第二章 藥物的鑒別試驗(yàn)

1、第二章 藥物的鑒別試驗(yàn)第一節(jié) 定義與目的v定義：根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)?。v目的：不是對(duì)未知物進(jìn)行定性分析，而是證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所收載的藥物。v意義：它是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首項(xiàng)任務(wù)，只有在藥物鑒別無(wú)誤的情況下，進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定等分析才有意義。藥物的鑒別試驗(yàn)藥物的鑒別試驗(yàn)v性質(zhì)：藥物鑒別試驗(yàn)的試驗(yàn)方法雖有一定的專屬性，但不足以確證其結(jié)構(gòu)，因此不能賴以鑒別未知物。v化學(xué)藥物的結(jié)構(gòu)確證不同于藥物鑒別試驗(yàn)，其主要任務(wù)是確認(rèn)所制備的原料藥的結(jié)構(gòu)是否正確，適用于未知化合物的鑒別或者目標(biāo)對(duì)象的結(jié)構(gòu)確認(rèn)。v項(xiàng)目鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)

2、方法僅用于鑒別藥物的真?zhèn)?，?duì)于原料藥，還應(yīng)結(jié)合性狀項(xiàng)下的外觀和物理常數(shù)進(jìn)行確認(rèn)。v一、性狀v性狀：反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、溶解度和物理常數(shù)等。v(一)外觀：指藥品的外表感觀和色澤，包括藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目例子：vCHP2010中鹽酸異丙嗪的性狀描述：v本品為白色或乳白色結(jié)晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液顯酸性反應(yīng)。v鹽酸異丙嗪片的性狀描述：本品為糖衣片，除去包衣后顯白色。色澤色澤晶晶型型聚集狀態(tài)聚集狀態(tài)氣味氣味v2、溶解度：一定程度上反映了藥品的純度、晶型或粒度。藥品在不同溶劑中的溶解性能用“極易溶解、易溶、溶

3、解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來(lái)描述。v3、物理常數(shù)：用于藥品鑒別，反映其純雜程度。藥典收載的物理常數(shù)包括：相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。 (1) 熔點(diǎn)熔點(diǎn)固體熔化成液體的溫度固體熔化成液體的溫度熔融同時(shí)分解的溫度熔融同時(shí)分解的溫度自自初熔初熔至至全熔全熔的一段溫度的一段溫度例子：例子：雌二醇雌二醇熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)為熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)為175175180180；格列本脲格列本脲的熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)為的熔點(diǎn)：本品的熔點(diǎn)為170170174174。CHP2010收載收載有三種測(cè)定方法有三種測(cè)定方法（2） 比旋度比旋度 在一定波長(zhǎng)與溫度

4、下，偏振光透過(guò)長(zhǎng)在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm且每且每1ml中含有旋光性物質(zhì)中含有旋光性物質(zhì)1g1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。 作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)，用以區(qū)別藥品、檢查純度或測(cè)定制劑的含量。以區(qū)別藥品、檢查純度或測(cè)定制劑的含量。維生素維生素C的比旋度測(cè)定：的比旋度測(cè)定：20.521.5例子例子OOHOOHHOHHO手性手性（3） 吸收系數(shù)吸收系數(shù) 在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。有單位濃度、單位液層厚度時(shí)

5、的吸收度稱為吸收系數(shù)。有摩爾吸收系數(shù)與百分吸收系數(shù)兩種。摩爾吸收系數(shù)與百分吸收系數(shù)兩種。 中國(guó)藥典收載是中國(guó)藥典收載是%1cm1E例子例子鹽酸氨溴索吸光系數(shù)測(cè)定其為鹽酸氨溴索吸光系數(shù)測(cè)定其為233247不僅可以用來(lái)考察不僅可以用來(lái)考察原料藥的質(zhì)量，還原料藥的質(zhì)量，還是是UV測(cè)定含量的依測(cè)定含量的依據(jù)據(jù)二、一般鑒別試驗(yàn)（General Identification Test）只能證實(shí)是只能證實(shí)是某一類某一類藥物，而不能證實(shí)是藥物，而不能證實(shí)是哪一種哪一種藥物！藥物！只適用于只適用于純品純品，混合藥物混合藥物或有干擾時(shí)或有干擾時(shí)不適用不適用！ 依據(jù)某一類藥物的依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)化學(xué)結(jié)構(gòu)或或物

6、化性質(zhì)物化性質(zhì)的特征，的特征，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別鑒別藥物的藥物的真?zhèn)握鎮(zhèn)?。v中國(guó)藥典附錄收載的一般鑒別項(xiàng)目v 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、無(wú)機(jī)金屬鹽類、有機(jī)酸鹽、無(wú)機(jī)酸鹽鈉、鉀、鋰、鎂、鈉、鉀、鋰、鎂、鐵、鈣、。鐵、鈣、。水楊酸、苯甲酸等水楊酸、苯甲酸等亞硫酸、亞硫酸氫亞硫酸、亞硫酸氫鹽等鹽等1.有機(jī)氟化物有機(jī)氟化物OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH+Ce3pH4.3OOOOCH2NCeCH2COOHCH2COOHFF-（茜素氟藍(lán)）（藍(lán)紫色絡(luò)合物）+有機(jī)氟化物變有機(jī)氟化物變成無(wú)機(jī)氟化物成無(wú)機(jī)氟化物2.有機(jī)酸鹽有機(jī)酸鹽FeCl3反應(yīng)反應(yīng): :

7、加稀加稀HClHCl，即析出，即析出白色沉淀白色沉淀；分離，沉淀溶于；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液。醋酸銨溶液。OHOHOOOOFeOHFeCl3H2O3HCl+中性時(shí)呈中性時(shí)呈紅色紅色酸性時(shí)呈酸性時(shí)呈紫色紫色水楊酸鹽水楊酸鹽v酒石酸鹽:取供試品中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，即生成游離銀并附在試管內(nèi)壁形成銀鏡。CCHOHOCOOHCOOHHH+2Ag(NH3)2OH2Ag+CCCOONH4COONH4HOHO+2NH32H2O+3、芳香第一胺類:NH2R+NaNO2+2HClN2ClR+NaCl + 2H2O（偶氮反應(yīng)）N2ClR+OH+NaOHNRNHO+ NaC

8、l+ H2O（縮合反應(yīng)）v橙黃到橙黃到猩紅色猩紅色4、托烷生物堿類:Vitali反應(yīng)ROOOHNO2NO2O2NOHHOOCOHHOOC水解3HNO3NNO2O2NOHHOOCOOHNNO2O2NOHHOOKKOHC2H2OHKOH（托烷類）（莨菪酸）（三硝基衍生物）（深紫色）托烷生物托烷生物堿均有莨堿均有莨菪酸結(jié)構(gòu)菪酸結(jié)構(gòu)醌型醌型產(chǎn)物產(chǎn)物Vitali反應(yīng)反應(yīng)5、無(wú)機(jī)金屬鹽:v焰色反應(yīng)鑒定:v 焰色反應(yīng)是某些金屬或它們的揮發(fā)性化合物在無(wú)色火焰中灼燒時(shí)使火焰呈現(xiàn)特征的顏色的反應(yīng).有些金屬或它們的化合物在灼燒時(shí)能使火焰呈特殊顏色。這是因?yàn)檫@些金屬元素的原子在接受火焰提供的能量時(shí)，其外層電子將會(huì)被激

9、發(fā)到能量較高的激發(fā)態(tài)。處于激發(fā)態(tài)的外層電子不穩(wěn)定，又要躍遷到能量較低的基態(tài)。不同元素原子的外層電子具有著不同能量的基態(tài)和激發(fā)態(tài)。在這個(gè)過(guò)程中就會(huì)產(chǎn)生不同的波長(zhǎng)的電磁波，如果這種電磁波的波長(zhǎng)是在可見(jiàn)光波長(zhǎng)范圍內(nèi)，就會(huì)在火焰中觀察到這種元素的特征顏色。利用元素的這一性質(zhì)就可以檢驗(yàn)一些金屬或金屬化合物的存在。這就是物質(zhì)檢驗(yàn)中的焰色反應(yīng)。 v常見(jiàn)的焰色反應(yīng)： 鈉黃鉀紫鈣磚紅 鋇黃綠等.NH4+ OHNH3+H2OHg2Cl2+2Hg（黑色）+Hg(NH2)Cl +NH4Cl2NH3（使石蕊試紙變藍(lán)）（使硝酸亞汞濾紙變黑）另外銨鹽的檢測(cè)另外銨鹽的檢測(cè):6、無(wú)機(jī)酸根的鑒別:v氯化物:硝酸銀鑒定法、二氧化錳

10、氧化法v硫酸鹽:氯化鋇鑒定法、醋酸鉛鑒定法、鹽酸排除法v硝酸鹽:硫酸及硫酸亞鐵顯棕色法、與銅反應(yīng)生成紅棕色蒸氣、高錳酸鉀排除法三、專屬鑒別試驗(yàn)（Specific Identification Test） 是證實(shí)是證實(shí)某一種藥物某一種藥物的依據(jù)，它是根據(jù)的依據(jù)，它是根據(jù)每一每一種種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異差異及其所引起的物理化學(xué)及其所引起的物理化學(xué)特性特性的的不同不同，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來(lái)鑒別藥物真?zhèn)?。?lái)鑒別藥物真?zhèn)?。NHNHCOOO123456司可巴比妥NHNHSOOO123456硫噴妥鈉例子例子:同屬巴同屬巴比妥類比妥類使溴褪色使溴褪色硫化鉛沉淀

11、硫化鉛沉淀藥物鑒別藥物鑒別一般鑒別一般鑒別專屬鑒別專屬鑒別以某些類別藥物的以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)據(jù),根據(jù)其相同的物根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別物真?zhèn)蔚蔫b別,可以可以區(qū)別不同藥物區(qū)別不同藥物類別類別在一般鑒別的基礎(chǔ)上在一般鑒別的基礎(chǔ)上,利利用各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的用各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異來(lái)鑒別藥物差異來(lái)鑒別藥物,可以區(qū)可以區(qū)別同類藥物或具有相同別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物物單體單體第三節(jié) 鑒別方法化化學(xué)學(xué)鑒鑒別別法法呈色反應(yīng)鑒別法呈色反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法

12、氣體生成反應(yīng)鑒別法氣體生成反應(yīng)鑒別法測(cè)定生成物的熔點(diǎn)測(cè)定生成物的熔點(diǎn)使試劑褪色的鑒別法使試劑褪色的鑒別法Vitali氯化物氯化物硫酸奎寧硫酸奎寧維維C胺胺(銨銨)應(yīng)用少應(yīng)用少光光譜譜鑒鑒別別法法UV鑒別法鑒別法IR鑒別法鑒別法NIR鑒別法鑒別法AAS鑒別法鑒別法NMR鑒別法鑒別法MS鑒別法鑒別法XRD鑒別法鑒別法紫外紫外近紅外近紅外紅外紅外原子吸收原子吸收核磁共振核磁共振質(zhì)譜法質(zhì)譜法X射線衍射線衍射射Rf=從基線至展開(kāi)斑點(diǎn)中心的距離從基線至展開(kāi)劑前沿的距離色色譜譜鑒鑒別別法法TLC鑒別法鑒別法HPLC鑒別法鑒別法GC鑒別法鑒別法顏色顯顯微微鑒鑒別別法法生物學(xué)鑒別法利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有關(guān)技

13、術(shù)來(lái)鑒利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有關(guān)技術(shù)來(lái)鑒定藥物品質(zhì)的一種方法定藥物品質(zhì)的一種方法,主要用于抗生素、主要用于抗生素、生物藥物以及中藥的鑒別生物藥物以及中藥的鑒別,通常分為生物通常分為生物效應(yīng)鑒別法和基因鑒別法兩大類效應(yīng)鑒別法和基因鑒別法兩大類.按對(duì)象目的不同可分為：免疫鑒別法、按對(duì)象目的不同可分為：免疫鑒別法、細(xì)胞生物學(xué)鑒別法、生物效價(jià)鑒別法、細(xì)胞生物學(xué)鑒別法、生物效價(jià)鑒別法、純指標(biāo)鑒別法、純指標(biāo)鑒別法、DNA遺傳標(biāo)記法，遺傳標(biāo)記法，mRNA差異顯示鑒別法差異顯示鑒別法指紋圖譜與特征指紋圖譜與特征圖譜鑒別法圖譜鑒別法1.1.紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法( (Ultraviolet spectr

14、ophotometry) )美法侖 測(cè)定測(cè)定maxmax，或同時(shí)測(cè)定，或同時(shí)測(cè)定minmin； 測(cè)定一定濃度的供試液在測(cè)定一定濃度的供試液在maxmax處的處的A A 規(guī)定規(guī)定和和E E 規(guī)定規(guī)定 和和A A1 1/A/A2 2 經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。收光譜特性。122.2.紅外光譜鑒別法紅外光譜鑒別法( (Infrared spectrophotometry) ) 用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合不易區(qū)別的同類藥物，專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛。合不易區(qū)別的同類藥物，專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛。Ch.PCh.P

15、和和BPBP均采用均采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法USPUSP采用采用對(duì)照品法對(duì)照品法試樣制備方法：試樣制備方法： 壓片法、糊法、膜法、溶液法壓片法、糊法、膜法、溶液法特征區(qū)指紋區(qū)3.質(zhì)譜鑒別法質(zhì)譜鑒別法 (Mass Spectrometry)9-HO-LPT #1664 RT: 9.39 AV: 1 NL: 5.18E6T: + c sid=-10.00 Q3MS 50.00-500.0050100150200250300350400450500m/z0102030405060708090100Relative Abundance427.17428.18432.18102.02274.21

16、318.2359.94302.22415.1768.96129.93362.28433.21246.16218.16144.95473.234.4.原子吸收法原子吸收法( (Atomic Absorption) ) 利用原子蒸氣可以吸收由該元素作為陰極的利用原子蒸氣可以吸收由該元素作為陰極的空心陰極燈發(fā)出的特征譜線的特性，根據(jù)供試溶空心陰極燈發(fā)出的特征譜線的特性，根據(jù)供試溶液在特征譜線處的最大吸收和特征譜線的強(qiáng)度減液在特征譜線處的最大吸收和特征譜線的強(qiáng)度減弱程度進(jìn)行定性、定量分析。弱程度進(jìn)行定性、定量分析。5.5.X X射線粉末衍射法射線粉末衍射法晶體對(duì)晶體對(duì)X X射線會(huì)產(chǎn)生衍射現(xiàn)象射線會(huì)產(chǎn)生衍射現(xiàn)象, ,不同的物質(zhì)有其特定的衍射圖不同的物質(zhì)有其特定的衍射圖 利用不同物質(zhì)在不同利用不同物質(zhì)在不同色譜條件色譜條件下，產(chǎn)生各自的下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（特征色譜行為（比移值比移值或或保留時(shí)間保留時(shí)間）進(jìn)行的鑒別）進(jìn)行的鑒別試驗(yàn)。試驗(yàn)。 采用與對(duì)照品在相同條件下進(jìn)行色譜分離，并采用與