化學(xué)生物學(xué)化學(xué)物質(zhì)與核酸的相互作用

1、 化學(xué)物質(zhì)與核酸的化學(xué)物質(zhì)與核酸的相互作用相互作用化學(xué)物質(zhì) 核酸 破壞模板作用 核酸鏈斷裂 影響基因調(diào)控和表達(dá)功能 抗腫瘤藥物的母體 癌變的預(yù)警標(biāo)示物 一切生物的變異和進(jìn)化都可以認(rèn)為是由于DNA結(jié)構(gòu)的改變而引起蛋白質(zhì)組成和性質(zhì)變化的結(jié)果 郝璐璐郝璐璐 整容前整容前郝璐璐郝璐璐 整容后整容后呵呵，奇怪，這一株呵呵，奇怪，這一株水稻結(jié)出的稻谷好大水稻結(jié)出的稻谷好大拿它作種子明年肯定拿它作種子明年肯定大豐收大豐收!大量的事實(shí)告訴我們，生物是能夠大量的事實(shí)告訴我們，生物是能夠發(fā)生變異的。這些變異有的能夠遺傳給發(fā)生變異的。這些變異有的能夠遺傳給后代，有的卻不能！后代，有的卻不能！變異的概念：生物的后代出

2、現(xiàn)與親本不變異的概念：生物的后代出現(xiàn)與親本不同的性狀（也包括后代個(gè)體間的差異）同的性狀（也包括后代個(gè)體間的差異）可遺傳的變異可遺傳的變異不遺傳的變異不遺傳的變異一、基因突變的類型一、基因突變的類型基因突變： 由DNA堿基順序的改變引起生物遺傳性狀顯著變化的現(xiàn)象，是基因的核苷酸順序或數(shù)目發(fā)生改變。 單個(gè)堿基改變 點(diǎn)突變（點(diǎn)突變（point mutation） 多個(gè)堿基改變 缺失、重復(fù)和插入缺失、重復(fù)和插入 基因突變的類型 堿基置換移碼大段損傷 （1）堿基置換（）堿基置換（substitution） 它只涉及一對堿基被另一對堿基所置換。它只涉及一對堿基被另一對堿基所置換。 分類分類：轉(zhuǎn)換（轉(zhuǎn)換（t

3、ransitiontransition），），即即DNADNA鏈中的一個(gè)嘌呤被另一鏈中的一個(gè)嘌呤被另一個(gè)嘌呤或是一個(gè)嘧啶被另一個(gè)嘧啶所置換；個(gè)嘌呤或是一個(gè)嘧啶被另一個(gè)嘧啶所置換； 顛換（顛換（transversiontransversion），），即一個(gè)嘌呤被一個(gè)嘧啶即一個(gè)嘌呤被一個(gè)嘧啶, ,或或是一個(gè)嘧啶被一個(gè)嘌呤所置換。是一個(gè)嘧啶被一個(gè)嘌呤所置換。對某一具體誘變劑來對某一具體誘變劑來說，即可同時(shí)引起轉(zhuǎn)說，即可同時(shí)引起轉(zhuǎn)換與顛換，也可只具換與顛換，也可只具其中的一種功能。根其中的一種功能。根據(jù)化學(xué)誘變劑是據(jù)化學(xué)誘變劑是直接直接還是還是間接間接地引起置換，地引起置換，可把置換的機(jī)制分成可把置換

4、的機(jī)制分成以下兩類來討論。以下兩類來討論。直接引起置換的誘變劑直接引起置換的誘變劑 定義：一類可直接與核酸的堿基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的誘變劑定義：一類可直接與核酸的堿基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的誘變劑，不論在機(jī)體內(nèi)或是在離體條件下均有作用。，不論在機(jī)體內(nèi)或是在離體條件下均有作用。 種類：很多。例如亞硝酸、羥胺和各種烷化劑（硫酸二種類：很多。例如亞硝酸、羥胺和各種烷化劑（硫酸二乙酯，甲基磺酸乙酯，乙酯，甲基磺酸乙酯，N-甲基甲基-N硝基硝基-N-亞硝基胍，亞硝基胍，N-甲甲基基-N-亞硝基脲，乙烯亞胺，環(huán)氧乙酸，氮芥等）。亞硝基脲，乙烯亞胺，環(huán)氧乙酸，氮芥等）。 作用：它們可與一個(gè)或幾個(gè)核苷酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而作用

5、：它們可與一個(gè)或幾個(gè)核苷酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而引起引起DNA復(fù)制時(shí)堿基配對的轉(zhuǎn)換，并進(jìn)一步使微生物發(fā)復(fù)制時(shí)堿基配對的轉(zhuǎn)換，并進(jìn)一步使微生物發(fā)生變異。生變異。 羥胺只引起羥胺只引起GCA : T， 其余都是可使其余都是可使GC=A : T發(fā)生互變的。發(fā)生互變的。 能引起顛換的誘變劑很少，只是部分烷化劑才有（參能引起顛換的誘變劑很少，只是部分烷化劑才有（參見下表）。見下表）。若干誘變劑的作用機(jī)制及誘變功能若干誘變劑的作用機(jī)制及誘變功能亞硝酸可以使堿基發(fā)生氧化脫氨作用。亞硝酸可以使堿基發(fā)生氧化脫氨作用。 HNO2胞嘧啶（胞嘧啶（C） 尿嘧啶（尿嘧啶（U） HNO2腺嘌呤（腺嘌呤（A） 次黃嘌呤（次黃嘌

6、呤（H） HNO2鳥嘌呤（鳥嘌呤（G） 黃嘌呤（黃嘌呤（X）這些反應(yīng)及形成物均可在這些反應(yīng)及形成物均可在DNA復(fù)制中產(chǎn)生影響，復(fù)制中產(chǎn)生影響，主要是使堿基對發(fā)生轉(zhuǎn)換。主要是使堿基對發(fā)生轉(zhuǎn)換。堿基轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制堿基轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制以亞硝酸為例以亞硝酸為例亞硝酸引起的亞硝酸引起的AT-GC轉(zhuǎn)換細(xì)節(jié)轉(zhuǎn)換細(xì)節(jié)這類誘變劑主要是一些這類誘變劑主要是一些堿基類似物堿基類似物 ,如：如：5-溴尿嘧溴尿嘧啶啶(5-BU)和和5-氨基尿嘧啶（氨基尿嘧啶（5AU）、）、疊氮胸腺嘧啶（疊氮胸腺嘧啶（AIT）等）等等等； 作用方式作用方式：通過活細(xì)胞的代謝活動(dòng)參入到通過活細(xì)胞的代謝活動(dòng)參入到DNA分子中，分子中，主要是在

7、主要是在DNA復(fù)制時(shí)堿基類似物插入復(fù)制時(shí)堿基類似物插入DNA中，中，引起堿基引起堿基對配對錯(cuò)誤，造成堿基置換。對配對錯(cuò)誤，造成堿基置換。以以5-溴尿嘧啶溴尿嘧啶(5-BU)為例：為例： 5-BU是胸腺嘧啶（是胸腺嘧啶（T）的）的的的類似物類似物 ，酮式的，酮式的5-BU可以和可以和A配對，配對，烯醇式的烯醇式的5-BU可以和可以和G配對，在配對，在DNA分子復(fù)制的過程中，由于分子復(fù)制的過程中，由于5-BU的的插入和互變異構(gòu)導(dǎo)致堿基置換。插入和互變異構(gòu)導(dǎo)致堿基置換。間接引起置換的誘變劑間接引起置換的誘變劑5-BU引起的轉(zhuǎn)換引起的轉(zhuǎn)換5-BU引起的轉(zhuǎn)換引起的轉(zhuǎn)換 從上圖中，還可以看到從上圖中，還可

8、以看到5-BU的摻入引起的的摻入引起的GC回復(fù)到回復(fù)到A?T的過程。通過這兩個(gè)圖示，就很容易理的過程。通過這兩個(gè)圖示，就很容易理解為什么同一種誘變劑既可造成正向突變，又可解為什么同一種誘變劑既可造成正向突變，又可使它產(chǎn)生回復(fù)突變的原因了。使它產(chǎn)生回復(fù)突變的原因了。 也可以知道，為什么像也可以知道，為什么像5-BU這類代謝類似物只有這類代謝類似物只有對正在進(jìn)行新陳代謝和繁殖著的微生物才起作用對正在進(jìn)行新陳代謝和繁殖著的微生物才起作用，而對休止細(xì)胞、游離的噬菌體粒子或離體的，而對休止細(xì)胞、游離的噬菌體粒子或離體的DNA分子卻不起作用。分子卻不起作用。（2）移碼突變）移碼突變 frame-shift

9、 mutation 或或 phase-shift mutation，指誘變劑使，指誘變劑使DNA分子中增加（插入）或缺失一分子中增加（插入）或缺失一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)核苷酸，從而使該部位后面的全部個(gè)或少數(shù)幾個(gè)核苷酸，從而使該部位后面的全部遺傳密碼發(fā)生轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯錯(cuò)誤的一類突變。遺傳密碼發(fā)生轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯錯(cuò)誤的一類突變。 由移碼突變所產(chǎn)生的突變株，稱為由移碼突變所產(chǎn)生的突變株，稱為（frame-shift mutant）。與染色體畸變相比，移）。與染色體畸變相比，移碼突變也只能算是碼突變也只能算是DNA分子的微小損傷。分子的微小損傷。 丫啶類染料，包括原黃素、丫啶黃、丫啶橙和丫啶類染料，包括原黃素、丫啶黃、

10、丫啶橙和-氨基丫啶等，以及一系列稱為氨基丫啶等，以及一系列稱為ICR類的化合物，類的化合物，都是移碼突變的有效誘變劑。都是移碼突變的有效誘變劑。圖圖 能誘發(fā)移碼突變的幾種代表性化合物能誘發(fā)移碼突變的幾種代表性化合物引起移碼突變的誘變劑：主要是引起移碼突變的誘變劑：主要是吖啶類染料，如吖啶吖啶類染料，如吖啶黃、吖啶橙等等。黃、吖啶橙等等。這類化合物都是平面型的三環(huán)分子，它們的結(jié)構(gòu)與一這類化合物都是平面型的三環(huán)分子，它們的結(jié)構(gòu)與一個(gè)嘌呤個(gè)嘌呤嘧啶對十分相似。嘧啶對十分相似。吖啶類化合物的誘變機(jī)制：吖啶類化合物的誘變機(jī)制： 至今還不很清楚。至今還不很清楚。 有人認(rèn)為，由于它們是一種平面型三環(huán)分子，有

11、人認(rèn)為，由于它們是一種平面型三環(huán)分子，結(jié)構(gòu)與一個(gè)結(jié)構(gòu)與一個(gè)嘌呤嘌呤嘧啶嘧啶十分相似，故能十分相似，故能嵌入嵌入兩個(gè)相鄰兩個(gè)相鄰DNADNA堿基對之間，造成雙螺旋的部分堿基對之間，造成雙螺旋的部分解開（兩個(gè)堿基對原來相距解開（兩個(gè)堿基對原來相距0.34nm0.34nm，當(dāng)嵌入一，當(dāng)嵌入一個(gè)丫啶分子時(shí)，就變成個(gè)丫啶分子時(shí)，就變成0.68nm0.68nm），從而在），從而在DNADNA復(fù)制過程中，會(huì)使鏈上增添或缺失一個(gè)堿基，復(fù)制過程中，會(huì)使鏈上增添或缺失一個(gè)堿基，結(jié)果就引起了移碼突變。結(jié)果就引起了移碼突變。吖啶類化合物誘發(fā)的移碼突變及其回復(fù)突變圖示：吖啶類化合物誘發(fā)的移碼突變及其回復(fù)突變圖示：基因突

12、變的特點(diǎn)基因突變的特點(diǎn) 普遍性普遍性 隨機(jī)性隨機(jī)性 稀有性稀有性 有害性有害性 不定向性不定向性 二、實(shí)例鐮刀型細(xì)胞貧血癥正常人的紅細(xì)胞鐮刀型貧血癥患者 的 紅 細(xì) 胞討論：鐮刀型細(xì)胞貧血癥的發(fā)病原因是什么？臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)血紅蛋白血紅蛋白6(N端端)mRNA基因基因(DNA上上)正常表現(xiàn)正常谷氨酸CTTGAAGAA鐮刀型貧血異常纈氨酸CATGTAGUA基因突變的實(shí)例基因突變的實(shí)例鐮刀型細(xì)胞貧血癥鐮刀型細(xì)胞貧血癥基因突變的實(shí)例：基因突變的實(shí)例：正常綿羊有時(shí)生下正常綿羊有時(shí)生下短腿短腿“安康羊安康羊”紅花紅花藍(lán)紫色藍(lán)紫色物理因素：主要是各種射線。如：紫外線、物理因素：主要是各種射線。如：紫外線、

13、射線、射線、射線、射線、射線等。射線等。化學(xué)因素：主要是各種能與化學(xué)因素：主要是各種能與DNADNA發(fā)生化學(xué)反應(yīng)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。如煙堿、秋水仙素、黃曲霉毒素、的化學(xué)物質(zhì)。如煙堿、秋水仙素、黃曲霉毒素、硫酸二乙酯等。硫酸二乙酯等。生物因素：主要是某些寄生在細(xì)胞內(nèi)的病毒。生物因素：主要是某些寄生在細(xì)胞內(nèi)的病毒。三、基因突變的原因1.1.人工誘變的方法：人工誘變的方法：用射線（如紫外線、用射線（如紫外線、X X射線、激光等）照射或致突射線、激光等）照射或致突變物質(zhì)處理生物的敏感部位（植物的萌發(fā)種子、動(dòng)物變物質(zhì)處理生物的敏感部位（植物的萌發(fā)種子、動(dòng)物的生殖腺等）。的生殖腺等）。例：我國科技人員

14、用例：我國科技人員用60CO產(chǎn)生的射線照射水稻萌發(fā)的種子，產(chǎn)生的射線照射水稻萌發(fā)的種子，培育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、抗病蟲害強(qiáng)的培育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、抗病蟲害強(qiáng)的新品種。新品種。四、基因突變的應(yīng)用例：例：19451945年愛爾蘭科學(xué)家費(fèi)來明發(fā)現(xiàn)青年愛爾蘭科學(xué)家費(fèi)來明發(fā)現(xiàn)青霉素以來，世界各地科學(xué)家用紫外線照射的方霉素以來，世界各地科學(xué)家用紫外線照射的方法處理青霉，將青霉素的產(chǎn)量提高了幾千倍，法處理青霉，將青霉素的產(chǎn)量提高了幾千倍，價(jià)格下降到原來的幾萬分之一。價(jià)格下降到原來的幾萬分之一。紫外線照紫外線照射處理射處理例：例：19871987年，我國科學(xué)家將普通青椒種年，我國科學(xué)家將普通青椒種子搭載在人造衛(wèi)星上使之接受

15、宇宙射線照射發(fā)子搭載在人造衛(wèi)星上使之接受宇宙射線照射發(fā)生基因突變，培育出產(chǎn)量特高，質(zhì)量特別好的生基因突變，培育出產(chǎn)量特高，質(zhì)量特別好的“太空椒太空椒”。2.2.人工誘變的優(yōu)點(diǎn)：人工誘變的優(yōu)點(diǎn)：自然突變由于變異頻率很低，產(chǎn)生的極少量變異自然突變由于變異頻率很低，產(chǎn)生的極少量變異個(gè)體混雜于大量未變異個(gè)體中，難以被發(fā)現(xiàn)并選出來個(gè)體混雜于大量未變異個(gè)體中，難以被發(fā)現(xiàn)并選出來進(jìn)行培育。而人工誘變可以產(chǎn)生大量的變異個(gè)體，容進(jìn)行培育。而人工誘變可以產(chǎn)生大量的變異個(gè)體，容易發(fā)現(xiàn)發(fā)生有利變異的個(gè)體并將其從中選擇出來。如易發(fā)現(xiàn)發(fā)生有利變異的個(gè)體并將其從中選擇出來。如我國近年每年都有許多優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的農(nóng)作物新品種出現(xiàn)，

16、我國近年每年都有許多優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的農(nóng)作物新品種出現(xiàn)，其中大多數(shù)都經(jīng)過了人工誘變處理。其中大多數(shù)都經(jīng)過了人工誘變處理。如青霉素的生產(chǎn)，從如青霉素的生產(chǎn)，從19451945年到年到19651965年年2020年時(shí)間就年時(shí)間就將單位產(chǎn)量提高了幾十萬倍。將單位產(chǎn)量提高了幾十萬倍。3.3.人工誘變的缺點(diǎn)：人工誘變的缺點(diǎn)：，并且常常，并且常常是一個(gè)個(gè)體中既發(fā)生了有利變異又發(fā)生了不利是一個(gè)個(gè)體中既發(fā)生了有利變異又發(fā)生了不利變異，必須通過雜交方法將有利變異組合到同變異，必須通過雜交方法將有利變異組合到同一個(gè)體中來。一個(gè)體中來。，生物發(fā)生，生物發(fā)生的變異絕大多數(shù)是不利變異，因此的變異絕大多數(shù)是不利變異，因此必須處理

17、大必須處理大量材料量材料形成大量變異個(gè)體再從中選擇發(fā)生有利形成大量變異個(gè)體再從中選擇發(fā)生有利變異的個(gè)體。變異的個(gè)體。，如，如有泄漏將造成人體傷害或環(huán)境污染。有泄漏將造成人體傷害或環(huán)境污染。燈籠形，特大果燈籠形，特大果平均單果重平均單果重250克左右，克左右，最大果可達(dá)最大果可達(dá)720克克露地栽培露地栽培畝產(chǎn)畝產(chǎn)5000公斤左右公斤左右大棚栽培大棚栽培產(chǎn)量可達(dá)產(chǎn)量可達(dá)8000公斤公斤 五、化學(xué)致癌物質(zhì)以其作用機(jī)制直接致癌物 直接作用于RNA、DNA、蛋白質(zhì)等 烷化劑、亞硝胺物質(zhì) 間接致癌物 需經(jīng)代謝活化才與大分子化合物結(jié)合 多環(huán)芳烴類、亞硝胺類、芳香胺 促癌物 本身不致癌，但與致癌物同時(shí)作用時(shí)，

18、能明顯地強(qiáng)化致癌 巴豆油、丙酮、酚、氧化鐵粉塵 有機(jī)致癌物 多環(huán)芳烴類、芳香胺類、偶氮類、烷化劑類、亞硝胺類及亞硝酰胺類、內(nèi)酯類、性激素、霉菌素 多環(huán)芳烴、亞硝胺及霉菌毒素是環(huán)境中三類最普遍最重要的致癌物 一、共價(jià)結(jié)合一、共價(jià)結(jié)合1氮丙啶類抗生素絲裂霉素C 2氨茴霉素、茅屋霉素等抗生素3螺旋丙烷類抗生素二、非共價(jià)結(jié)合二、非共價(jià)結(jié)合大多數(shù)抗癌藥物與DNA的作用都是非共價(jià)結(jié)合 典型溝區(qū)結(jié)合的藥物分子典型溝區(qū)結(jié)合的藥物分子 典型溝區(qū)結(jié)合的藥物分子典型溝區(qū)結(jié)合的藥物分子嵌插結(jié)合嵌插結(jié)合（1）經(jīng)典的嵌插結(jié)合 藥物分子通過嵌入DNA令DNA構(gòu)象發(fā)生改變，使其不能或不易復(fù)制，而顯現(xiàn)出抗腫瘤、抗病毒的活性。（

19、2）雙嵌插 將兩個(gè)嵌插環(huán)通過不同長度的鏈共價(jià)連接起來 （3）帶有多個(gè)大取代基的嵌插劑 三、剪切作用RNA可成為新型小分子藥物的作用靶點(diǎn) 一、一、RNA藥靶的優(yōu)越性藥靶的優(yōu)越性1RNA種類多樣性2RNA結(jié)構(gòu)的多樣性在RNA分子中，并不遵守DNA中堿基種類的數(shù)量比例關(guān)系，即分子中的嘌呤堿基總數(shù)不一定等于嘧啶堿基的總數(shù)。RNA分子中，部分區(qū)域也能形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，不能形成雙螺旋的部分，則形成突環(huán)。RNA還可以形成更復(fù)雜的三級結(jié)構(gòu)。盡管轉(zhuǎn)錄于同一DNA，翻譯相同的蛋白質(zhì)，不同的轉(zhuǎn)錄子形式有不同的序列和獨(dú)特的RNA三級結(jié)構(gòu)形狀。二、作用于二、作用于RNA的小分子藥物的小分子藥物兩大類：一類是傳染性疾病新型

20、抗菌和抗病毒藥物研制；另一類是非傳染性疾病包括抗癌和抗炎癥藥物研制。 1與HIV TAR RNA作用的小分子化合物反式激活（TAR） 反式激活依賴于Tat蛋白和一個(gè)RNA序列特異區(qū)（TAR RNA）的相互結(jié)合。 HIV 1基因表達(dá)是由一類病毒編碼的蛋白調(diào)控的，其中包括一種轉(zhuǎn)錄的反式激活子Tat。當(dāng)基因表達(dá)的Tat水平增高時(shí)，病毒的復(fù)制才能夠進(jìn)行。這是通過RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄復(fù)合物延長的增加而達(dá)到的，也叫做反式激活（TAR）。 （a）新霉素B；（b）2, 4-氨基喹唑啉；（c）喹唑啉-2, 3-二酮；（d）吖啶衍生物CGP40336A2與rRNA作用的小分子化合物核糖霉素、巴龍霉素和利維霉素可與原核

21、rRNA的A位點(diǎn)亞結(jié)構(gòu)域形成特定的復(fù)合物；而安普霉素對原核亞結(jié)構(gòu)域的強(qiáng)結(jié)合依賴于1408位點(diǎn)RNA具有高親和性和特異性的靶點(diǎn)，小分子化合物可以作為基因研究的工具一、分光光度法一、分光光度法1測糖法（1）二苯胺法 在強(qiáng)酸性條件下，水解后的DNA能與二苯胺反應(yīng)，并有藍(lán)色產(chǎn)物生成，其最大吸收波長位于600mn處，由此可以測得樣品中核酸的含量，測定DNA的范圍為25250g/ml。 優(yōu)點(diǎn)：與UV法相比，該方法更準(zhǔn)確，靈敏度更高， 并且可以測定混合物。缺點(diǎn)：方法冗長（需1620h），條件苛刻， 在測定過程中容易造成樣品的損失。 在硫酸中水解DNA，加入高碘酸和硫代巴比妥酸，則有粉紅色反應(yīng)物生成，max位

22、于532nm處，可用于DNA的測定。（2）硫代巴比妥酸優(yōu)點(diǎn)：RNA和蛋白質(zhì)不干擾測定RNA經(jīng)熱酸水解和轉(zhuǎn)化之后，與地衣酚（5-甲基-1,3-苯二酚）在濃HCL及Cu2或FeCl3存在下反應(yīng)，溶液呈綠色，max位于670nm處。在一定范圍內(nèi)，吸收強(qiáng)度與RNA的濃度成正比，用于測定RNA及其衍生物，靈敏度為0.015mol/L。（3）地衣酚法（4）定磷法 將核酸和核苷酸用強(qiáng)酸消化，使有機(jī)磷變成磷酸根，再用一般測定磷的試劑顯色。根據(jù)磷的含量即可推算出核酸和核苷酸的含量 優(yōu)點(diǎn)：反應(yīng)靈敏缺點(diǎn)：DNA和RNA都含有磷，測定時(shí)必須分別測定 2染料結(jié)合法基于多核苷酸中兩個(gè)單核苷酸殘基之間的電離具有較低的pK值

23、（pK=1.5），當(dāng)溶液的pH高于4時(shí)，全部解離，呈多陰離子狀態(tài)，具有與某些陽離子染料結(jié)合的能力。 優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確 缺點(diǎn)：蛋白質(zhì)對體系的測定干擾嚴(yán)重 （1）甲基綠 在pH 7.9的Tris-HCl緩沖溶液中，將甲基綠與核酸的混合液加熱至45，3h之后，在最大吸收峰630nm處溶液的吸光度，吸光度的強(qiáng)度與一定濃度的核酸成正比，將該方法用以測定DNA，其測定范圍為0300g，檢出限為2g。 2染料結(jié)合法（2）甲苯胺藍(lán) 甲苯胺藍(lán)的水溶液在628nm處有一最大吸收峰，當(dāng)有痕量DNA存在時(shí)，會(huì)導(dǎo)致最大吸收峰降低，吸收峰的降低程度與一定濃度的DNA成正比。 測定微克級的DNA，線性范圍04.0g/ml，檢出限0.048g/ml 目前測定痕量DNA的較好方法 （3）乙基紫 pH6.47.4時(shí)，乙基紫的max位于595nm處，當(dāng)加入DNA后，乙基紫的吸收