實驗十三血乳酸的測定與應(yīng)ppt課件

1、實驗十三實驗十三 血乳酸的測定與運用血乳酸的測定與運用經(jīng)過實驗使學(xué)生掌握體內(nèi)血乳酸的測定方法及該目的在運經(jīng)過實驗使學(xué)生掌握體內(nèi)血乳酸的測定方法及該目的在運動實際中的運用和意義，為體育教學(xué)和運動訓(xùn)練提供指點。動實際中的運用和意義，為體育教學(xué)和運動訓(xùn)練提供指點。進(jìn)一步穩(wěn)定離心機(jī)、可調(diào)微量移液器、振蕩器等儀器的根進(jìn)一步穩(wěn)定離心機(jī)、可調(diào)微量移液器、振蕩器等儀器的根本操作。掌握實驗對象取材、標(biāo)本處置的方法與半自動生本操作。掌握實驗對象取材、標(biāo)本處置的方法與半自動生化分析儀的操作方法?；治鰞x的操作方法。經(jīng)過綜合設(shè)計型實驗的實驗設(shè)計與研討過程，提高學(xué)生的經(jīng)過綜合設(shè)計型實驗的實驗設(shè)計與研討過程，提高學(xué)生的學(xué)

2、習(xí)興趣，培育學(xué)生查閱文獻(xiàn)資料、獨立思索、創(chuàng)新思想、學(xué)習(xí)興趣，培育學(xué)生查閱文獻(xiàn)資料、獨立思索、創(chuàng)新思想、動手操作、分析問題和處置問題的才干，使學(xué)生根本掌握動手操作、分析問題和處置問題的才干，使學(xué)生根本掌握從事普通科學(xué)研討的方法。從事普通科學(xué)研討的方法。1 1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? 2 實驗原理實驗原理乳酸是糖酵解供能系統(tǒng)的終產(chǎn)物，又是有氧代謝系統(tǒng)的乳酸是糖酵解供能系統(tǒng)的終產(chǎn)物，又是有氧代謝系統(tǒng)的重要氧化物質(zhì)，運動時乳酸主要在骨骼肌中生成，然后重要氧化物質(zhì)，運動時乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透過細(xì)胞膜進(jìn)入血液，并隨血液循環(huán)到達(dá)身體的其他組透過細(xì)胞膜進(jìn)入血液，并隨血液循環(huán)到達(dá)身體的其他組織被代謝消除。

3、可在肝內(nèi)經(jīng)糖異生途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，織被代謝消除?？稍诟蝺?nèi)經(jīng)糖異生途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，在供能體系中占有重要位置。與此同時，乳酸過多對酸在供能體系中占有重要位置。與此同時，乳酸過多對酸堿平衡的影響又成為負(fù)面效應(yīng)，導(dǎo)致疲勞發(fā)生。堿平衡的影響又成為負(fù)面效應(yīng)，導(dǎo)致疲勞發(fā)生。因此，運動時乳酸的生成、運動后乳酸的消除，以及運因此，運動時乳酸的生成、運動后乳酸的消除，以及運動訓(xùn)練和體育鍛煉中血乳酸目的的運用成為運動生物化動訓(xùn)練和體育鍛煉中血乳酸目的的運用成為運動生物化學(xué)研討的重要內(nèi)容之一。學(xué)研討的重要內(nèi)容之一。安靜時，人體靜脈血里的乳酸物質(zhì)的量濃度為安靜時，人體靜脈血里的乳酸物質(zhì)的量濃度為0.45-0.45-1

4、.3mmol/L1.3mmol/L。猛烈運動時，肌肉內(nèi)糖的無氧分解加強(qiáng)，。猛烈運動時，肌肉內(nèi)糖的無氧分解加強(qiáng)，血乳酸濃度顯著升高，而且在某些工程中兩者的相關(guān)系血乳酸濃度顯著升高，而且在某些工程中兩者的相關(guān)系數(shù)很大，其增長情況與運動強(qiáng)度、氧債、訓(xùn)練程度等要數(shù)很大，其增長情況與運動強(qiáng)度、氧債、訓(xùn)練程度等要素親密相關(guān)，因此可直接用運動后血乳酸的濃度來評定素親密相關(guān)，因此可直接用運動后血乳酸的濃度來評定無氧代謝的才干，如無氧代謝的才干，如400m400m跑后，血乳酸低于跑后，血乳酸低于10 mmol/L10 mmol/L闡闡明無氧代謝才干差；到達(dá)明無氧代謝才干差；到達(dá)14-15 mmol/L14-15

5、 mmol/L闡明無氧酵解才闡明無氧酵解才干強(qiáng)。干強(qiáng)。當(dāng)今血乳酸不只用來評定速度耐力程度，還用來評定有當(dāng)今血乳酸不只用來評定速度耐力程度，還用來評定有氧代謝才干，控制運動強(qiáng)度，預(yù)測成果等等。氧代謝才干，控制運動強(qiáng)度，預(yù)測成果等等。3 3 實驗器材與試劑實驗器材與試劑實驗儀器實驗儀器 采血針、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量采血針、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量細(xì)胞培育板、酶聯(lián)免疫檢測儀細(xì)胞培育板、酶聯(lián)免疫檢測儀 試劑試劑辣根過氧化物酶羊抗兔辣根過氧化物酶羊抗兔IgGIgG； 包被液：包被液：0.05 mol/L0.05 mol/L碳酸緩沖液碳酸緩沖液pHpH值為值為9.639.63：Na2CO30.

6、15gNa2CO30.15g，NaHCO20.293gNaHCO20.293g，蒸餾水稀釋至，蒸餾水稀釋至100ml100ml；稀釋液稀釋液PBS-TweenPBS-Tween：NaCl8gNaCl8g，KCl0.2gKCl0.2g，KH2PO4 0.2gKH2PO4 0.2g，Na2HPO412H2O 2.9gNa2HPO412H2O 2.9g，Tween-20Tween-20，0.5ml0.5ml，蒸餾水加至，蒸餾水加至1000ml1000ml；洗滌液：同稀釋液；洗滌液：同稀釋液；封鎖液：封鎖液：0.5%0.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)質(zhì)量分?jǐn)?shù)BSABSA用用PBSPBS配制；配制；鄰苯二胺溶液底物：鄰苯

7、二胺溶液底物： 配制：配制：0.1 mol/L0.1 mol/L檸檬酸檸檬酸2.1g/100 ml2.1g/100 ml，取，取6.1 ml6.1 ml；0.2 0.2 mol/L Na2HPO412H2Omol/L Na2HPO412H2O7.163 g/100 ml7.163 g/100 ml，鄧鄰苯二胺，鄧鄰苯二胺8 8 mgmg溶解；臨用前加溶解；臨用前加30%30%體積分?jǐn)?shù)體積分?jǐn)?shù)H2O240 lH2O240 l； 終止液：終止液：2mol/L H2SO42mol/L H2SO4。4 4 實驗方法與步驟實驗方法與步驟4-54-5人一組，自在組合編組，選定一人擔(dān)任小組長。人一組，自在組

8、合編組，選定一人擔(dān)任小組長。查找國內(nèi)外近十年有關(guān)運動訓(xùn)練中血乳酸變化的查找國內(nèi)外近十年有關(guān)運動訓(xùn)練中血乳酸變化的文獻(xiàn)資料并總結(jié)，以小組為單位進(jìn)展討論，擬定文獻(xiàn)資料并總結(jié)，以小組為單位進(jìn)展討論，擬定實驗的內(nèi)容與目的。實驗的內(nèi)容與目的。根據(jù)擬定的實驗內(nèi)容與目的，討論擬定運動實驗根據(jù)擬定的實驗內(nèi)容與目的，討論擬定運動實驗對象的訓(xùn)練方案：運動方式、運動強(qiáng)度與時間等對象的訓(xùn)練方案：運動方式、運動強(qiáng)度與時間等包括學(xué)會訓(xùn)練實驗動物。包括學(xué)會訓(xùn)練實驗動物。詳細(xì)制定實驗步驟與方法，嚴(yán)厲按照實驗步驟與詳細(xì)制定實驗步驟與方法，嚴(yán)厲按照實驗步驟與要求進(jìn)展實驗。要求進(jìn)展實驗。設(shè)計本次實驗方案設(shè)計本次實驗方案實驗對象的選

9、擇不同工程運發(fā)動運動訓(xùn)練方式、強(qiáng)度、實驗對象的選擇不同工程運發(fā)動運動訓(xùn)練方式、強(qiáng)度、繼續(xù)時間及取樣時間的選擇。繼續(xù)時間及取樣時間的選擇。 血乳酸的實驗測定方法選擇血乳酸的實驗測定方法選擇 可采用酶聯(lián)免疫吸附法可采用酶聯(lián)免疫吸附法enzyme-linked immunosorbent enzyme-linked immunosorbent assay, ELISAassay, ELISA，或放射免疫法，或放射免疫法Radioimmuniassay,RLARadioimmuniassay,RLA測定。測定。確定實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處置方法。確定實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處置方法。 全血乳酸檢測試劑盒法全血乳酸檢

10、測試劑盒法 原理：以原理：以NAD+NAD+為氫受體，為氫受體，LDHLDH催化乳酸脫氫生成丙酮酸，催化乳酸脫氫生成丙酮酸，使使NAD+NAD+轉(zhuǎn)化成轉(zhuǎn)化成NADHNADH。其中。其中PMSPMS遞氫使遞氫使NBTNBT復(fù)原為紫色呈色物，復(fù)原為紫色呈色物，呈色物的吸光度在呈色物的吸光度在530nm530nm時與乳酸含量成線性關(guān)系。時與乳酸含量成線性關(guān)系。 資料與試劑：采血針、吸血管、離心管、臺式離心機(jī)、資料與試劑：采血針、吸血管、離心管、臺式離心機(jī)、超聲清洗機(jī)、試管架、移液槍、超聲清洗機(jī)、試管架、移液槍、TPTP頭、水浴箱、可見光分頭、水浴箱、可見光分光光度計、比色杯。光光度計、比色杯。空白管

11、空白管規(guī)范管規(guī)范管測定管測定管蒸餾水蒸餾水mlml0.020.023mmol/L3mmol/L規(guī)范液規(guī)范液mlml0.020.02上清液上清液mlml0.020.02酶工作液酶工作液mlml1 11 11 1顯色劑顯色劑mlml0.20.20.20.20.20.2混勻，混勻，3737水浴準(zhǔn)確反響水浴準(zhǔn)確反響1010分鐘分鐘 終止液終止液mlml2 22 22 2混勻，混勻，530nm530nm，1cm1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度 規(guī)范濃度為規(guī)范濃度為3mmol/L3mmol/L，稀釋倍數(shù)為，稀釋倍數(shù)為7 7倍倍表表3-17 3-17 全血乳酸檢測試劑盒的操

12、作全血乳酸檢測試劑盒的操作5 5 實驗參考方案實驗參考方案 實驗對象：實驗對象為運動人體科學(xué)專業(yè)學(xué)生實驗對象：實驗對象為運動人體科學(xué)專業(yè)學(xué)生1010名，采名，采用功率自行車進(jìn)展大強(qiáng)度運動訓(xùn)練建立運動實驗?zāi)Ｐ停河霉β首孕熊囘M(jìn)展大強(qiáng)度運動訓(xùn)練建立運動實驗?zāi)Ｐ停翰捎冒胱詣由治鰞x檢測血液標(biāo)本。采用半自動生化分析儀檢測血液標(biāo)本。 運動訓(xùn)練方案：運動模型的建模，采用功率自行車進(jìn)展運動訓(xùn)練方案：運動模型的建模，采用功率自行車進(jìn)展有氧運動訓(xùn)練運動方案可自行設(shè)計。繼續(xù)運動有氧運動訓(xùn)練運動方案可自行設(shè)計。繼續(xù)運動5 5分分鐘，運動強(qiáng)度由心率控制，為實驗對象最大心率達(dá)鐘，運動強(qiáng)度由心率控制，為實驗對象最大心率達(dá)

13、85-85-9595。 實驗方法與步驟：實驗方法與步驟： 包被抗原：用包被液將抗原做適當(dāng)稀釋，普通為包被抗原：用包被液將抗原做適當(dāng)稀釋，普通為1-10 1-10 g/g/孔，每孔加孔，每孔加200 l200 l，37 37 溫育溫育1 h1 h，或，或44冰箱放冰箱放置置16-18 h16-18 h。洗滌：倒盡板孔中液體，加洗滌：倒盡板孔中液體，加200l200l洗滌液，反復(fù)洗滌液，反復(fù)3 3次，最后次，最后將反響板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。將反響板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。加封鎖液加封鎖液200l200l，3737溫育溫育1h1h。洗滌同。洗滌同。采集受試者運動前與運動后血液

14、制成血清采集受試者運動前與運動后血液制成血清加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋，每孔加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋，每孔200l200l。同時作稀釋液對照。同時作稀釋液對照。3737溫育溫育12h12h，或室溫放置，或室溫放置2 h2 h。洗滌同。洗滌同。加辣根過氧化物酶羊抗兔加辣根過氧化物酶羊抗兔IgGIgG，每孔，每孔200l200l，3737溫育溫育1h1h，或室溫放置或室溫放置2h2h。洗滌同。洗滌同。加底物：鄰苯二胺溶液加加底物：鄰苯二胺溶液加200l200l，室溫暗處，室溫暗處5min5min。察看結(jié)果：。察看結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測儀記錄用酶聯(lián)免疫檢測儀記錄A190

15、nmA190 nm讀數(shù)。讀數(shù)。 實驗報告實驗結(jié)果與分析內(nèi)容實驗報告實驗結(jié)果與分析內(nèi)容 實驗結(jié)果：實驗結(jié)果為實驗對象運動后，血乳酸含量顯著實驗結(jié)果：實驗結(jié)果為實驗對象運動后，血乳酸含量顯著升高，運動前血乳酸濃度為升高，運動前血乳酸濃度為0.45-1.3 mmol/L0.45-1.3 mmol/L，運動后即刻，運動后即刻為為10-15 mmol/L10-15 mmol/L，兩者差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，兩者差別具有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05P0.05。 實驗結(jié)果分析：乳酸是糖酵解供能系統(tǒng)的終產(chǎn)物，又是有實驗結(jié)果分析：乳酸是糖酵解供能系統(tǒng)的終產(chǎn)物，又是有氧代謝系統(tǒng)的重要氧化物質(zhì)，運動時乳酸主要在骨骼肌中生氧代謝系統(tǒng)的重要氧化物質(zhì)，運動時乳酸主要在骨骼肌中生成，可在肝內(nèi)經(jīng)糖異生途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，在供能體系中占成，可在肝內(nèi)經(jīng)糖異生途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，在供能體系中占有重要位置，可直接用運動后血乳酸的濃度來評定無氧代謝有重要位置，可直接用運動后血乳酸的濃度來評定無氧代謝的才干。如的才干。如400 m400 m跑后，血乳酸低于跑后，血乳酸低于10 mmol/L10 mmol/L闡明無氧代謝闡明無氧代謝才干差；到達(dá)才干差；到達(dá)14-15 mmol/L14-15 mmol/L闡明無氧酵解才干強(qiáng)。闡明無氧酵解才干強(qiáng)。6 6 本卷須知本卷須知 設(shè)計運動方案時，應(yīng)留意檢索文獻(xiàn)資料