微生物檢驗的質(zhì)量控制

1、微生物檢驗的質(zhì)量控制微生物檢驗的質(zhì)量控制 廣東省微生物研究所廣東省微生物研究所廣東省微生物分析檢測中心廣東省微生物分析檢測中心20122012年年11 11月月前言前言 在實際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物在實際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物學(xué)檢驗，可能給檢驗結(jié)果帶來偏差甚至錯誤，因?qū)W檢驗，可能給檢驗結(jié)果帶來偏差甚至錯誤，因此必須對影響檢驗結(jié)果的諸多因素采取控制手段此必須對影響檢驗結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗結(jié)果的正確性，不斷完善微生物檢驗的保證檢驗結(jié)果的正確性，不斷完善微生物檢驗的質(zhì)量控制。質(zhì)量控制。 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 1 1 檢驗人員檢驗人員 2 2 儀器、設(shè)備儀器、設(shè)備 3 3

2、 檢驗培養(yǎng)基、試劑檢驗培養(yǎng)基、試劑 4 4 檢驗環(huán)境檢驗環(huán)境 5 5 采樣采樣 6 6 樣品的接收和預(yù)處理樣品的接收和預(yù)處理 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 8 8 校驗的執(zhí)行校驗的執(zhí)行 9 9 參考菌株及其保存參考菌株及其保存 10 10 實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制 11 11 檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制1 1 檢驗人員檢驗人員 （1 1）微生物檢驗不能完全依賴全自動鑒定儀器，）微生物檢驗不能完全依賴全自動鑒定儀器，檢驗工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和檢驗工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力，與個人的經(jīng)驗、技能和微生物檢驗基判斷能力，與個人的經(jīng)驗、技

3、能和微生物檢驗基礎(chǔ)知識水平密切相關(guān)。礎(chǔ)知識水平密切相關(guān)。 （2 2）除要求微生物檢驗人員必須具備嚴(yán)肅認(rèn)真）除要求微生物檢驗人員必須具備嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度、精密細(xì)致的觀察和操作習(xí)慣，注重的工作態(tài)度、精密細(xì)致的觀察和操作習(xí)慣，注重個人衛(wèi)生外，還必須熟練掌握微生物學(xué)檢驗技術(shù)。個人衛(wèi)生外，還必須熟練掌握微生物學(xué)檢驗技術(shù)。 1 1 檢驗人員檢驗人員 （3 3）檢驗人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度，上崗前）檢驗人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度，上崗前培訓(xùn)合格方能上崗操作，還要主動參加學(xué)習(xí)、培培訓(xùn)合格方能上崗操作，還要主動參加學(xué)習(xí)、培訓(xùn)、講座，學(xué)習(xí)新技術(shù)，掌握微生物學(xué)檢驗方法、訓(xùn)、講座，學(xué)習(xí)新技術(shù)，掌握微生物學(xué)檢驗方法、標(biāo)

4、準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)；標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)； （4 4）參與編寫測試程序及儀器操作程序，學(xué)習(xí)）參與編寫測試程序及儀器操作程序，學(xué)習(xí)質(zhì)量保證體系知識和計量學(xué)基本知識；質(zhì)量保證體系知識和計量學(xué)基本知識； 1 1 檢驗人員檢驗人員 （5 5）參加各類水平測試和盲樣測試，提高檢測）參加各類水平測試和盲樣測試，提高檢測水平和分析問題、解決問題的能力；水平和分析問題、解決問題的能力； （6 6）微生物學(xué)檢驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)定期對檢驗人員）微生物學(xué)檢驗室負(fù)責(zé)人應(yīng)定期對檢驗人員進(jìn)行專業(yè)知識和操作熟練程度的考核，提高檢驗進(jìn)行專業(yè)知識和操作熟練程度的考核，提高檢驗人員的素質(zhì)。人員的素質(zhì)。 2 2 儀器、設(shè)備儀器、設(shè)備 大型微

5、生物檢驗室的主要儀器及設(shè)備包括：大型微生物檢驗室的主要儀器及設(shè)備包括： 無菌室、微生物自動鑒定儀、微生物快速初篩無菌室、微生物自動鑒定儀、微生物快速初篩儀、顯微鏡、菌落計數(shù)器、高壓滅菌器、干熱滅儀、顯微鏡、菌落計數(shù)器、高壓滅菌器、干熱滅菌器、離心機(jī)、蒸餾設(shè)備、培養(yǎng)箱、厭氧箱、水菌器、離心機(jī)、蒸餾設(shè)備、培養(yǎng)箱、厭氧箱、水浴箱、冰箱、超凈工作臺、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、浴箱、冰箱、超凈工作臺、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、PCRPCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。 2 2 儀器、設(shè)備儀器、設(shè)備 要求所有的儀器和設(shè)備均應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提要求所有的儀器和設(shè)備均應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的方法和有關(guān)規(guī)定正確使

6、用。供的方法和有關(guān)規(guī)定正確使用。 需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備，經(jīng)符合需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備，經(jīng)符合資歷的計量部門校準(zhǔn)合格后方可使用。資歷的計量部門校準(zhǔn)合格后方可使用。 對于常用的貴重儀器和設(shè)備，在使用前應(yīng)加對于常用的貴重儀器和設(shè)備，在使用前應(yīng)加以檢查，使用后要登記，要做到定期維護(hù)，以保以檢查，使用后要登記，要做到定期維護(hù)，以保證儀器處于良好的工作狀態(tài)。證儀器處于良好的工作狀態(tài)。 2.1 2.1 高壓滅菌器高壓滅菌器 （1 1）操作人員應(yīng)了解蒸氣滅菌的原理并遵守操）操作人員應(yīng)了解蒸氣滅菌的原理并遵守操作規(guī)則。作規(guī)則。 （2 2）放入的滅菌物品不宜放得過擠。）放入的滅菌物品不宜放得過擠

7、。 （3 3）使用時，放入生物指示條或化學(xué)指示條。）使用時，放入生物指示條或化學(xué)指示條。 （4 4）生物指標(biāo)為嗜熱脂肪芽胞桿菌的耐受性）生物指標(biāo)為嗜熱脂肪芽胞桿菌的耐受性（121121，1515minmin）。）。 （5 5）滅菌后，再培養(yǎng)觀察有無細(xì)菌生長）滅菌后，再培養(yǎng)觀察有無細(xì)菌生長。 （6 6）也可采用水銀留點(diǎn)溫度計進(jìn)行校準(zhǔn)。）也可采用水銀留點(diǎn)溫度計進(jìn)行校準(zhǔn)。 2.2 2.2 干熱滅菌器干熱滅菌器 （1 1）應(yīng)遵守操作規(guī)則，放入箱內(nèi)滅菌的器皿）應(yīng)遵守操作規(guī)則，放入箱內(nèi)滅菌的器皿不宜放得過擠，器皿與內(nèi)層底板不能直接接觸。不宜放得過擠，器皿與內(nèi)層底板不能直接接觸。 （2 2）滅菌完畢，不能立

8、即開門取物，須關(guān)閉）滅菌完畢，不能立即開門取物，須關(guān)閉電源，待溫度下降至電源，待溫度下降至5050以下再開門取物。以下再開門取物。 （3 3）帶有紙包裝的物品滅菌溫度不能超過）帶有紙包裝的物品滅菌溫度不能超過160160。 2.3 2.3 培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 （1 1）箱內(nèi)不應(yīng)放入過熱或過冷的物品，取放物品時，）箱內(nèi)不應(yīng)放入過熱或過冷的物品，取放物品時，應(yīng)隨手關(guān)閉箱門，以維持恒溫。應(yīng)隨手關(guān)閉箱門，以維持恒溫。 （2 2）如培養(yǎng)物不慎潑灑到箱內(nèi)，應(yīng)馬上清潔，并采）如培養(yǎng)物不慎潑灑到箱內(nèi)，應(yīng)馬上清潔，并采取必要的消毒措施。取必要的消毒措施。 （3 3）培養(yǎng)物不宜與培養(yǎng)箱最底層直接接觸。）培養(yǎng)物不宜與培養(yǎng)

9、箱最底層直接接觸。 （4 4）必要時，可放入裝水容器以維持箱內(nèi)的濕度。）必要時，可放入裝水容器以維持箱內(nèi)的濕度。 （5 5）每天記錄溫度及濕度的變化，觀察培養(yǎng)箱內(nèi)溫）每天記錄溫度及濕度的變化，觀察培養(yǎng)箱內(nèi)溫度與設(shè)定溫度是否一致。在兩次計量周期之間要進(jìn)度與設(shè)定溫度是否一致。在兩次計量周期之間要進(jìn)行至少一次內(nèi)部校準(zhǔn)。行至少一次內(nèi)部校準(zhǔn)。 2.5 2.5 顯微鏡顯微鏡 按使用說明進(jìn)行操作。按使用說明進(jìn)行操作。 使用油鏡后先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用使用油鏡后先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用沾上二甲苯的擦鏡紙擦拭，最后用干凈擦鏡紙沾上二甲苯的擦鏡紙擦拭，最后用干凈擦鏡紙擦干。（擦干。（建議使用無水乙醇

10、建議使用無水乙醇+ +乙醚乙醚） 注意防塵，保持清潔、干燥。注意防塵，保持清潔、干燥。2 2 儀器、設(shè)備儀器、設(shè)備 實驗室需要使用的無菌器具應(yīng)能正確實施滅實驗室需要使用的無菌器具應(yīng)能正確實施滅菌，無菌器具和器皿有明顯標(biāo)識，以便與非無菌菌，無菌器具和器皿有明顯標(biāo)識，以便與非無菌器具和器皿加以區(qū)別。器具和器皿加以區(qū)別。 3 3 檢驗培養(yǎng)基、試劑檢驗培養(yǎng)基、試劑 3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 微生物學(xué)檢驗所用干粉培養(yǎng)基，必須由專微生物學(xué)檢驗所用干粉培養(yǎng)基，必須由專業(yè)廠家生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標(biāo)業(yè)廠家生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保存也應(yīng)符合要求，防止潮解、結(jié)塊等。準(zhǔn)，保存也應(yīng)符合要求，

11、防止潮解、結(jié)塊等。 干粉培養(yǎng)基易受潮變性，需要重視。干粉培養(yǎng)基易受潮變性，需要重視。一旦一旦變質(zhì)，不得再使用。變質(zhì)，不得再使用。 3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)，在實際工作中為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)，在實際工作中應(yīng)注意：應(yīng)注意： （1 1）加強(qiáng)包裝的密封性能；）加強(qiáng)包裝的密封性能； （2 2）使用時盡量縮短開蓋時間；）使用時盡量縮短開蓋時間； （3 3）干粉培養(yǎng)基一般放在通風(fēng)、干燥、避光的）干粉培養(yǎng)基一般放在通風(fēng)、干燥、避光的環(huán)境中保存，對于易受潮的品種，啟用后宜放入環(huán)境中保存，對于易受潮的品種，啟用后宜放入干燥器中保存；干燥器中保存； （4 4）由于配制水分不同、啟用次數(shù)

12、或時間增加，）由于配制水分不同、啟用次數(shù)或時間增加，干粉培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基的的pHpH值可能會有所變化，應(yīng)隨時略加值可能會有所變化，應(yīng)隨時略加調(diào)整。調(diào)整。 3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 干粉培養(yǎng)基所要求的理化指標(biāo)，可以從下干粉培養(yǎng)基所要求的理化指標(biāo)，可以從下面幾個方面進(jìn)行初步檢查：面幾個方面進(jìn)行初步檢查： （1 1）干粉培養(yǎng)基應(yīng)為疏松顆粒狀或粉末狀，顏）干粉培養(yǎng)基應(yīng)為疏松顆粒狀或粉末狀，顏色正常、一致；色正常、一致； （2 2）溶解后清徹透明，無沉淀；）溶解后清徹透明，無沉淀； （3 3）4545時時pHpH值為值為7.27.2士士0.20.2；熔化溫度；熔化溫度7070左左右，凝固溫度為右，凝固溫

13、度為35-4035-40； （4 4）水分含量符合標(biāo)準(zhǔn)。）水分含量符合標(biāo)準(zhǔn)。 3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 商品化培養(yǎng)基的平皿應(yīng)對所用培養(yǎng)基做外觀商品化培養(yǎng)基的平皿應(yīng)對所用培養(yǎng)基做外觀檢查，如培養(yǎng)基是否開裂、平皿有無破碎、血平檢查，如培養(yǎng)基是否開裂、平皿有無破碎、血平板有否溶血、有否冰凍、灌注是否均勻、有否過板有否溶血、有否冰凍、灌注是否均勻、有否過多的氣泡，清晰度和有無污染也需要檢查。多的氣泡，清晰度和有無污染也需要檢查。 培養(yǎng)基平皿的制備商必須按照標(biāo)準(zhǔn)隨產(chǎn)品附培養(yǎng)基平皿的制備商必須按照標(biāo)準(zhǔn)隨產(chǎn)品附上書面鑒定資料，實驗室應(yīng)將此鑒定書保存一定上書面鑒定資料，實驗室應(yīng)將此鑒定書保存一定時期。時期。

14、3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 實驗室自制培養(yǎng)基應(yīng)有質(zhì)量控制，包括：實驗室自制培養(yǎng)基應(yīng)有質(zhì)量控制，包括： 制備數(shù)量制備數(shù)量 制備日期制備日期 有效日期有效日期 制備者姓名制備者姓名 還必須檢查：還必須檢查： 培養(yǎng)基顏色培養(yǎng)基顏色 均勻度均勻度 厚度厚度 光潔度光潔度 溶血與否溶血與否 有否過多氣泡有否過多氣泡 是否污染是否污染 3.1 3.1 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行操作，并做好配制記錄。行操作，并做好配制記錄。為保證培養(yǎng)基質(zhì)量，在配制時應(yīng)注意：為保證培養(yǎng)基質(zhì)量，在配制時應(yīng)注意： 制備培養(yǎng)基必須在玻璃容器、搪瓷缸中進(jìn)行，制備培養(yǎng)基必

15、須在玻璃容器、搪瓷缸中進(jìn)行，如用銅、鐵等金屬器皿，可能會對微生物生長有毒如用銅、鐵等金屬器皿，可能會對微生物生長有毒害作用。害作用。 配制培養(yǎng)基時應(yīng)按檢驗項目規(guī)定的配方添加，配制培養(yǎng)基時應(yīng)按檢驗項目規(guī)定的配方添加，不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。 3.1 3.1 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 使用專用的角匙取藥品，避免交叉污染。使用專用的角匙取藥品，避免交叉污染。 使用蒸餾水或去離子水配制，不得使用自來使用蒸餾水或去離子水配制，不得使用自來水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)。水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)。 不同類型的微生物對不同類型的微生物對pHpH值的要求不同，配制值的要求不同，配制培養(yǎng)基

16、時應(yīng)測定培養(yǎng)基時應(yīng)測定pHpH值，如測定結(jié)果與所要求的值，如測定結(jié)果與所要求的pHpH值不符，則用值不符，則用lmollmol/L /L NaOHNaOH或或lmollmol/L /L HClHCl溶液進(jìn)溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。行調(diào)節(jié)。 3.1 3.1 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)及時使用，使用不完制備好的培養(yǎng)基應(yīng)及時使用，使用不完的，如無特殊需求，可室溫或的，如無特殊需求，可室溫或2-82-8冷藏保存。冷藏保存。 如用塑料袋密封，保存期可延長，發(fā)生變?nèi)缬盟芰洗芊猓４嫫诳裳娱L，發(fā)生變質(zhì)等被污染跡象或干裂現(xiàn)象的則不能再使用。質(zhì)等被污染跡象或干裂現(xiàn)象的則不能再使用。 表表1 1 培養(yǎng)基在培養(yǎng)基在2-8

17、2-8冷藏條件下保存的有效期冷藏條件下保存的有效期培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類保存條件保存條件有效期有效期平板培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基不裝塑料袋不裝塑料袋2周周塑料袋密封塑料袋密封8周周試管（棉塞）培養(yǎng)基試管（棉塞）培養(yǎng)基不裝塑料袋不裝塑料袋2周周-1個月個月塑料袋密封塑料袋密封2個月個月試管（螺旋蓋）培養(yǎng)基試管（螺旋蓋）培養(yǎng)基不裝塑料袋不裝塑料袋2個月個月塑料袋密封塑料袋密封4個月個月3.13.1培養(yǎng)基培養(yǎng)基 每批自制培養(yǎng)基必須做無菌試驗和規(guī)定的質(zhì)每批自制培養(yǎng)基必須做無菌試驗和規(guī)定的質(zhì)控菌株測試，對各種不同培養(yǎng)基規(guī)定了專門的質(zhì)控菌株測試，對各種不同培養(yǎng)基規(guī)定了專門的質(zhì)控測試菌株?？販y試菌株。 無菌培養(yǎng)試驗可

18、將滅菌后的培養(yǎng)基放入無菌培養(yǎng)試驗可將滅菌后的培養(yǎng)基放入3737的培養(yǎng)箱培養(yǎng)的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24244848小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。3.1培養(yǎng)基 效果試驗是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的效果試驗是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的菌株，觀察細(xì)菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血菌株，觀察細(xì)菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。 3.2 3.2 檢驗試劑及藥品檢驗試劑及藥品 檢驗藥品、試劑須在分析純檢驗藥品、試劑須在分析純( (AR)AR)級以上。級以上。 在利用藥品、試劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、染色液、緩沖在利用藥品、試劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、

19、染色液、緩沖液及其他試劑時應(yīng)注意：液及其他試劑時應(yīng)注意： (1)(1)按要求選取溶劑；按要求選取溶劑； (2)(2)用帶塞的試劑瓶盛裝；用帶塞的試劑瓶盛裝； (3)(3)易分解的試劑宜用棕色瓶；易分解的試劑宜用棕色瓶； (4)(4)揮發(fā)性的試劑其瓶口應(yīng)予密封；揮發(fā)性的試劑其瓶口應(yīng)予密封； (5)(5)如發(fā)現(xiàn)溶液有變質(zhì)現(xiàn)象，應(yīng)停止使用；如發(fā)現(xiàn)溶液有變質(zhì)現(xiàn)象，應(yīng)停止使用； (6)(6)標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)定時標(biāo)定。標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)定時標(biāo)定。 3.2 3.2 檢驗試劑及藥品檢驗試劑及藥品 實驗室內(nèi)保存的試劑應(yīng)定期進(jìn)行清點(diǎn)，過實驗室內(nèi)保存的試劑應(yīng)定期進(jìn)行清點(diǎn)，過期或變質(zhì)的試劑應(yīng)棄去；期或變質(zhì)的試劑應(yīng)棄去； 注意試劑在

20、保存條件下的使用有效期以及最注意試劑在保存條件下的使用有效期以及最佳保存方式。佳保存方式。 3.3 3.3 染色液染色液 染色液配制后，必須選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作染色液配制后，必須選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作陽性及陰性對照來鑒定染色液的性能，如革蘭氏陽性及陰性對照來鑒定染色液的性能，如革蘭氏染色選用枯草桿菌、葡萄球菌和大腸桿菌作為對染色選用枯草桿菌、葡萄球菌和大腸桿菌作為對照，鞭毛染色液采用普通變形桿菌和福氏志賀氏照，鞭毛染色液采用普通變形桿菌和福氏志賀氏菌作為對照。菌作為對照。 對經(jīng)驗不足者，每次染色時均應(yīng)作對照染色。對經(jīng)驗不足者，每次染色時均應(yīng)作對照染色。 3.43.4診斷血清診斷血清 沙門氏菌屬、

21、志賀氏菌屬、致病性大腸埃希氏菌等診斷沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、致病性大腸埃希氏菌等診斷血清，使用時應(yīng)注意有效期及效價。血清，使用時應(yīng)注意有效期及效價。 每月用相應(yīng)的菌株檢查其有效性，過期血清和變混濁的每月用相應(yīng)的菌株檢查其有效性，過期血清和變混濁的血清不應(yīng)繼續(xù)使用。血清不應(yīng)繼續(xù)使用。 診斷血清一般放普通冰箱內(nèi)保存，使用時應(yīng)以最短的時診斷血清一般放普通冰箱內(nèi)保存，使用時應(yīng)以最短的時間暴露于空氣中。間暴露于空氣中。 最好備有兩個生物制品研究所生產(chǎn)的診斷血清，以便互最好備有兩個生物制品研究所生產(chǎn)的診斷血清，以便互相對照，檢查其可靠性。相對照，檢查其可靠性。 4 4 檢驗環(huán)境檢驗環(huán)境 微生物學(xué)檢驗均在檢

22、驗室進(jìn)行，既不能讓微微生物學(xué)檢驗均在檢驗室進(jìn)行，既不能讓微生物散布出去，又必須使樣品不再受污染，更不生物散布出去，又必須使樣品不再受污染，更不能允許病原菌感染檢驗人員，為此，檢驗室的環(huán)能允許病原菌感染檢驗人員，為此，檢驗室的環(huán)境要求和衛(wèi)生管理制度非常重要。境要求和衛(wèi)生管理制度非常重要。 實驗室總體布局和各部位的安排應(yīng)減少潛在實驗室總體布局和各部位的安排應(yīng)減少潛在的對樣本的污染和對人員的危害。的對樣本的污染和對人員的危害。 4 4 檢驗環(huán)境檢驗環(huán)境 微生物學(xué)檢驗室要求內(nèi)外環(huán)境整潔，布局合理，操作區(qū)微生物學(xué)檢驗室要求內(nèi)外環(huán)境整潔，布局合理，操作區(qū)域與辦公區(qū)域分開。域與辦公區(qū)域分開。 洗滌室、培養(yǎng)室

23、、消毒間、無菌室應(yīng)分開，設(shè)有專室。洗滌室、培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開，設(shè)有專室。 無菌室要設(shè)有套間或緩沖間，最好設(shè)推拉門，以防空氣無菌室要設(shè)有套間或緩沖間，最好設(shè)推拉門，以防空氣振蕩過大。振蕩過大。 微生物檢驗室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒微生物檢驗室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。設(shè)施。 4 4 檢驗環(huán)境檢驗環(huán)境 微生物檢驗室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理微生物檢驗室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理制度，工作人員必須每天堅持做好環(huán)境衛(wèi)生工作，制度，工作人員必須每天堅持做好環(huán)境衛(wèi)生工作，防止灰塵飛揚(yáng)，定期對操作環(huán)境進(jìn)行消毒。防止灰塵飛揚(yáng)，定期對操作環(huán)境進(jìn)行消毒。 對經(jīng)培養(yǎng)后的培養(yǎng)基、

24、培養(yǎng)液、用過的檢樣對經(jīng)培養(yǎng)后的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液、用過的檢樣及其他廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化及其他廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化處理后方可排放，禁止亂扔亂放，以防某些病原處理后方可排放，禁止亂扔亂放，以防某些病原微生物散布。微生物散布。 4 4 檢驗環(huán)境檢驗環(huán)境 對需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效對需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效地控制、監(jiān)測和記錄；地控制、監(jiān)測和記錄； 檢驗人員應(yīng)待無菌室過濾凈化裝置開機(jī)檢驗人員應(yīng)待無菌室過濾凈化裝置開機(jī)0.50.51 1h h后，再后，再進(jìn)入無菌室工作；進(jìn)入無菌室工作； 每天記錄環(huán)境檢測報告，并經(jīng)常進(jìn)行空氣落菌實驗：每天記

25、錄環(huán)境檢測報告，并經(jīng)常進(jìn)行空氣落菌實驗：空氣落菌以營養(yǎng)瓊脂開上皿空氣落菌以營養(yǎng)瓊脂開上皿1515minmin后蓋上蓋子，后蓋上蓋子，363611培培養(yǎng)養(yǎng)4848h h計數(shù)；計數(shù)； 定期對無菌室進(jìn)行室內(nèi)環(huán)境消毒，空氣消毒可采用甲定期對無菌室進(jìn)行室內(nèi)環(huán)境消毒，空氣消毒可采用甲醛熏蒸法，甲醛與高錳酸鉀比例醛熏蒸法，甲醛與高錳酸鉀比例2:12:1。 5 5 采樣采樣 （1 1）采樣工具和容器宜選用耐消毒滅菌的材料，如）采樣工具和容器宜選用耐消毒滅菌的材料，如玻璃、陶瓷、搪瓷、鋁、不銹鋼等，使用之前應(yīng)進(jìn)玻璃、陶瓷、搪瓷、鋁、不銹鋼等，使用之前應(yīng)進(jìn)行認(rèn)真清洗、干燥和相應(yīng)的滅菌處理。采樣工具和行認(rèn)真清洗、干

26、燥和相應(yīng)的滅菌處理。采樣工具和容器不能用消毒劑消毒，樣品中也不得加入防腐劑，容器不能用消毒劑消毒，樣品中也不得加入防腐劑，以免影響檢驗結(jié)果的正確性。以免影響檢驗結(jié)果的正確性。 （2 2）在嚴(yán)格無菌操作的條件下，按國家規(guī)定的樣品）在嚴(yán)格無菌操作的條件下，按國家規(guī)定的樣品采集標(biāo)準(zhǔn)均勻而準(zhǔn)確地取樣，并及時封口，使樣品采集標(biāo)準(zhǔn)均勻而準(zhǔn)確地取樣，并及時封口，使樣品具有準(zhǔn)確性和代表性。具有準(zhǔn)確性和代表性。 5 5 采樣采樣 （3 3）每件樣品封口后，貼上標(biāo)簽，做好記錄）每件樣品封口后，貼上標(biāo)簽，做好記錄( (如如樣品名稱、采樣地點(diǎn)、時間、數(shù)量、儲藏情況、樣品名稱、采樣地點(diǎn)、時間、數(shù)量、儲藏情況、采集或送檢

27、單位及姓名、采樣現(xiàn)場溫度、濕度及采集或送檢單位及姓名、采樣現(xiàn)場溫度、濕度及衛(wèi)生狀況等衛(wèi)生狀況等) )。采集后的樣品，一般可保存在。采集后的樣品，一般可保存在2-2-88的環(huán)境中，如果樣品是冷凍食品，應(yīng)保持在的環(huán)境中，如果樣品是冷凍食品，應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，并及時送檢。冷凍狀態(tài)，并及時送檢。 （4 4）采樣數(shù)量不能少于全部檢驗需要量的）采樣數(shù)量不能少于全部檢驗需要量的3 3倍，倍，以供檢驗、復(fù)檢、備查。以供檢驗、復(fù)檢、備查。 6 6 樣品的接收和預(yù)處理樣品的接收和預(yù)處理 樣品送達(dá)實驗室時，應(yīng)檢查樣品標(biāo)記是否與樣品送達(dá)實驗室時，應(yīng)檢查樣品標(biāo)記是否與樣品相符，樣品包裝狀況是否正常。樣品相符，樣品包裝狀

28、況是否正常。 若存在下述情況，應(yīng)考慮拒收樣品：若存在下述情況，應(yīng)考慮拒收樣品： （1 1）抽樣后樣品送達(dá)實驗室的時間太遲，）抽樣后樣品送達(dá)實驗室的時間太遲， 使其不能在規(guī)定的時間內(nèi)進(jìn)行檢驗；使其不能在規(guī)定的時間內(nèi)進(jìn)行檢驗； （2 2）樣品溫度太高；）樣品溫度太高； （3 3）在轉(zhuǎn)運(yùn)中樣品遭到破損或受到污染。）在轉(zhuǎn)運(yùn)中樣品遭到破損或受到污染。 6 6 樣品的接收和預(yù)處理樣品的接收和預(yù)處理 若對這些樣品進(jìn)行分析，應(yīng)將情況記錄若對這些樣品進(jìn)行分析，應(yīng)將情況記錄并在分析報告中加以說明。并在分析報告中加以說明。 檢驗前，冷凍食品應(yīng)在最高溫度為檢驗前，冷凍食品應(yīng)在最高溫度為44下下解凍，不超過解凍，不超過

29、1818h h； 較小、易解凍的樣品可放置于最高溫度為較小、易解凍的樣品可放置于最高溫度為3737的恒溫箱內(nèi)最長達(dá)的恒溫箱內(nèi)最長達(dá)15 15 minmin。 6 6 樣品的接收和預(yù)處理樣品的接收和預(yù)處理 微生物學(xué)檢驗室在收到樣品后，必須及微生物學(xué)檢驗室在收到樣品后，必須及時準(zhǔn)備條件、組織力量進(jìn)行檢驗。時準(zhǔn)備條件、組織力量進(jìn)行檢驗。 送檢的樣品，一般需保持在送檢的樣品，一般需保持在2 288的環(huán)境的環(huán)境中，對于冷凍食品應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，直到檢中，對于冷凍食品應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，直到檢驗為止。驗為止。 6 6 樣品的接收和預(yù)處理樣品的接收和預(yù)處理 凍藏的樣品應(yīng)盡快放在冷藏的溫度下解凍，凍藏的樣品應(yīng)盡

30、快放在冷藏的溫度下解凍，亦可放在適宜溫度亦可放在適宜溫度(37)(37)下短時間下短時間(15(15min)min)使其使其解凍，但溫度必須較低，以防止病原菌死亡。解凍，但溫度必須較低，以防止病原菌死亡。 凍結(jié)樣品化凍時，必須小心放置于細(xì)菌生長凍結(jié)樣品化凍時，必須小心放置于細(xì)菌生長溫度之下以免使細(xì)菌數(shù)量增加。從容器中取出樣溫度之下以免使細(xì)菌數(shù)量增加。從容器中取出樣品、稱取樣品應(yīng)注意無菌操作。品、稱取樣品應(yīng)注意無菌操作。 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 除按國家標(biāo)準(zhǔn)方法對所需檢驗項目進(jìn)行除按國家標(biāo)準(zhǔn)方法對所需檢驗項目進(jìn)行檢測外，在實際工作中還應(yīng)注意以下幾個方面，檢測外，在實際工作中還應(yīng)注意以下幾個方面

31、，否則會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性：否則會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性： 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （1 1）在定量檢驗時用）在定量檢驗時用重量法重量法還是用還是用體積法體積法，檢驗，檢驗結(jié)果會有誤差，因為比重不等于結(jié)果會有誤差，因為比重不等于1 1的樣品，的樣品，1 1mLmL和和1 1g g的檢驗結(jié)果絕不會相等。的檢驗結(jié)果絕不會相等。 一般固態(tài)的樣品宜用重量法，液體樣品宜用一般固態(tài)的樣品宜用重量法，液體樣品宜用體積法。體積法。 但對于粘性液體但對于粘性液體( (如酸牛奶如酸牛奶) )，如用體積法，如用體積法，會粘附一定量的樣品在吸管上，因此此類樣品最會粘附一定量的樣品在吸管上，因此此類樣品最好用重量法。

32、好用重量法。 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （2 2）如檢樣需用無菌水或無菌生理鹽水稀釋，）如檢樣需用無菌水或無菌生理鹽水稀釋，則最好用勻質(zhì)器或組織搗碎機(jī)，以則最好用勻質(zhì)器或組織搗碎機(jī)，以800080001000010000轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/ /minmin的轉(zhuǎn)速處理的轉(zhuǎn)速處理1 1minmin，制成均勻的菌懸液。制成均勻的菌懸液。 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （3 3）樣品稀釋時，常會滯留少量樣品在吸管）樣品稀釋時，常會滯留少量樣品在吸管內(nèi)外，應(yīng)多加注意。內(nèi)外，應(yīng)多加注意。 吸管插入樣品或稀釋液中應(yīng)深淺一致，否吸管插入樣品或稀釋液中應(yīng)深淺一致，否則會影響檢驗結(jié)果；則會影響檢驗結(jié)果； 吸入液體后，應(yīng)沿管壁慢慢注

33、入遞增的稀吸入液體后，應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋液中，特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中，特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中。釋液中。 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （4 4）在培養(yǎng)基傾注入檢樣、菌懸液時，注意培）在培養(yǎng)基傾注入檢樣、菌懸液時，注意培養(yǎng)基溫度宜在養(yǎng)基溫度宜在45-5045-50之間，并使培養(yǎng)基與檢樣、之間，并使培養(yǎng)基與檢樣、菌懸液充分混合。菌懸液充分混合。 （5 5）微生物培養(yǎng)時，應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培）微生物培養(yǎng)時，應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時間。養(yǎng)溫度和時間。 7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （6 6）應(yīng)用無菌水或無菌生理鹽水作空白對照，）應(yīng)用無菌水或無菌生理鹽水作空白對

34、照，如果在空白對照中檢出細(xì)菌，則可認(rèn)為培養(yǎng)基如果在空白對照中檢出細(xì)菌，則可認(rèn)為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況。質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況。 另外，采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對照，觀察培另外，采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對照，觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況。養(yǎng)基的質(zhì)量情況。7 7 檢驗質(zhì)量檢驗質(zhì)量 （7 7）整個檢驗過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。）整個檢驗過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。 （8 8）及時檢查結(jié)果，做好原始數(shù)據(jù)記錄。）及時檢查結(jié)果，做好原始數(shù)據(jù)記錄。 8 8 校驗的執(zhí)行校驗的執(zhí)行 儀器設(shè)備檔案應(yīng)包含以下內(nèi)容儀器設(shè)備檔案應(yīng)包含以下內(nèi)容: : （1 1）儀器名稱、編號、啟用日期。）儀器名稱、編號、啟用

35、日期。 （2 2）常規(guī)校驗的方法和校驗周期。）常規(guī)校驗的方法和校驗周期。 （3 3）可以接受的操作范圍。）可以接受的操作范圍。 （4 4）儀器功能上的缺陷，如有克服缺陷）儀器功能上的缺陷，如有克服缺陷 的步驟應(yīng)詳細(xì)列出。的步驟應(yīng)詳細(xì)列出。 （5 5）常規(guī)維修的日期）常規(guī)維修的日期( (按制造商的推薦意按制造商的推薦意 見見) ) 。 8 8 校驗的執(zhí)行校驗的執(zhí)行 儀器只要不報廢，維修記錄均應(yīng)保存。儀器只要不報廢，維修記錄均應(yīng)保存。 實驗室應(yīng)預(yù)先制定儀器校驗計劃，并按計劃實驗室應(yīng)預(yù)先制定儀器校驗計劃，并按計劃對需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備經(jīng)符合資歷對需要強(qiáng)制性定期檢定的儀器和設(shè)備經(jīng)符合資歷計量

36、部門校驗，根據(jù)校驗結(jié)果決定對儀器設(shè)備繼計量部門校驗，根據(jù)校驗結(jié)果決定對儀器設(shè)備繼續(xù)使用、降級使用或停止使用。續(xù)使用、降級使用或停止使用。 8 8 校驗的執(zhí)行校驗的執(zhí)行 實驗室可根據(jù)需要對部分儀器進(jìn)行自校以實驗室可根據(jù)需要對部分儀器進(jìn)行自校以節(jié)約成本，但用于自校的計量工具必須經(jīng)過計節(jié)約成本，但用于自校的計量工具必須經(jīng)過計量部門校準(zhǔn)方可使用。量部門校準(zhǔn)方可使用。 9 9 標(biāo)準(zhǔn)菌株及其保存標(biāo)準(zhǔn)菌株及其保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株可以從國際菌種保藏中心標(biāo)準(zhǔn)菌株可以從國際菌種保藏中心（ATCCATCC）、國內(nèi)具有資質(zhì)菌種保藏中心（、國內(nèi)具有資質(zhì)菌種保藏中心（CMCCCMCC、ASAS、MIGMIG等等）等等）或室間質(zhì)

37、控活動中獲得，準(zhǔn)確鑒或室間質(zhì)控活動中獲得，準(zhǔn)確鑒定過的分離株也可使用。定過的分離株也可使用。 實驗室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)菌實驗室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)菌株，滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑質(zhì)量測試的需株，滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑質(zhì)量測試的需要。要。 標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存 保存菌株要定期傳代，注意無菌操作，使菌保存菌株要定期傳代，注意無菌操作，使菌株不污染、不死亡、不丟失；株不污染、不死亡、不丟失； 應(yīng)設(shè)專人妥善保管，菌株保存箱應(yīng)加鎖放置應(yīng)設(shè)專人妥善保管，菌株保存箱應(yīng)加鎖放置適宜環(huán)境，取出使用應(yīng)登記；適宜環(huán)境，取出使用應(yīng)登記；標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存 保存菌株應(yīng)建冊登記，基本項

38、目應(yīng)包括保存菌株應(yīng)建冊登記，基本項目應(yīng)包括菌種名稱、分離來源、分離日期、傳代日期、菌種名稱、分離來源、分離日期、傳代日期、保存方法、主要性狀、保管者、領(lǐng)用者等；保存方法、主要性狀、保管者、領(lǐng)用者等； 對保存菌種，經(jīng)傳代數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行一次系對保存菌種，經(jīng)傳代數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行一次系統(tǒng)生化反應(yīng)、血清學(xué)特性等生物學(xué)性狀觀察，統(tǒng)生化反應(yīng)、血清學(xué)特性等生物學(xué)性狀觀察，檢查其是否發(fā)生變異。檢查其是否發(fā)生變異。標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存 常見的參考菌株保存方法如下：常見的參考菌株保存方法如下： 細(xì)菌細(xì)菌 (1)(1)營養(yǎng)要求不高的需氧細(xì)菌在胰胨大豆瓊脂斜面上營養(yǎng)要求不高的需氧細(xì)菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活能存活1

39、 1年。年。 (2)(2)需氧或厭氧菌的長期儲存需冷凍干燥，或存放在需氧或厭氧菌的長期儲存需冷凍干燥，或存放在-70-70冰箱。冰箱。 (3)(3)營養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔營養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5 5年要解凍分離重年要解凍分離重新凍干，好氧菌每隔新凍干，好氧菌每隔3 3年重新凍干。年重新凍干。 (4)(4)細(xì)菌低溫冰凍保存時可懸浮于消毒去脂牛奶、含細(xì)菌低溫冰凍保存時可懸浮于消毒去脂牛奶、含15%15%甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中。甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中。 真菌真菌(1)(1)酵母菌按營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌同樣處理。酵母菌按營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌同樣處理。(2)(2)霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊

40、脂（霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDAPDA）斜面上，于）斜面上，于44儲存可達(dá)儲存可達(dá)6 6個月，斜面上覆蓋消毒石蠟油可個月，斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下較長時間存放。在室溫下較長時間存放。 10 10 實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制 10.1 10.1 內(nèi)部質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制 為保證實驗室連續(xù)評價結(jié)果的可靠性和精密度，為保證實驗室連續(xù)評價結(jié)果的可靠性和精密度，必須對所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測定。必須對所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測定。 對于不同的控制系統(tǒng)，實驗室必須建立限值，對于不同的控制系統(tǒng)，實驗室必須建立限值，超過限值應(yīng)采取糾偏措施。超過限值應(yīng)采取糾偏措施。 10.1 1

41、0.1 內(nèi)部質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制 實踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括：實踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括： （1 1）系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計數(shù)測定；）系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計數(shù)測定； （2 2）由同一檢驗人員和幾個檢驗人員作平）由同一檢驗人員和幾個檢驗人員作平 行樣；行樣； （3 3）定期或不定期進(jìn)行盲樣測試。）定期或不定期進(jìn)行盲樣測試。 （實驗室內(nèi)部比對試驗）（實驗室內(nèi)部比對試驗） 10.210.2外部質(zhì)量控制外部質(zhì)量控制 實驗室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動，對其開實驗室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動，對其開展的每一項檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。展的每一項檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。（實驗室間比對）（實驗室

42、間比對） 對有關(guān)實驗室或管理機(jī)構(gòu)發(fā)出的測試樣品應(yīng)對有關(guān)實驗室或管理機(jī)構(gòu)發(fā)出的測試樣品應(yīng)嚴(yán)格地當(dāng)作普通樣品一樣處理，這樣一種方法嚴(yán)格地當(dāng)作普通樣品一樣處理，這樣一種方法有助于實驗室每天測試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，是有助于實驗室每天測試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，是對實驗室所用的方法、試劑、設(shè)備和人員能力對實驗室所用的方法、試劑、設(shè)備和人員能力的測試。的測試。 實驗室能力驗證實驗室能力驗證 （CNASCNAS、CNCACNCA、CMACMA等組織的比對試驗）等組織的比對試驗） 10 10 實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制 從室間樣品測試中的錯誤可以發(fā)現(xiàn)實驗室的從室間樣品測試中的錯誤可以發(fā)現(xiàn)實驗室的不足之處，對工作人員進(jìn)行培訓(xùn)、教育，可以提不足之處，對工作人員進(jìn)行培訓(xùn)、教育，可以提高實驗室的檢測質(zhì)量。高實驗室的檢測質(zhì)量。 對反饋的室間測定評級中存在的問