實(shí)驗(yàn)八-蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)1 .1 . 加 深 理 解 所 學(xué) 有 關(guān) 的 蛋 白 質(zhì) 性 質(zhì) 的 理 論 知 識(shí)加 深 理 解 所 學(xué) 有 關(guān) 的 蛋 白 質(zhì) 性 質(zhì) 的 理 論 知 識(shí)2.2.掌握氨基酸和蛋白質(zhì)常用的定性、定量分析的方法及原理掌握氨基酸和蛋白質(zhì)常用的定性、定量分析的方法及原理【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹恳?、蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)一、蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)l蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)是指蛋白質(zhì)所含的某些氨基酸蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)是指蛋白質(zhì)所含的某些氨基酸及其特殊結(jié)構(gòu)，在一定條件下可與某些試劑發(fā)生及其特殊結(jié)構(gòu)，在一定條件下可與某些試劑發(fā)生了生成有色物質(zhì)的反應(yīng)。了生成有

2、色物質(zhì)的反應(yīng)。l不同蛋白質(zhì)分子所含的氨基酸殘基不完全相同，不同蛋白質(zhì)分子所含的氨基酸殘基不完全相同，因此所發(fā)生的成色反應(yīng)也不完全一樣。因此所發(fā)生的成色反應(yīng)也不完全一樣。l呈色反應(yīng)并不是蛋白質(zhì)的專(zhuān)一反應(yīng)。因此，不能呈色反應(yīng)并不是蛋白質(zhì)的專(zhuān)一反應(yīng)。因此，不能僅僅根據(jù)呈色反應(yīng)的結(jié)果為陽(yáng)性就來(lái)判斷被測(cè)物僅僅根據(jù)呈色反應(yīng)的結(jié)果為陽(yáng)性就來(lái)判斷被測(cè)物質(zhì)一定是蛋白質(zhì)，至少要用質(zhì)一定是蛋白質(zhì)，至少要用2 2種以上的方法來(lái)鑒種以上的方法來(lái)鑒別別。（一）雙縮脲反應(yīng)（一）雙縮脲反應(yīng) 【實(shí)驗(yàn)原理】實(shí)驗(yàn)原理】l當(dāng)尿素經(jīng)加熱至當(dāng)尿素經(jīng)加熱至180180左右時(shí)，兩分子尿素脫去一分子氨，左右時(shí)，兩分子尿素脫去一分子氨，進(jìn)而縮合

3、成一分子雙縮脲。其在堿性條件下雙縮脲與銅離進(jìn)而縮合成一分子雙縮脲。其在堿性條件下雙縮脲與銅離子結(jié)合成紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。其反應(yīng)子結(jié)合成紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。其反應(yīng)過(guò)程如下：過(guò)程如下：COH2NH2N+COH2NH2N1800CH2NCNHCNH2OO+NH3l多肽及蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中均含有許多肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮多肽及蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中均含有許多肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲分子中的亞酰胺鍵相同。因此，在堿性條件下與銅離子脲分子中的亞酰胺鍵相同。因此，在堿性條件下與銅離子也能呈現(xiàn)出類(lèi)似于雙縮脲的呈色反應(yīng)。其反應(yīng)過(guò)程如下：也能呈現(xiàn)出類(lèi)似于雙縮脲的呈色反應(yīng)。其反應(yīng)過(guò)程如下：COH2N

4、H2N+COH2NH2N1800CH2NCNHCNH2OO+NH3【試劑】【試劑】1 1 蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清用蒸餾水稀釋蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清用蒸餾水稀釋1010倍，倍， 通過(guò)通過(guò)2-32-3層紗布濾去不溶物）層紗布濾去不溶物）2. 0.1%2. 0.1%的甘氨酸溶液的甘氨酸溶液3. 0.01%3. 0.01%精氨酸溶液精氨酸溶液4. 10%NaOH4. 10%NaOH溶液溶液5. 1%CuSO45. 1%CuSO4溶液溶液6. 6. 尿素結(jié)晶尿素結(jié)晶【實(shí)驗(yàn)流程】【實(shí)驗(yàn)流程】雙縮脲的制備雙縮脲的制備少許尿素結(jié)晶于干燥試管中許尿素結(jié)晶于干燥試管中微火加熱尿素熔解至硬化尿素熔解至硬化停止加熱看到有白色

5、氣體冷卻加10%氫氧化鈉溶液約1ml震蕩加入1%硫酸銅溶液2滴震蕩觀察顏色的變化如圖所示注意注意：l(1)(1)尿素結(jié)晶不要取多，約火柴頭大小。尿素結(jié)晶不要取多，約火柴頭大小。l(2)(2)在操作過(guò)程中試管不能沖向他人以防止?fàn)C傷。在操作過(guò)程中試管不能沖向他人以防止?fàn)C傷。l(3)(3)控制加熱的時(shí)間既不能過(guò)長(zhǎng)也不能過(guò)短?？刂萍訜岬臅r(shí)間既不能過(guò)長(zhǎng)也不能過(guò)短。l(4)(4)加熱時(shí)火不能太大，防止碳化。加熱時(shí)火不能太大，防止碳化。l(5)(5)銅離子不能多加，否則與氫氧化鈉形成藍(lán)色的氫氧化銅離子不能多加，否則與氫氧化鈉形成藍(lán)色的氫氧化銅，干擾試驗(yàn)結(jié)果。銅，干擾試驗(yàn)結(jié)果?！驹噭俊驹噭?.1.蛋白質(zhì)樣

6、液（與雙縮脲反應(yīng)相同）蛋白質(zhì)樣液（與雙縮脲反應(yīng)相同）2. 0.1%2. 0.1%的甘氨酸溶液的甘氨酸溶液3. 0.2%3. 0.2%茚三酮溶液茚三酮溶液（二）茚三酮反應(yīng)（二）茚三酮反應(yīng)l【實(shí)驗(yàn)原理】實(shí)驗(yàn)原理】 在弱酸條件下（在弱酸條件下（pH5-7pH5-7），蛋白質(zhì)或氨基酸與茚三酮共熱，），蛋白質(zhì)或氨基酸與茚三酮共熱，可生成可生成藍(lán)紫色縮合物藍(lán)紫色縮合物。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)和。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)和氨基酸氨基酸所共有所共有( (亞氨基酸如脯氨酸和羥脯氨酸產(chǎn)生黃色化合物亞氨基酸如脯氨酸和羥脯氨酸產(chǎn)生黃色化合物) )，含有氨基的其他化合物亦可發(fā)生此反應(yīng)。含有氨基的其他化合物亦可發(fā)生此反應(yīng)?！緦?shí)驗(yàn)流

7、程】【實(shí)驗(yàn)流程】l取試管取試管2 2支，分別加入蛋白質(zhì)樣液及支，分別加入蛋白質(zhì)樣液及0 01 1甘氨酸溶液甘氨酸溶液1ml1ml，然后各加入茚三酮溶液然后各加入茚三酮溶液0.5ml0.5ml，混勻后于沸水浴中加熱數(shù)，混勻后于沸水浴中加熱數(shù)分鐘，觀察顏色變化如圖所示：分鐘，觀察顏色變化如圖所示： （三）黃蛋白反應(yīng)（三）黃蛋白反應(yīng) 一支試管中加入雞蛋白溶液一支試管中加入雞蛋白溶液2ml2ml和濃硝酸和濃硝酸0.5ml0.5ml，加熱，加熱煮沸煮沸1 12min2min，觀察呈什么現(xiàn)象？溶液冷卻后，加，觀察呈什么現(xiàn)象？溶液冷卻后，加入過(guò)量濃氨水，又呈什么顏色？入過(guò)量濃氨水，又呈什么顏色？解釋?zhuān)狐S蛋白

8、反應(yīng)：黃色沉淀，這一反應(yīng)為苯丙氨解釋?zhuān)狐S蛋白反應(yīng)：黃色沉淀，這一反應(yīng)為苯丙氨 酸、酪氨酸、色氨酸等苯環(huán)酸、酪氨酸、色氨酸等苯環(huán)aaaa特有。特有。（三）黃色反應(yīng)l【實(shí)驗(yàn)原理】實(shí)驗(yàn)原理】 在蛋白質(zhì)分子中，具有芳香環(huán)的氨基酸在蛋白質(zhì)分子中，具有芳香環(huán)的氨基酸( (如酪氨酸，色氨如酪氨酸，色氨酸等酸等) )殘基上的苯環(huán)經(jīng)硝酸作用可生成殘基上的苯環(huán)經(jīng)硝酸作用可生成黃色黃色的硝基化合物，的硝基化合物，在堿性條件下生成物可轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色的硝醌衍生物在堿性條件下生成物可轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色的硝醌衍生物, ,反應(yīng)反應(yīng)為為: :OH+HNO3HONO2+H2OHONO2+NaOHONOHOH 多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨

9、基酸，所以都會(huì)多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以都會(huì)發(fā)生黃色反應(yīng)。苯丙氨酸不易硝化，需加少量濃硫酸后才發(fā)生黃色反應(yīng)。苯丙氨酸不易硝化，需加少量濃硫酸后才能夠發(fā)生黃色反應(yīng)。能夠發(fā)生黃色反應(yīng)?！緦?shí)驗(yàn)流程】【實(shí)驗(yàn)流程】1. 取取0.1%0.1%石炭酸溶液約石炭酸溶液約1ml1ml放在試放在試管內(nèi)，加濃硝酸管內(nèi)，加濃硝酸5 5滴（注意不要弄滴（注意不要弄到手上），水浴加熱，觀察結(jié)果到手上），水浴加熱，觀察結(jié)果如右圖所示：如右圖所示：（四）蛋白質(zhì)鹽析（四）蛋白質(zhì)鹽析 取取2ml2ml雞蛋白溶液于試管中，慢慢加入等雞蛋白溶液于試管中，慢慢加入等量量硫酸銨飽和溶液硫酸銨飽和溶液，混合均勻，即成不飽和硫酸銨混合均勻，即成不飽和硫酸銨溶液，靜置數(shù)分鐘，則析出球蛋白，濾出沉淀，向溶液，靜置數(shù)分鐘，則析出球蛋白，濾出沉淀，向?yàn)V液中加入結(jié)晶硫酸銨，使其飽和（硫酸銨不再溶濾液中加入結(jié)晶硫酸銨，使其飽和（硫酸銨不再溶解為止），此時(shí)析出清蛋白。解為止），此時(shí)析出清蛋白。 鹽溶現(xiàn)象：鹽溶現(xiàn)象：在上述試管中繼續(xù)加入蒸餾水，看有何現(xiàn)象發(fā)生？在上述試管中繼續(xù)加入蒸餾水，看有何現(xiàn)象發(fā)生？解釋?zhuān)翰煌忉專(zhuān)翰煌琍rPr硫酸銨沉淀飽和度不同硫酸銨沉淀飽和度不同（五）重金屬鹽對(duì)蛋白質(zhì)作用（五）重金屬鹽對(duì)蛋白質(zhì)作用 兩支試管中，各加入蛋白質(zhì)溶液兩支試管中，各加入蛋白質(zhì)溶液1ml1ml，然，然后一支試