研究生開題報告

1、附件一學術學位研究生學位論文開題報告要求研究生學位論文開題報告是研究生培養(yǎng)過程的重要環(huán)節(jié)，直接關系到碩士研究生學位論文的質量。為了保證和促進學術學位研究生按期完成開題報告，現將有關事項具體要求如下：一、開題報告的時間一般在第二學期結束后，研究生在導師指導下擬訂論文工作計劃，在文獻閱讀、科研調研的基礎上遞交開題報告，由醫(yī)院定期組織學位論文集中開題報告會。二、選題的原則選題是要注意以下原則：課題的創(chuàng)新性、科學性、可行性及實用性。三、開題報告匯報的內容1、課題的來源、選題的依據及意義（包括科學意義和發(fā)展前景，國內外研究生概況、發(fā)展趨勢）。2、研究內容、技術路線和預期結果（包括具體內容、總體安排、進度

2、和階段完成目標） 。3、研究過程中可能遇到的問題和解決方法。4、已具備的研究條件和經費使用情況。四、開題報告的要求1、開題報告由醫(yī)院集中組織進行，并聘請相關學科專家參加論證，廣泛聽取意見。2、開題報告后，研究生將開題報告情況和專家提出的修改意見進行整理，填入研究生培養(yǎng)手冊中的“學位論文開題報告欄”。3、課題計劃一經批準，一般不再變更，若有特殊情況需要更換課題，必須重新開題，并按以上程序進行。五、組織與管理1、研究生應按照“開題報告的內容”逐項撰寫不少于3000字的開題報告。2、開題報告評議專家組一般由三到五名副高及以上職稱的專家組成。3、由醫(yī)教部教務科組織召開開題答辯會議，研究生準備5分鐘的P

3、PT在會議上作開題陳述，開題報告評議專家對該生的論文選題進行集體評議并給出建議。4、開題報告通過者，研究生根據專家組提出的建議，對開題報告進行完善，并填入研究生培養(yǎng)手冊中的“學位論文開題報告欄”。5、開題報告不通過者，應重新選題并由所在學科點和導師在一個月內重新組織開題。6、開題答辯會面向全院公開，相關、相近專業(yè)的導師和研究生必須參加，未參加者不準予開題。附件二新橋醫(yī)院研究生學位開題報告申請表姓 名孟凡飛年 級2014培養(yǎng)科室檢驗科學 號2002014547學科專業(yè)臨川檢驗診斷導 師蒲曉允人員類別博士 在職博士研究生 碩士 在職碩士研究生 擬定題目穿孔素適配體的篩選與鑒定內容是否涉密學位類別學

4、術學位聯系方師意見（請推薦5名論證專家。） 導 師：年 月 日推 薦 專 家姓 名部 職 別聯系電話科室意見科室主任： 年 月 日 醫(yī)院意見 年 月 日 備 注第三軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院碩士研究生開題論證報告摘要姓 名孟凡飛學 號2002014547導師姓名蒲曉允學科專業(yè)臨床檢驗診斷學位類別科學學位（ ）專業(yè)學位（ ）課題名稱穿孔素適配體的篩選與鑒定課題來源國家自然科學基金課題經費（萬元）80萬主要研究內 容1.構建ssDNA文庫及引物合成：構建長度為81個nt的隨機ssDNA文庫（南京全式金公司）兩端為固定序列，中間35個nt為隨機序列，庫容量大約為1010，庫的序列

5、為P81ss庫：CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-(N35)-AGTATCGCTAATCAGGCGGAT，引物P81-SP: 5 ' -CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-3'；引物P81-AP: 5 ' Biotin-ATCCGCCTGATTAGCGATACT-3 '. 2.羧基磁珠包被蛋白：定量穿孔素蛋白溶液與定量磁珠孵育，利用蛋白定量試劑盒計算穿孔素蛋白包被的效率。3.SELEX過程：適配子篩選主要包括結合、分離、擴增、分離ssDNA、再結合等重復步驟，其中篩選過程主要是在BSA包被的EP管中，ssDNA與酵母tRNA 競

6、爭結合包被了穿孔素蛋白的磁珠，置磁力架吸棄上清，洗去未結合的ssDNA，重復3次。 4.轉化與測序：將篩選到的ssDNA序列裝入了TA載體轉化入大腸桿菌DH5，挑取單克隆菌株進行通用引物 PCR，將PCR產物純化后進行DNA測序。 5.親和力檢測及二級結構預測：篩選到的幾條ssDNA序列進行native-PAGE電泳，以原始ssDNA文庫為對照，選取親和力最強的適配體預測其二級結構，不同濃度的適配體同定量的穿孔素蛋白進行native-PAGE電泳，得到結合力最佳的適配體濃度。 6.特異性檢測：將所得的適配體，同-干擾素、牛血清白蛋白、補體C9在硝酸纖維素薄膜上進行適配體印記實驗，檢測適配體特異

7、性。預期研究目 標1 篩選出高親和力，高特異性的穿孔素適配體序列。2 獲取同穿孔素蛋白結合力最佳的適配體濃度。3 研制出實現上述目標的檢測試劑和規(guī)范的操作流程。4主要創(chuàng)新點及科學意 義穿孔素蛋白是機體內具有細胞毒作用的效應分子，儲存在細胞毒性T細胞和NK細胞胞質顆粒中，兩種效應細胞與靶細胞接觸時，釋放的穿孔素通過聚合作用而在靶細胞表面形成小孔，從而介導殺傷作用。因此穿孔素蛋白的檢測可協助了解活化T淋巴細胞的數量，從而反映出機體細胞免疫功能狀態(tài)，為臨床醫(yī)生選擇最佳的治療方案、觀察治療效果和判斷愈后提供幫助。適配體是一小段經體外篩選得到的寡核苷酸序列,能與相應的配體進行高親和力和強特異性的結合，具

8、有疾病診斷與治療的應用潛力。本研究鑒于穿孔素蛋白檢測的意義，篩篩選出特異的穿孔素適配體并加以鑒定，為以后穿孔素研究及構建新的檢測方法提供支持。技術路線及 研 究方案（含主要技術指標與檢測方法）適配體印記實驗，檢測適配體特異性結合力最佳的適配體濃度檢測二級結構預測native-PAGE電泳，選取親和力最強的適配體產物純化后進行DNA測序轉化后挑取單克隆進行通用引物 PCRSELEX篩選，產物PCR擴增，PCR產物純化，分離ssDNA文庫穿孔素蛋白包被羧基磁珠建立ssDNA文庫及合成引物穿孔素適配體的篩選與鑒定可 行 性分 析1. 檢驗醫(yī)學上有需求：適配體特異性強、制備簡單、無免疫原性且利于儲存，

9、其獨特的優(yōu)越性，已成為醫(yī)學檢驗研究的熱點和重要的檢測工具。2. 有課題實施經驗:：課題組先后承擔國家自然科學基金、國家“863”和國防預研項目等國家級項目，具有豐富的科研項目設計、組織、實施經驗，能夠保證項目的開展。3. 研究團隊有保證：導師及項目組成員長期從事醫(yī)學快速檢測、微流控技術及適配體傳感器研究工作，掌握本項目有關的實驗技術與方法。經費預算ssDNA文庫的建立及引物設計 500羥基磁珠 2000 PCR試劑 3000Native-PAGE試劑配制 3000其他試劑 2000DNA測序 2000穿孔素蛋白 12000導師意見導師簽名：填表說明：1.“課題來源”按自選、國家、軍隊或地方課題填寫，如“國家自然基金”；2.“主要研究內容”應集中，研究預期目標要明確；3.“主要創(chuàng)新點、科學意義”及“技術路線”要簡明扼要；4.“可行性分析”應從立論依據、技術