第6章藥物的含量測定.

1、第第6 6章章 藥物含量測定方法藥物含量測定方法 化學(xué)分析法化學(xué)分析法 儀器分析法儀器分析法藥物含量測定方法藥物含量測定方法 1 容量分析法容量分析法 優(yōu)點(diǎn)：精密度好、操作簡優(yōu)點(diǎn)：精密度好、操作簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確便快速、結(jié)果準(zhǔn)確 缺點(diǎn)：專屬性差缺點(diǎn)：專屬性差 原料藥含量測定首選方法原料藥含量測定首選方法化學(xué)分析法化學(xué)分析法藥物含量測定方法藥物含量測定方法2 重量分析法重量分析法 優(yōu)點(diǎn)：精密度好、快速、結(jié)果優(yōu)點(diǎn)：精密度好、快速、結(jié)果準(zhǔn)確準(zhǔn)確 缺點(diǎn)：專屬性差、樣品量大、缺點(diǎn)：專屬性差、樣品量大、操作較繁、需時(shí)較長操作較繁、需時(shí)較長 僅在不能應(yīng)用容量分析法進(jìn)行僅在不能應(yīng)用容量分析法進(jìn)行原料藥含量測定

2、時(shí)再考慮。原料藥含量測定時(shí)再考慮?；瘜W(xué)分析法化學(xué)分析法 重量分析法：以質(zhì)量為測量值的分析方法。將被測組重量分析法：以質(zhì)量為測量值的分析方法。將被測組分與其他分離，稱重計(jì)算含量。精確到分與其他分離，稱重計(jì)算含量。精確到0.1-0.2 %。對低含量組分測定誤差較大，盡量避免用。水分測定，對低含量組分測定誤差較大，盡量避免用。水分測定，藥品中水中不溶物、熾灼殘?jiān)?、灰分仍用。藥品中水中不溶物、熾灼殘?jiān)?、灰分仍用?1、揮發(fā)法：利用被測組分具有揮發(fā)性或?qū)⑵滢D(zhuǎn)化為、揮發(fā)法：利用被測組分具有揮發(fā)性或?qū)⑵滢D(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)，稱取揮發(fā)前后揮發(fā)性物質(zhì)算含量。揮發(fā)性物質(zhì)，稱取揮發(fā)前后揮發(fā)性物質(zhì)算含量。 a、 直接揮發(fā)

3、法：測吸收劑增加的量直接揮發(fā)法：測吸收劑增加的量 b、 間接揮發(fā)法：測樣品所減少的量間接揮發(fā)法：測樣品所減少的量 2、萃取法：、萃取法：(提取重量法提取重量法)用互不相容的溶劑萃取后稱用互不相容的溶劑萃取后稱重，適用于有機(jī)藥物的測定。重，適用于有機(jī)藥物的測定。 3、沉淀法：將被測組分以沉淀形式分離出來，轉(zhuǎn)化、沉淀法：將被測組分以沉淀形式分離出來，轉(zhuǎn)化為稱量形式，計(jì)算被測組分的含量的方法。為稱量形式，計(jì)算被測組分的含量的方法。 換算因素?fù)Q算因素F 換算因素是指被測組分的摩爾質(zhì)量與稱量換算因素是指被測組分的摩爾質(zhì)量與稱量形式的摩爾質(zhì)量之比形式的摩爾質(zhì)量之比a、 b 使待測組分與稱量形式中含有的待使

4、待測組分與稱量形式中含有的待測元素原子數(shù)或分子數(shù)相當(dāng)?shù)淖钚」稊?shù)；測元素原子數(shù)或分子數(shù)相當(dāng)?shù)淖钚」稊?shù)； Ma供測品中帶測組分的摩爾質(zhì)量，供測品中帶測組分的摩爾質(zhì)量， g/mol;Mb待測組分稱量形式的摩爾質(zhì)量，待測組分稱量形式的摩爾質(zhì)量， g/mol。baMbMaF注射用苯妥英的含量測定 方法原理：方法原理： 供試品加水溶解后，加稀鹽酸，供試品加水溶解后，加稀鹽酸，用乙醚振搖提取，置用乙醚振搖提取，置105恒重的蒸發(fā)皿中，恒重的蒸發(fā)皿中，低溫蒸去乙醚，并在低溫蒸去乙醚，并在105干燥至恒重，精干燥至恒重，精密稱定，所得殘?jiān)亓颗c密稱定，所得殘?jiān)亓颗c1.087相乘，即苯相乘，即苯妥英鈉（妥英

5、鈉（C15H11N2NaO2）的重量。）的重量。 注射用苯妥英的含量測定注射用苯妥英的含量測定 取供試品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精取供試品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于苯妥英鈉密稱取適量（約相當(dāng)于苯妥英鈉0.3 g），加水），加水50 mL溶解后，加稀鹽酸溶解后，加稀鹽酸10 mL，搖勻，用乙醚振搖，搖勻，用乙醚振搖提取提取5次，第一次次，第一次100 mL，以后每次各，以后每次各25 mL，合，合并乙醚液，用水洗滌并乙醚液，用水洗滌2次，每次次，每次5 mL，合并洗液，合并洗液，用乙醚用乙醚10 mL振搖提取，合并前后兩次得到的乙醚振搖提取，合并前后兩次得到的

6、乙醚液，置液，置105恒重的蒸發(fā)皿中，低溫蒸去乙醚，并恒重的蒸發(fā)皿中，低溫蒸去乙醚，并在在105干燥至恒重，精密稱定，所得殘?jiān)亓颗c干燥至恒重，精密稱定，所得殘?jiān)亓颗c1.087相乘，即得供試量中含苯妥英鈉相乘，即得供試量中含苯妥英鈉（C15H11N2NaO2）的重量。）的重量。 Wa: 試樣的重量；試樣的重量；Wb: 稱量形式的重量。稱量形式的重量。aWFbW)%(含量2.4 2.4 藥物含量測定方法藥物含量測定方法 3 滴定度的定義和計(jì)算：滴定度的定義和計(jì)算： 滴定度是指每毫升滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y成滴定度是指每毫升滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y成分的量（分的量（mg），以），以T表示，單位常用表示，單位

7、常用mg/mL。對于滴定反應(yīng)：。對于滴定反應(yīng)： aA + bB cC + dD 在滴定中，在滴定中，A與與B物質(zhì)之間存在化學(xué)計(jì)量關(guān)物質(zhì)之間存在化學(xué)計(jì)量關(guān)系（摩爾比）為系（摩爾比）為nA: nB= a: b，即，即 nB = b/anA， 化學(xué)分析法化學(xué)分析法3 滴定度的定義和計(jì)算：滴定度的定義和計(jì)算：若滴定液濃度為若滴定液濃度為CA (molL-1)，則，則 T = nbMB = b/aCAMB MB被測物質(zhì)的摩爾質(zhì)量。被測物質(zhì)的摩爾質(zhì)量。 T滴定度，單位常用滴定度，單位常用mg/mL。含量的計(jì)算含量的計(jì)算直接滴定法：直接滴定法：%100)%(WTV含量%100)%(WFTV含量規(guī)定摩爾濃度實(shí)

8、際摩爾濃度FF滴定液濃度校正因子滴定液濃度校正因子例：注射用異煙肼含量測定例：注射用異煙肼含量測定 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取本品約稱取本品約0.2 g，置，置100 mL量瓶中，加水使量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取25 mL，加水加水50 mL、鹽酸、鹽酸20 mL與甲基橙指示液與甲基橙指示液1滴，滴，用溴酸鉀滴定液（用溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）緩緩滴定）緩緩滴定（溫度保持在（溫度保持在1825）至粉紅色消失。）至粉紅色消失。每每1 mL的溴酸鉀滴定液（的溴酸鉀滴定液（0.0

9、1667 mol/L）相）相當(dāng)于當(dāng)于3.429 mg的異煙肼（的異煙肼（C6H7N3O）。）。 HNNH2NCO異煙肼Isoniazid例：注射用異煙肼含量測定例：注射用異煙肼含量測定反應(yīng)式：反應(yīng)式：3C6H7N3O + 2KBrO3 3C6H5NO2 + 3N2 + 3H2OC6H7N3O323MCTKBrOHNNH2NCO異煙肼Isoniazid)L/(429. 314.1372301667. 0mmgT%10001667. 0429. 3)%(33WCVKBrOKBrO含量%100)%(WFTV含量含量的計(jì)算含量的計(jì)算返滴定法（剩余滴定法或回滴法）：返滴定法（剩余滴定法或回滴法）：%10

10、0)()%(0WTFVVABBs含量FB滴定液滴定液B濃度校正因子濃度校正因子TA滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供試品的取樣量供試品的取樣量例：鹽酸去氧腎上腺素含量測定例：鹽酸去氧腎上腺素含量測定 取本品約取本品約0.1 g，精密稱定，置碘瓶中，加水，精密稱定，置碘瓶中，加水20 mL使溶解，精密加溴滴定液使溶解，精密加溴滴定液(0.05 mol/L) 50 mL，再加鹽酸，再加鹽酸5 mL,立即密塞，放置立即密塞，放置15分分鐘并時(shí)時(shí)振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液鐘并時(shí)時(shí)振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10 mL ，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液

11、定液(0.1 mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每用空白試驗(yàn)校正。每1 mL溴滴定液溴滴定液(0.05 mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于3.395 mg 的的C9H13NO2.HCl。 例：鹽酸去氧腎上腺素含量測定例：鹽酸去氧腎上腺素含量測定HClNHOHHO%1001 . 0)()%(3223220WTCVVAOSNaOSNas含量)/(395. 367.2033105. 02mLmgTBr反應(yīng)式：反應(yīng)式： C9H13NO2 + 3Br2 C9H10Br3NO2 + 3HBr

12、 Br2 + 2KI 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6%100)()%(0WTFVVABBs含量2.4 2.4 藥物含量測定方法藥物含量測定方法1 光譜分析法光譜分析法2 色譜分析法色譜分析法3 電化學(xué)分析法電化學(xué)分析法4 熱分析法熱分析法儀器分析法儀器分析法2.4 2.4 藥物含量測定方法藥物含量測定方法1 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法2 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法3 熒光光譜法熒光光譜法光譜分析法光譜分析法2.4 2.4 藥物含量測定方法藥物含量測定方法 紫外紫外-可見分光光度法是各國藥典常用的定可見分光光度法是各國藥典常用的定

13、量分析方法。量分析方法。 中國藥典對其所收載的藥物采用吸收系數(shù)中國藥典對其所收載的藥物采用吸收系數(shù)法、對照品法以及計(jì)算分光光度法求算含法、對照品法以及計(jì)算分光光度法求算含量。量。 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、操作簡便、樣品用量少優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、操作簡便、樣品用量少 缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不如重量法、容量法、專屬缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不如重量法、容量法、專屬性差性差 主要用于含量低制劑的含量測定主要用于含量低制劑的含量測定光譜分析法光譜分析法1直接分光光度法：直接分光光度法： 對照品法對照品法例：呋喃唑酮（痢特靈）含量測定例：呋喃唑酮（痢特靈）含量測定 供試品溶液與對照品溶液同時(shí)測定供試品溶液與對照品溶液同時(shí)測定 %100)%

14、(WDCx含量RRxxCAACAx、AR 供試品、對照品溶液的吸光度供試品、對照品溶液的吸光度Cx 、CR供試品、對照品溶液的濃度供試品、對照品溶液的濃度D 供試品溶液的體積供試品溶液的體積W 供試品的取樣量供試品的取樣量呋喃唑酮含量測定呋喃唑酮含量測定 避光操作。取本品約避光操作。取本品約20 mg，精密稱定，精密稱定，置置250 mL量瓶中，加二甲基甲酰胺量瓶中，加二甲基甲酰胺40 mL，振搖使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精振搖使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取密量取10 mL，置，置100 mL量瓶中，用水稀量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照紫釋至刻度，搖勻，作為供試品

15、溶液。照紫外外-可見分光光度法（附錄可見分光光度法（附錄 A），在），在367 nm的波長處測定吸光度；另取呋喃唑酮對的波長處測定吸光度；另取呋喃唑酮對照品適量，精密稱定，同法測定，計(jì)算，照品適量，精密稱定，同法測定，計(jì)算，即得。即得。 標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)標(biāo)示量百分?jǐn)?shù) 藥物制劑的含量通常以標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)表示，記為藥物制劑的含量通常以標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)表示，記為“標(biāo)示量（標(biāo)示量（%）”，即單位制劑中藥物的實(shí)際含，即單位制劑中藥物的實(shí)際含量與生產(chǎn)時(shí)處方量的比值，計(jì)算公式：量與生產(chǎn)時(shí)處方量的比值，計(jì)算公式：%100c%_BWWDx）標(biāo)示量（W、W和和B分別為樣品重、單位制劑的平均重量分別為樣品重、單位制劑的平均重

16、量和制劑的標(biāo)示量。和制劑的標(biāo)示量。例：呋喃唑酮片含量測定如下，計(jì)例：呋喃唑酮片含量測定如下，計(jì)算其算其 標(biāo)示量（標(biāo)示量（%） 取本品取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱出適量（約片，精密稱定，研細(xì)，精密稱出適量（約相當(dāng)于呋喃唑酮相當(dāng)于呋喃唑酮20 mg），置），置250 mL量瓶中，加二量瓶中，加二甲替甲酰胺甲替甲酰胺40 mL，溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻，溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過。棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液濾過。棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10 mL，置，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法，量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法，在在3671nm的波長處測

17、定吸收度。另取呋喃唑酮對的波長處測定吸收度。另取呋喃唑酮對照品約照品約20 mg，精密稱定，置，精密稱定，置250 mL量瓶中，加二量瓶中，加二甲替甲酰胺甲替甲酰胺40 mL，溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻，溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照液，同法測定，計(jì)算，即得。作為對照液，同法測定，計(jì)算，即得。%100A%_xBWWDCARR）標(biāo)示量（例：鹽酸氯丙嗪片的測定方法例：鹽酸氯丙嗪片的測定方法 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 優(yōu)點(diǎn)：不需標(biāo)準(zhǔn)品；優(yōu)點(diǎn)：不需標(biāo)準(zhǔn)品； 缺點(diǎn)：儀器精密度要求高缺點(diǎn)：儀器精密度要求高 鹽酸異丙嗪比吸收系數(shù)為鹽酸異丙嗪比吸收系數(shù)為915，測定，測定l l = 254 nm 操作：

18、取操作：取10片，除去糖衣后，精稱，研細(xì)片，除去糖衣后，精稱，研細(xì)稱取粉末稱取粉末適量適量加水、鹽酸溶解加水、鹽酸溶解過濾，取濾液于過濾，取濾液于254 nm處測處測定。即可計(jì)算。定。即可計(jì)算。 100%11cmxxEAcx例：鹽酸普納洛爾注射液的含量例：鹽酸普納洛爾注射液的含量 精密量取本品（規(guī)格：精密量取本品（規(guī)格：5 mL:5 mg）2 mL，用，用甲醇稀釋至每甲醇稀釋至每1 mL 中約含鹽酸普納洛爾中約含鹽酸普納洛爾20 m mg，搖勻，照分光光度法，在搖勻，照分光光度法，在290 nm 的波長處測的波長處測定吸收度，按定吸收度，按C16H21NO2.HCl 的吸收系數(shù)的吸收系數(shù) （1

19、cm 1%）為）為207 計(jì)算，即得。計(jì)算，即得。 %10010100207%3_BVVDAxx）標(biāo)示量（V-注射液的標(biāo)示體積：注射液的標(biāo)示體積：5 mLD-稀釋液的體積稀釋液的體積V-供試液的取樣量體積：供試液的取樣量體積：2 mLB-注射液的標(biāo)示量：注射液的標(biāo)示量：5 mg例：鹽酸氯丙嗪注射液的測定法例：鹽酸氯丙嗪注射液的測定法 注射液處方中有維生素注射液處方中有維生素C作抗氧劑作抗氧劑, 在在l l = 254 nm處有干擾處有干擾, 所以測定所以測定 l l 在在306 nm (次最大吸收波長次最大吸收波長)，該波長，該波長VC無干擾。無干擾。2萃取后分光光度法萃取后分光光度法 堿化，

20、有機(jī)溶劑萃取游離型堿，使其與制劑輔堿化，有機(jī)溶劑萃取游離型堿，使其與制劑輔料分離，再用分光光度法測定料分離，再用分光光度法測定 可避免注射劑中抗氧劑等附加劑的干擾可避免注射劑中抗氧劑等附加劑的干擾 例例:鹽酸異丙嗪注射劑的鹽酸異丙嗪注射劑的USP含量測定法含量測定法: 堿化堿化 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑(乙醚乙醚)提取提取 除水溶性雜除水溶性雜質(zhì)和酸性有機(jī)雜質(zhì)質(zhì)和酸性有機(jī)雜質(zhì) 酸化酸化 鹽酸液反提取鹽酸液反提取 除中性有機(jī)雜質(zhì)除中性有機(jī)雜質(zhì)3萃取雙波長分光光度法萃取雙波長分光光度法 堿化，有機(jī)溶劑萃取，在堿化，有機(jī)溶劑萃取，在254 nm、277 nm波波長處測定吸收，用吸收度之差計(jì)算含量，以消除長處

21、測定吸收，用吸收度之差計(jì)算含量，以消除抗氧劑干擾。氯丙嗪的最大吸收波長為抗氧劑干擾。氯丙嗪的最大吸收波長為254 nm，其氧化產(chǎn)物在此波長也有吸收，同時(shí)在其氧化產(chǎn)物在此波長也有吸收，同時(shí)在277 nm處氧化產(chǎn)物也有吸收，且其吸收度與在處氧化產(chǎn)物也有吸收，且其吸收度與在254 nm處吸收度相等，而氯丙嗪在處吸收度相等，而氯丙嗪在277 nm處無吸收。處無吸收。 A = A254-A2774鈀離子比色法鈀離子比色法 原理：吩噻嗪類藥物的二價(jià)硫在原理：吩噻嗪類藥物的二價(jià)硫在pH = 20.1 緩沖液中可與鈀離子緩沖液中可與鈀離子(Pd2+)形成紅色絡(luò)合物，形成紅色絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測定。借以進(jìn)行比

22、色測定。10 min呈色完全，可穩(wěn)呈色完全，可穩(wěn)定定2 h，l lmax = 500 nm，最適宜范圍，最適宜范圍50g 250g。 USP對奮乃靜糖漿、注射液及片劑含量測定。對奮乃靜糖漿、注射液及片劑含量測定。2 熒光光譜法熒光光譜法 熒光強(qiáng)度線性范圍較窄，在熒光強(qiáng)度線性范圍較窄，在0.52之間，若超過，應(yīng)調(diào)之間，若超過，應(yīng)調(diào)節(jié)試液濃度再測，當(dāng)濃度與熒光強(qiáng)度明顯偏離線性時(shí)，節(jié)試液濃度再測，當(dāng)濃度與熒光強(qiáng)度明顯偏離線性時(shí)，應(yīng)改用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。應(yīng)改用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。RrbrxbxxCRRRRc選定被測物質(zhì)的激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并選定被測物質(zhì)的激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并制備對照品和供試液，在線性范圍

23、內(nèi)測定：制備對照品和供試液，在線性范圍內(nèi)測定：Cx、CR- 供試品、對照品溶液的濃度供試品、對照品溶液的濃度Rx、Rr-供試品、對照品溶液的熒光強(qiáng)度供試品、對照品溶液的熒光強(qiáng)度Rxb、Rrb-供試品、對照品空白溶液的熒光強(qiáng)度供試品、對照品空白溶液的熒光強(qiáng)度例：利血平片含量例：利血平片含量 對照品溶液的制備：精密稱取利血平對照品對照品溶液的制備：精密稱取利血平對照品10 mg，置置100 mL 棕色量瓶中，加氯仿棕色量瓶中，加氯仿10 mL溶解后，再用溶解后，再用乙醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取乙醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取2 mL ，置，置100 mL 棕色量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

24、棕色量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取本品（規(guī)格：供試品溶液的制備：取本品（規(guī)格：0.25 mg）20片，片，如為糖衣片應(yīng)除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱如為糖衣片應(yīng)除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于利血平取適量（約相當(dāng)于利血平 0.5 mg），置），置100 mL 棕棕色量瓶中，加熱水色量瓶中，加熱水10 mL，搖勻后，加氯仿，搖勻后，加氯仿10 mL，振搖，用乙醇定量稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密振搖，用乙醇定量稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液，用乙醇定量稀釋成每量取續(xù)濾液，用乙醇定量稀釋成每1 mL 約含利血平約含利血平2g的溶液，即得。的溶液，

25、即得。例：利血平片含量例：利血平片含量 測定法：精密量取供試品溶液與對照品溶液各測定法：精密量取供試品溶液與對照品溶液各5 mL，分別置具塞試管中，加五氧化二釩試液分別置具塞試管中，加五氧化二釩試液2.0 mL，激烈，激烈振搖后，在振搖后，在30放置放置1 小時(shí)后，取出，于室溫時(shí)，照小時(shí)后，取出，于室溫時(shí)，照熒光分析法（附錄熒光分析法（附錄 E），在激發(fā)光波長），在激發(fā)光波長400 nm ，發(fā)射光波長發(fā)射光波長500 nm 處測定熒光讀數(shù)，計(jì)算，即得。處測定熒光讀數(shù)，計(jì)算，即得。%100%_BWWDcRRRRRrbrxbx）標(biāo)示量（W-供試品片粉的取樣量供試品片粉的取樣量W-平均片重平均片重B

26、-片劑的標(biāo)示量片劑的標(biāo)示量D-供試品的稀釋體積，按稀釋過程計(jì)算：供試品的稀釋體積，按稀釋過程計(jì)算：250 mL3 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法 對照品溶液的制備對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)精密稱取經(jīng)110干燥至恒重的分析純干燥至恒重的分析純氯化鈉約氯化鈉約1.0 g，置，置200 mL 量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取搖勻；精密量取5 mL ，置，置100 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。精密量取搖勻。精密量取1 mL、2 mL和和3 mL ，分別置，分別置3 個(gè)個(gè)100 mL

27、 量瓶中，再分別各加量瓶中，再分別各加10氯化鍶溶液氯化鍶溶液2 mL、4 mL和和6 mL ，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。用水稀釋至刻度，搖勻，即得。 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 精密量取本品約精密量取本品約13 g ，置，置250 mL 量瓶中，用水溶解并稀釋量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得溶液（至刻度，搖勻，即得溶液（1）；精密量?。痪芰咳? mL 置置100 mL 量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻量瓶中，用水稀釋到刻度，搖勻;再精密量取再精密量取1 mL,置置100 mL 量瓶中，加量瓶中，加10氯化鍶溶液氯化鍶溶液4 mL ，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。，加水稀釋至刻度

28、，搖勻，即得。 測定法測定法 取對照品與供試品溶液，照原子吸收分光光度法（附錄取對照品與供試品溶液，照原子吸收分光光度法（附錄 D含量測定法第一法），在含量測定法第一法），在589.0 nm 的波長處測定，計(jì)算，即的波長處測定，計(jì)算，即得。得。例：口服補(bǔ)液鹽散中總鈉含量的測定例：口服補(bǔ)液鹽散中總鈉含量的測定藥物含量測定方法藥物含量測定方法1 HPLC2 GC 特點(diǎn)：分離分析功能特點(diǎn)：分離分析功能 對復(fù)雜供試品分析有利對復(fù)雜供試品分析有利色譜分析法色譜分析法藥物含量測定方法藥物含量測定方法 HPLC法法優(yōu)點(diǎn)：分離度高、靈敏度好、優(yōu)點(diǎn)：分離度高、靈敏度好、 樣品用量少、重復(fù)性好樣品用量少、重復(fù)性好

29、 定量、鑒別同時(shí)進(jìn)行定量、鑒別同時(shí)進(jìn)行缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不如重量法、容量法缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不如重量法、容量法適用范圍：適用范圍： 1用于制劑、復(fù)方制劑含量測定用于制劑、復(fù)方制劑含量測定 2用于原料藥多組分或雜質(zhì)干擾含量測用于原料藥多組分或雜質(zhì)干擾含量測定定 3抗生素、激素類藥物抗生素、激素類藥物色譜分析法色譜分析法高效液相色譜儀器高效液相色譜儀器貯液器高壓泵壓力表進(jìn)樣器梯度洗脫裝置色譜柱記錄儀檢測器 餾分收集器高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)示意圖高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)示意圖nmsMX直線型直線型凸線型凸線型凹線型凹線型三種吸附等溫線和對應(yīng)的色譜峰形狀三種吸附等溫線和對應(yīng)的色譜峰形狀正常峰正常峰拖尾峰拖尾峰前伸峰前伸

30、峰對儀器的一般要求對儀器的一般要求12121212221RRRRRRRRWWttWWttR222/11654. 5WtWtnRR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttRtR - 保留時(shí)間保留時(shí)間n-理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)或或理論塔板數(shù)：理論塔板數(shù)：分離度：分離度：拖尾因子：拖尾因子：105. 02dWThW0.05h - 5%峰高處的峰寬峰高處的峰寬d1-峰頂點(diǎn)至峰前沿間的距離峰頂點(diǎn)至峰前沿間的距離分離度：分離度：12121212221RRRRRRRRWWttWWttR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttR或或除另有規(guī)定外，待測組分除另有規(guī)定外，

31、待測組分與相鄰共存物之間的分離與相鄰共存物之間的分離度應(yīng)大于度應(yīng)大于1.5。拖尾因子拖尾因子105. 02dWTh峰高法峰高法 定量時(shí)拖尾因子定量時(shí)拖尾因子在在0.95-1.05之間之間W0.05h - 5%峰高處的峰寬峰高處的峰寬d1-峰頂點(diǎn)至峰前沿間的距離峰頂點(diǎn)至峰前沿間的距離峰高法峰高法例：醋酸氟輕松乳膏的含量測定例：醋酸氟輕松乳膏的含量測定-內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法1. 對照品溶液的制備對照品溶液的制備 取醋酸氟輕松對照品約適量，精密稱定，加甲醇溶取醋酸氟輕松對照品約適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋至每解并定量稀釋至每1 mL中約含中約含0.125 mg的溶液，精的溶液，精密量取該溶液密量取該

32、溶液10 mL與內(nèi)標(biāo)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液5 mL，置，置50 mL量瓶量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。 2. 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取本品（規(guī)格：取本品（規(guī)格：10 g:2.5 mg）適量（約相當(dāng)于醋）適量（約相當(dāng)于醋酸氟輕松酸氟輕松1.25 mg），精密稱定，置），精密稱定，置50 mL量瓶中，量瓶中，加甲醇約加甲醇約30 mL,置置80oC水浴中加熱水浴中加熱2分鐘，振搖使醋分鐘，振搖使醋酸氟輕松溶解，放冷至室溫，精密加內(nèi)標(biāo)溶液酸氟輕松溶解，放冷至室溫，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻2小時(shí)以

33、上，小時(shí)以上，取出后迅速濾過，放至室溫，取續(xù)濾液。取出后迅速濾過，放至室溫，取續(xù)濾液。 3. 內(nèi)標(biāo)溶液的配制內(nèi)標(biāo)溶液的配制 取炔諾酮適量，加甲醇制成每取炔諾酮適量，加甲醇制成每1 mL中約含中約含0.15 mg的的溶液，即得。溶液，即得。例：醋酸氟輕松乳膏的含量測定例：醋酸氟輕松乳膏的含量測定 操作步驟：操作步驟： 分別精密吸取上述對照品溶液與供試分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各品溶液各20L 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長檢測器，于波長240 nm處測定，記錄色譜圖，按處測定，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量。內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量

34、。 %1005 . 21050/%WcAAfSSx）標(biāo)示量（BBSScAcAf/f - 校正因子校正因子AR、AS -對照溶液色譜圖中對照品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積對照溶液色譜圖中對照品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積cR、cS -對照溶液色譜圖中對照品和內(nèi)標(biāo)物的濃度對照溶液色譜圖中對照品和內(nèi)標(biāo)物的濃度,mg/mLAS - 供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積Ax - 供試品溶液中待測物的峰面積供試品溶液中待測物的峰面積cS - 供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物的濃度，供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物的濃度，mg/mLW -供試品的取樣量供試品的取樣量; 50-供試品的稀釋體積（供試品的稀釋體積（D），），mL；2.5-標(biāo)示量（

35、標(biāo)示量（B），），mg; 10-平均裝量（平均裝量（W），），g； 例：替硝唑栓的含量測定例：替硝唑栓的含量測定-外標(biāo)法外標(biāo)法 測定法測定法 取本品取本品10粒（規(guī)格：粒（規(guī)格：0.2 g），精密稱定，切），精密稱定，切成碎末，精密稱取適量（約相當(dāng)于替硝唑成碎末，精密稱取適量（約相當(dāng)于替硝唑120 mg），），置置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，水浴中加熱并時(shí)時(shí)量瓶中，加流動(dòng)相適量，水浴中加熱并時(shí)時(shí)振搖使替硝唑溶解，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖振搖使替硝唑溶解，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。置冰浴中冷卻勻。置冰浴中冷卻1小時(shí)，取出后迅速濾過，放至室溫，小時(shí)，取出后迅速濾過，放至室溫，精密量

36、取續(xù)濾液精密量取續(xù)濾液5 mL，置，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取釋至刻度，搖勻，精密量取20L注入液相色譜儀，記注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取替硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加流錄色譜圖，另取替硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含中約含120g的溶液，的溶液，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 例：替硝唑栓的含量測定例：替硝唑栓的含量測定-外標(biāo)法外標(biāo)法%1001000%_BWWDAAcRxR）標(biāo)示量（AR、Ax -對照溶液和對照品溶液的峰面積對照溶液和對照

37、品溶液的峰面積cR-對照溶液色譜圖中的濃度對照溶液色譜圖中的濃度, m mg/mLAx - 供試品溶液中待測物的峰面積供試品溶液中待測物的峰面積W -供試品的取樣量供試品的取樣量; D-供試品的稀釋體積（供試品的稀釋體積（D），），mL，1000；B -標(biāo)示量，標(biāo)示量，mg; 1000-換算因素；換算因素； W - 栓劑的平均粒重栓劑的平均粒重藥物含量測定方法藥物含量測定方法 2 GC壓力表色譜柱記錄儀檢測器高壓氣瓶減壓閥轉(zhuǎn)子流量計(jì)氣化室色譜恒溫室皂膜流速計(jì)氣流調(diào)解閥凈化干燥管檢測器橋路氣相色譜儀單氣路流程示意圖氣相色譜儀單氣路流程示意圖 氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)氣相色譜儀的結(jié)構(gòu) 氣相色譜儀由五大系統(tǒng)

38、組成：氣相色譜儀由五大系統(tǒng)組成： 氣路系統(tǒng)氣路系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng)分離系統(tǒng) 控溫系統(tǒng)控溫系統(tǒng) 檢測和記錄系統(tǒng)檢測和記錄系統(tǒng)常用檢測器的性能常用檢測器的性能 a 火焰離子化檢測器（火焰離子化檢測器（FID） b 熱導(dǎo)檢測器（熱導(dǎo)檢測器（TCD） c 電子俘獲檢測器（電子俘獲檢測器（ECD） d 微型微型ECD e 氮磷檢測器（氮磷檢測器（NPD） f 火焰光度檢測器（火焰光度檢測器（FPD） g 脈沖脈沖FPD（PFPD）靈敏度靈敏度 當(dāng)一定濃度或一定質(zhì)量的組分進(jìn)入檢測器，產(chǎn)當(dāng)一定濃度或一定質(zhì)量的組分進(jìn)入檢測器，產(chǎn)生一定的相應(yīng)信號生一定的相應(yīng)信號R，一進(jìn)樣量，一進(jìn)樣量c（mg/cm3

39、或或g/s）對響應(yīng)信號（）對響應(yīng)信號（R）作圖得到一條通過原點(diǎn)）作圖得到一條通過原點(diǎn)的直線，的直線，直線的斜率就是檢測器的靈敏度直線的斜率就是檢測器的靈敏度（S）。 因此，靈敏度定義為信號因此，靈敏度定義為信號（R）對進(jìn)入檢測器的組分）對進(jìn)入檢測器的組分 量（量（c）的變化率：）的變化率：CRS0RN2RNRcRc檢測器檢測器R-c關(guān)系圖關(guān)系圖靈敏度靈敏度 對于濃度型：對于濃度型：SC：靈敏度：靈敏度(mVcm3mg-1) ；Ai：色譜峰面積：色譜峰面積, cm2，現(xiàn)在微處理出來為，現(xiàn)在微處理出來為Vs；C2：記錄儀：記錄儀靈敏度，靈敏度，mV/cm ；C1：走紙速度，：走紙速度，cm/min

40、；FC：檢測器入口載氣流速度，：檢測器入口載氣流速度，cm3/m；Wi：進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：mg。對于質(zhì)量型：對于質(zhì)量型：12CwFCASicic1260CwACSiimSm：靈敏度（：靈敏度（mVsg-1）最小檢測量最小檢測量 指產(chǎn)生二倍噪聲峰高時(shí)，色譜體系（即色指產(chǎn)生二倍噪聲峰高時(shí)，色譜體系（即色譜儀）所需進(jìn)樣量。是被測物能被定量測譜儀）所需進(jìn)樣量。是被測物能被定量測定的最低限。（定的最低限。（LOQ） 檢出限時(shí)用來衡量檢測器的性能，最小檢檢出限時(shí)用來衡量檢測器的性能，最小檢測量不僅與檢測器的性能有關(guān)，還與色譜測量不僅與檢測器的性能有關(guān)，還與色譜柱的柱效及操作條件有關(guān)。柱的柱效及操作條件有關(guān)。

41、最小檢測量最小檢測量 對于濃度型：最小檢測量（單位：對于濃度型：最小檢測量（單位：mg）為：）為： 對于質(zhì)量型：最小檢測量（單位：對于質(zhì)量型：最小檢測量（單位：g）為：）為：cccDCFWW12/10065. 1mmDCWW12/1060065. 1線性范圍線性范圍 檢測信號呈線性時(shí)最大和最小進(jìn)樣量之比，檢測信號呈線性時(shí)最大和最小進(jìn)樣量之比，或叫最大允許進(jìn)樣量（濃度）與最小檢測量或叫最大允許進(jìn)樣量（濃度）與最小檢測量（濃度）之比，即（濃度）之比，即cA/cA。 氫焰檢測器的線性范圍氫焰檢測器的線性范圍 可達(dá)可達(dá)107；熱導(dǎo)池檢測器；熱導(dǎo)池檢測器 的線性范圍在的線性范圍在105左右。左右。0Rc

42、cAcA對儀器的一般要求對儀器的一般要求12121212221RRRRRRRRWWttWWttR222/11654. 5WtWtnRR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttRtR - 保留時(shí)間保留時(shí)間n-理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)或或理論塔板數(shù)：理論塔板數(shù)：分離度：分離度：定量校正因子定量校正因子幾種常用的定量計(jì)算方法幾種常用的定量計(jì)算方法歸一化法：組分量占全部的比例歸一化法：組分量占全部的比例 面積歸一化即不加入校正因子直接歸一化面積歸一化即不加入校正因子直接歸一化 加校正因子的面積歸一化法：加校正因子的面積歸一化法：外標(biāo)法外標(biāo)法 操作要求高操作要求高內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法：標(biāo)準(zhǔn)溶

43、液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法%1002211nniiifAfAfAfAx%100%siiiAAKxisiissiimmfmmffK標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法 標(biāo)準(zhǔn)加入法，又名標(biāo)準(zhǔn)增量法，將一定量已知濃標(biāo)準(zhǔn)加入法，又名標(biāo)準(zhǔn)增量法，將一定量已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入待測樣品中，測定加入前后樣度的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入待測樣品中，測定加入前后樣品的濃度，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法測定含量，在扣品的濃度，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法測定含量，在扣除加入的對照品溶液的含量，即得供試品待測成除加入的對照品溶液的含量，即得供試品待測成分的含量。分的含量。 由于加入對照品溶液的前后校正因子相同，即由于加入對照品溶液的前后校正因子相同，即1)/(

44、cxxiSxAAc）含量（xxxxiScccAA例：月桂氮卓酮的含量測定例：月桂氮卓酮的含量測定 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取本品取本品20 mg，精密稱定，置，精密稱定，置10 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。操作步驟：操作步驟： 1. 校正因子測定校正因子測定 取月桂氮卓酮對照品約取月桂氮卓酮對照品約20 mg，精密稱定，置，精密稱定，置10 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取 1 m mL注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。 2. 樣品測定樣品測定 精密量取上述對照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣精密量取上述對照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣35次，次，每次約每次約1 m mL，注入氣相色