：根據(jù)活性基團(tuán)的酸堿性質(zhì)和解離性質(zhì)： 酸堿性質(zhì)：酸堿性質(zhì)： 解離性質(zhì)：解離性質(zhì)：陽離子交換劑：陽離子交換劑：活性基團(tuán)為酸性，結(jié)合陽離子活性基團(tuán)為酸性，結(jié)合陽離子陰離子交換劑：陰離子交換劑：活性基團(tuán)為堿性，結(jié)合陰離子活性基團(tuán)為堿性，結(jié)

5、合陰離子強(qiáng)離子交換劑：強(qiáng)離子交換劑：活性基團(tuán)為強(qiáng)酸強(qiáng)堿活性基團(tuán)為強(qiáng)酸強(qiáng)堿弱離子交換劑：弱離子交換劑：活性基團(tuán)為弱酸弱堿活性基團(tuán)為弱酸弱堿類型類型名稱名稱英文符號英文符號陰離子陰離子強(qiáng)堿強(qiáng)堿季銨基季銨基Q Q季銨基乙基季銨基乙基QAEQAE弱堿弱堿二乙氨基乙基二乙氨基乙基DEAEDEAE陽離子陽離子強(qiáng)酸強(qiáng)酸磺丙基磺丙基SPSP磺乙基磺乙基SESE弱酸弱酸羧甲基羧甲基CMCM2.3離子交換劑的分類由于樹脂的孔徑過小，且電荷密度過高，疏水性過強(qiáng)由于樹脂的孔徑過小，且電荷密度過高，疏水性過強(qiáng)使得大分子結(jié)合過牢而不易洗脫，同時(shí)，會造成變性。使得大分子結(jié)合過牢而不易洗脫，同時(shí)，會造成變性。通常用于蛋白質(zhì)的

6、離子交換劑多為纖維素等多糖類。通常用于蛋白質(zhì)的離子交換劑多為纖維素等多糖類。n纖維素纖維素n葡聚糖葡聚糖n瓊脂糖瓊脂糖n高效型高效型n非孔型非孔型n聚乙烯醇型聚乙烯醇型2.3離子交換劑的分類 開放性長鏈，較大的表面積，吸附容量最大開放性長鏈，較大的表面積，吸附容量最大 離子基團(tuán)少，排列稀疏，與蛋白質(zhì)結(jié)合不太牢固，易于洗離子基團(tuán)少，排列稀疏，與蛋白質(zhì)結(jié)合不太牢固，易于洗脫脫 良好的穩(wěn)定性，洗脫劑的選擇范圍廣良好的穩(wěn)定性，洗脫劑的選擇范圍廣2.3離子交換劑的分類 目前使用交聯(lián)葡聚糖主要來自目前使用交聯(lián)葡聚糖主要來自Pharmacia公司，主要有公司，主要有4種類型，都是以種類型，都是以Sephad

7、exG為骨架為骨架 商品名分別為商品名分別為SephadexA-25 SephadexC-25 SephadexA-50 SephadexC-50SephadexA-25以以SephadexG，即交聯(lián)，即交聯(lián)葡聚糖為骨架葡聚糖為骨架A:陰離子陰離子C:陽離子陽離子凝膠吸水值的凝膠吸水值的10倍倍2525為每克凝膠膨脹時(shí)吸水為每克凝膠膨脹時(shí)吸水2.52.5克克2.3離子交換劑的分類123TECHNOSepharose系列系列SepharoseCL-6BBio-Gel系列系列34m90m200m90m大孔珠狀大孔珠狀顆粒狀顆粒狀Q型型SP型型SepharoseHP弱型（弱型（DEAE，ANXCM）

8、強(qiáng)型（強(qiáng)型（Q，SP）SepharoseFFQ型型SP型型SepharoseBBDE型型CM型型2.3離子交換劑的分類 高效型：高效型：SOURCE系列、系列、MonoBeads系列系列剛性的骨架結(jié)構(gòu)：高硬度、高流速剛性的骨架結(jié)構(gòu)：高硬度、高流速親水表面：低特異性吸附親水表面：低特異性吸附 非孔非孔型型：MiniBeads系列系列所有的結(jié)合都發(fā)生在顆粒表面所有的結(jié)合都發(fā)生在顆粒表面液膜擴(kuò)散小，快速；顆粒小，分辨率高液膜擴(kuò)散小，快速；顆粒小，分辨率高 聚乙烯醇型：聚乙烯醇型：Toyopearl系列系列多孔型三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，富含羥基，高度親水多孔型三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，富含羥基，高度親水無孔型無孔型有孔型有

9、孔型無孔型無孔型微孔型微孔型大孔型大孔型2.3離子交換劑的分類 高效型：高效型：SOURCE系列、系列、MonoBeads系列系列剛性的骨架結(jié)構(gòu)：高硬度、高流速剛性的骨架結(jié)構(gòu)：高硬度、高流速親水表面：低特異性吸附親水表面：低特異性吸附 非孔非孔型型：MiniBeads系列系列所有的結(jié)合都發(fā)生在顆粒表面所有的結(jié)合都發(fā)生在顆粒表面液膜擴(kuò)散小，快速；顆粒小，分辨率高液膜擴(kuò)散小，快速；顆粒小，分辨率高 聚乙烯醇型：聚乙烯醇型：Toyopearl系列系列多孔型三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，富含羥基，高度親水多孔型三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，富含羥基，高度親水3.13.23.33.1離子交換劑 按規(guī)模：按規(guī)模：分析型分離，一般用柱色譜

10、；大規(guī)模工業(yè)化分離，分析型分離，一般用柱色譜；大規(guī)模工業(yè)化分離，有柱色譜、膨脹床吸附、分批分離等多種模式有柱色譜、膨脹床吸附、分批分離等多種模式 按目的：按目的：在預(yù)處理和初分級階段，目的是提取和濃縮目標(biāo)在預(yù)處理和初分級階段，目的是提取和濃縮目標(biāo)分子；在細(xì)分級和最后的精制階段，目的是去除雜質(zhì)，獲分子；在細(xì)分級和最后的精制階段，目的是去除雜質(zhì)，獲得單一組分。得單一組分。 目標(biāo)分子的大?。耗繕?biāo)分子的大小：選擇合適孔徑的基質(zhì)選擇合適孔徑的基質(zhì) 目標(biāo)分子的電荷及目標(biāo)分子的電荷及pH穩(wěn)定性：穩(wěn)定性： 在起始緩沖液中，目標(biāo)分子和介質(zhì)的功能基團(tuán)帶相反的電在起始緩沖液中，目標(biāo)分子和介質(zhì)的功能基團(tuán)帶相反的電荷，

11、以利于目標(biāo)分子結(jié)合在色譜柱上，荷，以利于目標(biāo)分子結(jié)合在色譜柱上， 起始相洗脫，雜質(zhì)和介質(zhì)的功能基團(tuán)帶相反的電荷，從而起始相洗脫，雜質(zhì)和介質(zhì)的功能基團(tuán)帶相反的電荷，從而吸附在色譜柱上。這時(shí)，收集流穿峰即可。吸附在色譜柱上。這時(shí)，收集流穿峰即可。3.2色譜柱 通常用高徑比較小的柱子通常用高徑比較小的柱子離子交換柱的高度一般在離子交換柱的高度一般在5-20cm確定基本參數(shù)后，可通過直徑確定基本參數(shù)后，可通過直徑擴(kuò)大分?jǐn)U大分離規(guī)模。離規(guī)模。3.3緩沖液 緩沖離子：緩沖離子：與功能基團(tuán)帶相同的電荷與功能基團(tuán)帶相同的電荷 pH：蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的pI緩沖液的緩沖液的pH緩沖液的種類緩沖液的種類 離子強(qiáng)度：離

12、子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度利于洗脫，不利于吸附利于洗脫，不利于吸附4.離子交換的操作方法離子交換的操作方法4.14.24.34.44.54.1預(yù)處理 預(yù)裝柱：預(yù)裝柱：SOURCE、MonoBeads、MiniBeads系列系列 無需處理，直接使用。無需處理，直接使用。 濕膠濕膠：無需預(yù)處理，使用前傾去上清，添加起始緩沖液，無需預(yù)處理，使用前傾去上清，添加起始緩沖液，攪勻后裝柱即可攪勻后裝柱即可 干膠干膠：需溶脹。通常室溫需溶脹。通常室溫1-2d，沸水浴，沸水浴2h。 Sephadex系列：系列：不能用蒸餾水，避免強(qiáng)烈攪拌。不能用蒸餾水，避免強(qiáng)烈攪拌。 纖維素系列：纖維素系列： 制造制造的過程中，

13、產(chǎn)生一些細(xì)顆粒，將纖維素在水中攪的過程中，產(chǎn)生一些細(xì)顆粒，將纖維素在水中攪 勻后，自然沉降，勻后，自然沉降，傾去上清漂浮物傾去上清漂浮物，反復(fù)數(shù)次即可。，反復(fù)數(shù)次即可。 制造完后，未經(jīng)處理，含很多雜質(zhì)成分，需洗滌，用制造完后，未經(jīng)處理，含很多雜質(zhì)成分，需洗滌，用 0.5mol/L的的NaOH和和0.5mol/L的的HCl進(jìn)行進(jìn)行“堿堿-酸酸-堿堿”反反復(fù)浸泡復(fù)浸泡，每次半小時(shí)，期間用蒸餾水洗至中性。，每次半小時(shí)，期間用蒸餾水洗至中性。4.2裝柱、平衡 裝柱：裝柱：排空柱底部的死體積，輕輕攪勻交換劑與緩沖液的排空柱底部的死體積，輕輕攪勻交換劑與緩沖液的混合液，玻棒引流，使液體沿柱壁流下，盡可能一

14、次性注混合液，玻棒引流，使液體沿柱壁流下，盡可能一次性注入，讓介質(zhì)自然沉降。入，讓介質(zhì)自然沉降。 保持柱的垂直狀態(tài)，防止產(chǎn)生氣泡、防止分層保持柱的垂直狀態(tài)，防止產(chǎn)生氣泡、防止分層。 平衡：平衡：用起始緩沖液平衡，檢測下端流出液與起始緩沖液用起始緩沖液平衡，檢測下端流出液與起始緩沖液在在pH、電導(dǎo)、離子強(qiáng)度方面是否達(dá)一致。、電導(dǎo)、離子強(qiáng)度方面是否達(dá)一致。 對于弱離子交換劑，本身具有一定的緩沖能力，平衡時(shí)間對于弱離子交換劑，本身具有一定的緩沖能力，平衡時(shí)間很長。通常用酸或堿將很長。通常用酸或堿將pH調(diào)至起始調(diào)至起始pH；或用與起始緩沖；或用與起始緩沖液液pH相同，但離子強(qiáng)度更大的緩沖液，加快相同，

15、但離子強(qiáng)度更大的緩沖液，加快pH平衡，最平衡，最后用起始緩沖液平衡。后用起始緩沖液平衡。4.3上樣、洗滌 上樣上樣 加樣量加樣量：目的物含量為有效交換容量的：目的物含量為有效交換容量的10-20%。 方法：方法： 預(yù)裝柱，通過恒流泵加樣。預(yù)裝柱，通過恒流泵加樣。 自裝柱，采用排干法：自裝柱，采用排干法： 加樣時(shí)，不能攪動床面，要保持床面的完整。加樣時(shí)，不能攪動床面，要保持床面的完整。 洗滌洗滌 加樣完后，用起始緩沖液填滿柱上端，擰緊上口，用恒流加樣完后，用起始緩沖液填滿柱上端，擰緊上口，用恒流泵泵入起始緩沖液泵泵入起始緩沖液4.4洗脫 緩沖離子：緩沖離子：與功能基團(tuán)帶相同的電荷與功能基團(tuán)帶相同

16、的電荷 pH：蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的pI緩沖液的緩沖液的pH緩沖液的種類緩沖液的種類 離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度利于洗脫，不利于吸附利于洗脫，不利于吸附4.4洗脫 -般采用分部洗脫和連續(xù)洗脫。般采用分部洗脫和連續(xù)洗脫。 分部洗脫：分部洗脫：幾種不同洗脫能力的緩沖液相繼進(jìn)行洗脫幾種不同洗脫能力的緩沖液相繼進(jìn)行洗脫優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備和操作簡單；洗脫迅速；洗脫液體積小優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備和操作簡單；洗脫迅速；洗脫液體積小缺點(diǎn)：性質(zhì)相近的組分不易分開；同一組分出現(xiàn)多個(gè)峰缺點(diǎn)：性質(zhì)相近的組分不易分開；同一組分出現(xiàn)多個(gè)峰 連續(xù)洗脫連續(xù)洗脫：逐漸增強(qiáng)洗脫緩沖液的洗脫能力，分辨率逐漸增強(qiáng)洗脫緩沖液的洗脫能力，分辨率4.5色譜

17、柱的再生與清洗 一般，高濃度鹽（通常是一般，高濃度鹽（通常是2M的的NaCl）溶液清洗）溶液清洗 對于一些結(jié)合較牢固的物質(zhì)，如變性的蛋白，沉淀而聚集對于一些結(jié)合較牢固的物質(zhì)，如變性的蛋白，沉淀而聚集的蛋白，疏水性蛋白或脂蛋白等一些膠狀物，用酸和堿洗的蛋白，疏水性蛋白或脂蛋白等一些膠狀物，用酸和堿洗脫脫 疏水性更強(qiáng)的蛋白、脂蛋白以及脂類，用非離子去污劑或疏水性更強(qiáng)的蛋白、脂蛋白以及脂類，用非離子去污劑或有機(jī)溶劑（有機(jī)溶劑（70%的乙醇或的乙醇或30%異丙醇）逆向清洗。異丙醇）逆向清洗。瓊脂糖瓊脂糖：鹽和：鹽和0.5M的的NaOH纖維素：纖維素：鹽和鹽和0.1M的的NaOH葡聚糖葡聚糖：避免在：避

18、免在pH小于小于3的環(huán)境，可用的環(huán)境，可用1M的的NaAC 0.5M的的NaOH交替清洗。交替清洗。5.5.15.25.35.4n增加柱壓并輕敲柱壁的方法以除去氣泡，增加柱壓并輕敲柱壁的方法以除去氣泡，確保在引入任何溶液時(shí)不要產(chǎn)生氣泡確保在引入任何溶液時(shí)不要產(chǎn)生氣泡n樣品蛋白質(zhì)損失量允許的情況下，支撐樣品蛋白質(zhì)損失量允許的情況下，支撐物應(yīng)取出并清洗物應(yīng)取出并清洗n用高徑比較小的柱子用高徑比較小的柱子n過柱前的樣品要超聲或超濾處理過柱前的樣品要超聲或超濾處理n產(chǎn)生氣泡產(chǎn)生氣泡n樹脂基質(zhì)發(fā)生粘連樹脂基質(zhì)發(fā)生粘連n層析柱太細(xì)層析柱太細(xì)n細(xì)小顆粒堵柱細(xì)小顆粒堵柱5.1層析速度太慢n降低初始上樣緩沖液離

19、子強(qiáng)度降低初始上樣緩沖液離子強(qiáng)度n注意計(jì)算蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)注意計(jì)算蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)n樹脂應(yīng)充分平衡或用嚴(yán)格的再生方法樹脂應(yīng)充分平衡或用嚴(yán)格的再生方法n初始上樣緩沖液離子強(qiáng)初始上樣緩沖液離子強(qiáng)度過大度過大n樹脂樹脂pH值因解吸作用值因解吸作用而發(fā)生變化而發(fā)生變化n樹脂未進(jìn)行適當(dāng)平衡或樹脂未進(jìn)行適當(dāng)平衡或再生的樹脂未洗凈再生的樹脂未洗凈5.2蛋白質(zhì)不與樹脂結(jié)合n樹脂上的蛋白質(zhì)未洗凈樹脂上的蛋白質(zhì)未洗凈npH值不合適或蛋白質(zhì)值不合適或蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀發(fā)生沉淀n水解酶破壞了目的蛋白水解酶破壞了目的蛋白或樹脂中有微生物滋生或樹脂中有微生物滋生5.3純化蛋白質(zhì)的產(chǎn)率低n增強(qiáng)溶液離子強(qiáng)度；更換活性高的反離增強(qiáng)溶液

20、離子強(qiáng)度；更換活性高的反離子或使用去垢劑等方法解決。子或使用去垢劑等方法解決。n適當(dāng)調(diào)節(jié)適當(dāng)調(diào)節(jié)PHn蛋白提取過程中應(yīng)加水解酶抑制劑抑制蛋白提取過程中應(yīng)加水解酶抑制劑抑制蛋白水解蛋白水解5.4蛋白質(zhì)分辨效果差n流速太快或?qū)游鲋^短流速太快或?qū)游鲋^短n梯度洗脫時(shí)洗脫液濃度梯度洗脫時(shí)洗脫液濃度變化太快變化太快n上柱蛋白質(zhì)過多上柱蛋白質(zhì)過多n降低流速降低流速n可采用連續(xù)洗脫等梯度變化較慢的洗脫可采用連續(xù)洗脫等梯度變化較慢的洗脫n減少上樣量減少上樣量6.16.26.1混合物的分離 Bio-Rex70層析分離眼鏡蛇神經(jīng)毒素的層析分離眼鏡蛇神經(jīng)毒素的6種單乙酰基衍生物種單乙?；苌?眼鏡蛇神經(jīng)毒素，一

21、種小分子堿性蛋白，分子中眼鏡蛇神經(jīng)毒素，一種小分子堿性蛋白，分子中6個(gè)氨基個(gè)氨基（5個(gè)側(cè)鏈個(gè)側(cè)鏈Lys殘基和一個(gè)游離的殘基和一個(gè)游離的N端氨基）均能被乙酰化端氨基）均能被乙?；梢阴；苌锷梢阴；苌?形成的形成的6種單乙酰基衍生物中凈電荷數(shù)種單乙?；苌镏袃綦姾蓴?shù)相同，但表面的電荷分布不同。據(jù)此，可以用相同，但表面的電荷分布不同。據(jù)此，可以用Bio-Rex70將它們分開。將它們分開。6.1混合物的分離 兩步連續(xù)離子交換制備色譜分離純化兩步連續(xù)離子交換制備色譜分離純化PEG-rhG-SCF 蛋白質(zhì)聚乙二醇化的反應(yīng)，生成非蛋白質(zhì)聚乙二醇化的反應(yīng)，生成非PEG化蛋白和不同程度化蛋白和不同

22、程度的的PEG化蛋白的混合物。因蛋白質(zhì)化蛋白的混合物。因蛋白質(zhì)PEG化程度越高，其等化程度越高，其等電點(diǎn)越低，根據(jù)電荷量的差異，通過電點(diǎn)越低，根據(jù)電荷量的差異，通過SP-SepharoseFF和和SOURSE Q30作為陽、陰離子色譜連續(xù)兩步將之分離開來。作為陽、陰離子色譜連續(xù)兩步將之分離開來。6.1混合物的分離 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)PEG化程度越高，其等電點(diǎn)越低?；潭仍礁撸涞入婞c(diǎn)越低。 在陽離子交換色譜，在陽離子交換色譜，PEG化蛋白與介質(zhì)結(jié)合較弱，主要出化蛋白與介質(zhì)結(jié)合較弱，主要出現(xiàn)在流穿峰中，通過洗脫液將非現(xiàn)在流穿峰中，通過洗脫液將非PEG化蛋白洗脫下來。而化蛋白洗脫下來。而在陰離子交換色譜中，由于在陰離子交換色譜中，由于PEG的的“屏蔽效應(yīng)屏蔽效應(yīng)”阻礙了蛋阻礙了蛋白與交換劑間的作用，白與交換劑間的作用，PEG化程度高的蛋白反而易被洗脫?；潭雀叩牡鞍追炊妆幌疵摗P-SepharoseFF分離聚乙分離聚乙二醇化的二醇化的rhG-CSF和未反應(yīng)和未反應(yīng)的的rhG-CSFSOURSE Q30陰離子交換色譜陰離子交換色譜分離不同的修飾組分分離不同的修飾組分峰峰3，2，1分別代表單、雙、三分別代表單、雙、三聚乙二醇化蛋白聚乙二醇化蛋白6.2包涵體蛋白的柱上復(fù)性 吸附：吸附：用變性緩沖液用變性緩沖液溶解蛋白，溶