反應(yīng)曲線(xiàn)觀察和處理

1、2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together止凝血產(chǎn)品線(xiàn)移轉(zhuǎn)沃芬中國(guó)08 May 20121 技術(shù)支持 唐艷琳 03.08 2013Growing Together2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together如何觀察和處理凝固/反應(yīng)曲線(xiàn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together一、什么是凝固曲線(xiàn)?2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together什么是凝固曲線(xiàn)？ 凝固曲線(xiàn)是在試驗(yàn)時(shí)加入了凝固曲線(xiàn)是在試驗(yàn)時(shí)加入了“啟動(dòng)啟動(dòng)”試劑后，試劑后，由儀器的分析模塊進(jìn)行

2、數(shù)據(jù)讀取后獲得的。讀取由儀器的分析模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取后獲得的。讀取到的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)收集后被傳輸?shù)娇刂颇K，經(jīng)過(guò)預(yù)到的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)收集后被傳輸?shù)娇刂颇K，經(jīng)過(guò)預(yù)定的數(shù)學(xué)法則處理后，最終的數(shù)據(jù)將以原始計(jì)數(shù)定的數(shù)學(xué)法則處理后，最終的數(shù)據(jù)將以原始計(jì)數(shù)對(duì)時(shí)間的圖形形式表現(xiàn)出來(lái)。對(duì)時(shí)間的圖形形式表現(xiàn)出來(lái)。2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn)凝固曲線(xiàn)最初階段; 因子被激活纖維蛋白原被水解成纖維蛋白凝塊平臺(tái)期; 所有纖維蛋白原已經(jīng)全部被水解為纖維蛋白纖維蛋白原被水解成纖維蛋白凝塊TimeTime最初階段; 因子被激活纖維蛋白原被水解成纖維蛋白凝塊平臺(tái)期; 所有纖維蛋白原已經(jīng)全部

3、被水解為纖維蛋白濁度或光散射值2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together在規(guī)定獲取時(shí)間內(nèi)，光電探測(cè)器會(huì)每秒收集10次測(cè)量信號(hào)，這些測(cè)量通過(guò)一個(gè)圖表的形式表現(xiàn)出來(lái)，Y軸式吸光度的增加，X軸秒數(shù)的增加。最終的結(jié)果就是可以被回顧的凝固曲線(xiàn)。測(cè)量值被轉(zhuǎn)變成電子信號(hào)，ACL TOP的軟件通過(guò)運(yùn)算法則的測(cè)算，判定凝固點(diǎn)。吸光率增加吸光率增加時(shí)間增加時(shí)間增加 (seconds)凝固曲線(xiàn)形成過(guò)程2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together7運(yùn)算法則: 是將光學(xué)檢測(cè)的原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)變?yōu)槟虝r(shí)間的一種程序 閾值法 (反應(yīng)濁度)：FIB-C 一階導(dǎo)數(shù)法 (反應(yīng)最大速

4、度)：PT、外源性因子 二階導(dǎo)數(shù)法 (反應(yīng)最大加速度):APTT、TT、內(nèi)源性因子2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together一階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算法則一階導(dǎo)數(shù)法則用來(lái)判定PT, FII, 和 FVII等用 RecombiPlasTin試劑測(cè)試的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。一階導(dǎo)數(shù)法是將凝固最大速度點(diǎn)判定為凝固點(diǎn)，基于凝固曲線(xiàn)的斜率。曲線(xiàn)上導(dǎo)數(shù)最大點(diǎn)與速度最大點(diǎn)是相一致的，用紅色垂直線(xiàn)標(biāo)示出來(lái)。2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together二階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算法則二階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算法則用來(lái)判定除了用一階導(dǎo)數(shù)法和FIB-C外的其他項(xiàng)目的凝固點(diǎn)的判定。當(dāng)纖維蛋白形成反應(yīng)到達(dá)最大加速度時(shí)，二

5、階導(dǎo)數(shù)法則判定此時(shí)為凝固點(diǎn)。二階導(dǎo)數(shù)的最大值那點(diǎn)與最大反應(yīng)加速度那點(diǎn)是一致的，用紅色的垂線(xiàn)標(biāo)示。二階導(dǎo)數(shù)法則是用一階導(dǎo)數(shù)法則衍生出來(lái)的，這意味著用二階導(dǎo)數(shù)法則判定凝固點(diǎn)的測(cè)試項(xiàng)目需要同時(shí)滿(mǎn)足兩種法則。2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Togetherv典型的曲線(xiàn)像一個(gè)大的Sv有一個(gè)初始的基線(xiàn)，一個(gè)上升階段和一個(gè)終點(diǎn) (平臺(tái)期)二、怎么看凝固曲線(xiàn)二、怎么看凝固曲線(xiàn) ?2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn)形成SecondsmAbs基線(xiàn)期基線(xiàn)期加速期加速期減速期減速期終點(diǎn)終點(diǎn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Toget

6、her如何查看凝固曲線(xiàn)(查看樣本結(jié)果詳情)12樣本詳情樣本詳情2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together查看凝固曲線(xiàn)13凝固曲線(xiàn)凝固曲線(xiàn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together14凝固曲線(xiàn)信息凝固曲線(xiàn)信息凝固曲線(xiàn)凝固曲線(xiàn)報(bào)警和錯(cuò)誤報(bào)警和錯(cuò)誤測(cè)試信息測(cè)試信息結(jié)果結(jié)果2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together錯(cuò)誤/報(bào)警信息提示SESE進(jìn)樣錯(cuò)誤進(jìn)樣錯(cuò)誤L L超出最高線(xiàn)性范圍超出最高線(xiàn)性范圍HE硬件錯(cuò)誤L結(jié)果超出最低試驗(yàn)范圍CE凝集錯(cuò)誤H結(jié)果超出最高治療范圍(平均值)RE結(jié)果錯(cuò)誤H結(jié)果超出最低治療范圍(平均值)C結(jié)果

7、超出最高定標(biāo)范圍N結(jié)果超出最高正常范圍(平均值)C結(jié)果超出最低定標(biāo)范圍N結(jié)果超出最低正常范圍(平均值)HW硬件報(bào)警LR檢測(cè)超出線(xiàn)性范圍（高或低）CW凝集報(bào)警HR檢測(cè)超出治療范圍（高或低）RW結(jié)果報(bào)警L超出最高線(xiàn)性范圍QC質(zhì)控錯(cuò)誤NR檢測(cè)超出正常范圍（高或低）AR分析參比超出范圍CA校正提示NPNPP報(bào)警MT維護(hù)提示T結(jié)果超出最高試驗(yàn)范圍ME材料錯(cuò)誤/報(bào)警T結(jié)果超出最低試驗(yàn)范圍2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together三、凝固曲線(xiàn)的影響因素 一條凝固曲線(xiàn)是整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程的最終產(chǎn)物，在任意一個(gè)時(shí)期有任何的影響因素介入都有可能影響凝固過(guò)程，并由此影響到反應(yīng)曲線(xiàn)的形狀。201

8、3 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together1、標(biāo)本的質(zhì)量與采集 有凝塊有凝塊 保存不當(dāng)保存不當(dāng) 過(guò)渡抗凝過(guò)渡抗凝 過(guò)于陳舊的標(biāo)本過(guò)于陳舊的標(biāo)本2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together 2、試劑陳舊的試劑陳舊的試劑復(fù)融不當(dāng)復(fù)融不當(dāng)安放試劑的位置不當(dāng)安放試劑的位置不當(dāng)在要求放攪棒的地方未放置攪棒在要求放攪棒的地方未放置攪棒交叉污染交叉污染2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together 3、機(jī)械原因加樣針損壞（包括樣本與試劑加樣針）加樣針損壞（包括樣本與試劑加樣針）讀數(shù)區(qū)有液體溢出讀數(shù)區(qū)有液體溢出測(cè)試杯中有雜質(zhì)測(cè)試杯中有雜質(zhì)

9、光路損壞光路損壞2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together 4、病人臨床狀況凝血因子缺乏凝血因子缺乏DIC嚴(yán)重的脂血癥嚴(yán)重的脂血癥肝臟疾病肝臟疾病抗凝治療抗凝治療2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together標(biāo)本的凝固曲線(xiàn)失敗，該怎么辦?2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together22 PT 正常凝固曲線(xiàn)正常凝固曲線(xiàn)一階求導(dǎo)一階求導(dǎo)(max)凝固時(shí)間凝固時(shí)間2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together23APTT 正常凝固曲線(xiàn)正常凝固曲線(xiàn)二階求導(dǎo)二階求導(dǎo) (max)凝固時(shí)間凝固時(shí)間一階求導(dǎo)一

10、階求導(dǎo)(purple)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together24FIB-C 正常凝固曲線(xiàn)正常凝固曲線(xiàn)凝固時(shí)間取決于所有發(fā)生的吸光度凝固時(shí)間取決于所有發(fā)生的吸光度DELTA值的值的37%。Delta of Absorbance2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 1試劑分配不足252013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Case 1試劑不足 (PT)265078-檢測(cè)到試劑不足2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 1解釋 試劑不足 反應(yīng)曲線(xiàn)形

11、狀可能顯示正常，但是如果沒(méi)有分配適量的試劑， FAILED 將一直出現(xiàn)。272013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 2標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間試驗(yàn)PT 失敗延長(zhǎng)時(shí)間試驗(yàn)得到結(jié)果282013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) CASE 2 - PT295060-最小delta值沒(méi)有發(fā)現(xiàn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) CASE 2 - PT30正常 PT 凝固曲線(xiàn)形狀Case 2 PT最小DELTA值標(biāo)準(zhǔn): APTT curve 10PT curve 152013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)

12、展Growing Together凝固曲線(xiàn) CASE 2 PT (延長(zhǎng)試驗(yàn)) 31PT延長(zhǎng)延長(zhǎng)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 2可能的解釋32 病人口服抗凝藥治療 (OAT) 因子缺乏(執(zhí)行糾正試驗(yàn)) 肝素治療2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 333標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間試驗(yàn)和延長(zhǎng)時(shí)間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間試驗(yàn)和延長(zhǎng)時(shí)間試驗(yàn)PT均失敗均失敗2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Sample 3 - PT345056 太多無(wú)效的原始數(shù)據(jù)點(diǎn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growi

13、ng Together凝固曲線(xiàn) Sample 3 PT (延長(zhǎng))355056 太多無(wú)效的原始數(shù)據(jù)點(diǎn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 3 可能的解釋36可能脂類(lèi)干擾(非常脂濁的樣本).2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASES 4 e 5標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間試驗(yàn) APTT 失敗. 延長(zhǎng)試驗(yàn)得到結(jié)果372013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Case 4 APTT38凝固曲線(xiàn)形狀可見(jiàn)，但加凝固曲線(xiàn)形狀可見(jiàn)，但加速期的捕獲時(shí)間受限制。速期的捕獲時(shí)間受限制。5071 一階導(dǎo)數(shù)最大值沒(méi)有找到2

14、013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Case 4 APTT (延長(zhǎng))39執(zhí)行延長(zhǎng)試驗(yàn)執(zhí)行延長(zhǎng)試驗(yàn)(360 sec)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Case 5 APTT405071 一階導(dǎo)數(shù)最大值沒(méi)有找到2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together凝固曲線(xiàn) Case 5 APTT (延長(zhǎng))415506高于正常范圍2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASES 4 e 5可能的解釋 樣本中UFH 肝素濃度升高 因子缺乏(執(zhí)行糾正試驗(yàn)) 抗磷脂抗體存

15、在 (執(zhí)行糾正試驗(yàn)) 核實(shí)樣本采集是否正確，可能的話(huà)采集新的樣本。422013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 6標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)Fib失敗432013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case 6442013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case 6Fib C (標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)- 1:10稀釋)45快速反應(yīng)，沒(méi)有檢測(cè)到快速反應(yīng)，沒(méi)有檢測(cè)到基線(xiàn)期基線(xiàn)期5052基線(xiàn)期SD超過(guò)誤差范圍2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case 6Fib C 再檢或F

16、ib C High 試驗(yàn) (1:20稀釋)46自動(dòng)自動(dòng)1:20稀釋稀釋高高 Fibrinogen 671 mg/dL2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 6可能的解釋 Fib濃度高。472013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together48FIB-C 定標(biāo)曲線(xiàn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn)2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together方法學(xué) 運(yùn)算法則 線(xiàn)性動(dòng)力學(xué)線(xiàn)性動(dòng)力學(xué) AT 終點(diǎn)減起點(diǎn)法終

17、點(diǎn)減起點(diǎn)法 終點(diǎn)的光學(xué)讀終點(diǎn)的光學(xué)讀數(shù)均值減去基線(xiàn)光學(xué)讀數(shù)均數(shù)均值減去基線(xiàn)光學(xué)讀數(shù)均值值 DD 發(fā)色底物法發(fā)色底物法 測(cè)定硝基苯測(cè)定硝基苯 (pNA) 的釋放量的釋放量 當(dāng)?shù)孜锱c分當(dāng)?shù)孜锱c分析物反應(yīng)時(shí)析物反應(yīng)時(shí) 免疫比濁法免疫比濁法 檢測(cè)由于抗原檢測(cè)由于抗原/抗體復(fù)合物形成而導(dǎo)致的吸抗體復(fù)合物形成而導(dǎo)致的吸光率的變化光率的變化2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together52DD 反應(yīng)曲線(xiàn)反應(yīng)曲線(xiàn) (below cut-off)反應(yīng)反應(yīng)DELTA值與抗原濃度成比例值與抗原濃度成比例BASE LINEEND POINTDelta of absorbance2013 201

18、3 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 7D-Dimer標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)失敗 (執(zhí)行稀釋試驗(yàn))532013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case7 D-Dimer“失敗” 54抗原存在抗原存在,快速凝集快速凝集5076起始斜率超過(guò)誤差范圍2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case 7(1:5稀釋)55超出最大檢測(cè)線(xiàn)性超出最大檢測(cè)線(xiàn)性(5.250 ng/mL)5500 高于檢測(cè)范圍2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Case 7 (高稀釋度1:25)56在在26.250 ng/mL前的結(jié)果可前的結(jié)果可接受接受2013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 7解釋 非常高濃度的D-Dimer 標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)= FAILED (飽和曲線(xiàn)形狀) 1:5稀釋 = 超出檢測(cè)線(xiàn)性(高) 1:25稀釋 = 高稀釋度得到結(jié)果572013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing TogetherCASE 8D-Dimer失敗顯示錯(cuò)誤“基線(xiàn)期高”582013 2013 |攜手發(fā)展攜手發(fā)展Growing Together反應(yīng)曲線(xiàn) Cas