免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測應(yīng)用

1、免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用組員：Page 2小組成員分工小組成員分工資料搜索： PPT制作：后期審閱：所選論文：免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用論文作者：郎需龍 劉文森 王興龍 作者所在單位： 解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 軍事獸醫(yī)研究所動物性食品安全研究室論文發(fā)表日期：2009年5月25日Page 3 本小組所選的論文中一共提到8種免疫學(xué)技術(shù)，但其中只有4種是我們學(xué)過的，因此本次的PPT匯報中僅列出了學(xué)過的4項(xiàng)。Page 4免疫熒光技術(shù) 論文中提及的檢測技術(shù)論文中提及的檢測技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫芯片 免疫傳感器技術(shù)Page 5酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(

2、ELISA) 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，是將可溶性抗原（抗體）吸附到某種固相載體表面，并保持抗原（抗體）免疫活性，這樣在與標(biāo)本中的抗體（抗原）反應(yīng)后，只需經(jīng)過固相洗滌的洗滌，就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。Page 6試驗(yàn)操作圖和試驗(yàn)專用儀器試驗(yàn)操作圖和試驗(yàn)專用儀器Page 7試驗(yàn)所需試劑試驗(yàn)所需試劑Page 8Page 9ELI

3、SA法在食品安全監(jiān)測中的應(yīng)用法在食品安全監(jiān)測中的應(yīng)用 1977年LaWell首先采用了ELISA法來檢測了黃曲霉毒素，目前食品中許多致病菌如沙門氏菌、大腸桿菌O157等微生物都可用此方法來進(jìn)行檢測。另外主要的藥物殘留如抗生素類，碘胺藥類、呋喃類、抗球蟲類，激素藥類和驅(qū)蟲藥類等的ELISA檢測方法都已經(jīng)建立。其中T-2毒素、黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀烯醇等的ELISA檢測方法已列入我國標(biāo)準(zhǔn)方法?；贓LISA方法的檢測抗生素、農(nóng)藥、食品添加劑等的殘留檢測試劑盒已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。Page 10單擊此處添加標(biāo)題單擊此處添加標(biāo)題間接法雙抗體夾心法競爭法捕獲法Page 11間接法間接法 間接法是檢測抗

4、體最常用的方法，將已知抗原吸附于固相載體，加入待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合形成固體抗原復(fù)合物。洗滌后，計入酶標(biāo)二抗與故鄉(xiāng)復(fù)合物中的抗體結(jié)合，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。最后加酶的底物顯色，終止反應(yīng)后，目測性或用酶標(biāo)儀測光密度值測定，顏色的深度與標(biāo)本中受檢抗體的量成正比。Page 12雙抗體夾心法雙抗體夾心法 雙抗體夾心法常用于測定大分子及顆粒多價抗原。將已知抗體A吸附于固相載體上，加入待檢標(biāo)本（喊相應(yīng)抗原）與之結(jié)合形成固相抗體-A-抗原復(fù)合物。溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體B形成固相抗體-A-抗原-酶標(biāo)抗體B夾心式復(fù)合物，固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中待測物質(zhì)量成正比。最后加入底物，夾心式

5、復(fù)合物的酶催化底物成為有色產(chǎn)物，顏色的深度與抗原的量成正比。Page 13競爭法競爭法 將抗原連接到固相載體上，樣品中待測抗體與之結(jié)合成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物，再用酶標(biāo)二抗(針對受檢抗體的抗體，如羊抗人IgG抗體)與固相免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合，形成固相抗原-受檢抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，測定加底物后的顯色程度，確定待測抗體含量。Page 14捕獲法捕獲法 捕獲法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。先將針對IgM的第二抗體（如羊抗人IgM鏈抗體）連接于固相載體，用以結(jié)合（“捕獲”）樣品中所有IgM（特異或非特異），洗滌出去IgG等無關(guān)物質(zhì)，然后加入特異抗

6、原與待檢IgM結(jié)合；再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，最后形成固相二抗- IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加酶底物作用顯色后，即可對樣品中待檢IgM是否存在及其含量進(jìn)行測定。Page 15免疫熒光技術(shù)Page 16免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)基本原理： 免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及

7、利用定量技術(shù)測定含量。Page 17Page 18方法分類方法分類n直接法n間接法n補(bǔ)體法Page 19直接法直接法Page 20Page 21Page 22免疫傳感器技術(shù)Page 23 免疫傳感器技術(shù)是將免疫測定技術(shù)和傳感器技術(shù)相結(jié)合的一類新型生物傳感器，該技術(shù)具有精確度、靈敏度高、特異性強(qiáng)、樣品前處理簡單的特點(diǎn)。其選擇性好、操作簡單、攜帶方便、能重復(fù)利用，并能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場檢測盒在線檢測等優(yōu)點(diǎn)，有望成為食品安全檢測中最有效的新技術(shù)。Page 24 免疫傳感器是以抗原抗體作為分子感應(yīng)器的生物傳感器，利用抗原與抗體專一性結(jié)合引起的直接或間接物理化學(xué)變化，通過一定的信號轉(zhuǎn)化，大多轉(zhuǎn)化為光信號，再經(jīng)過放

8、大處理即可檢測出反應(yīng)物量的變化，通過相關(guān)儀器可以進(jìn)行某些物質(zhì)的分析檢測。 免疫傳感器一般有三部分組成：分子感應(yīng)器、轉(zhuǎn)導(dǎo)體、電子濾波放大器 免疫傳感器類型：非標(biāo)記免疫傳感器和標(biāo)記免疫傳感器Page 25非標(biāo)記免疫傳感器非標(biāo)記免疫傳感器 抗原抗體直接或間接的方式連接至轉(zhuǎn)導(dǎo)體上，當(dāng)抗原和抗體在相互結(jié)合后，它們的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，這種結(jié)構(gòu)的改變可以通過化學(xué)、光學(xué)、壓電和熱量改變的變化表現(xiàn)出來，從而能被轉(zhuǎn)導(dǎo)體直接或間接檢測到。Page 26標(biāo)記免疫傳感器標(biāo)記免疫傳感器 標(biāo)記免疫傳感器不是直接檢測抗原抗體反應(yīng)，而是檢測免疫復(fù)合物上標(biāo)記物的信號（如熒光、放射性、酶催化反應(yīng)），因?yàn)槭褂昧司哂谢瘜W(xué)放大作用作用的標(biāo)

9、記物，因此，其靈敏度比非標(biāo)記免疫傳感器有顯著提高。Page 27免疫傳感器在食品中的應(yīng)用免疫傳感器在食品中的應(yīng)用 免疫傳感器在食品中的應(yīng)用，主要體現(xiàn)在對食品中的有毒有害物質(zhì)的檢測。食品中的有毒有害物質(zhì)有生物性物質(zhì)，如細(xì)菌、真菌、有毒動植物和病毒及其產(chǎn)生的毒素或特征蛋白質(zhì)。目前已成功運(yùn)用于測定污染食品的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門菌，利用光纖傳感器與核酸放大系統(tǒng)相偶聯(lián)，可檢測食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物質(zhì)（包括農(nóng)藥、激素等小分子半抗原物質(zhì)）。Page 28免疫芯片Page 29 免疫芯片分析的實(shí)質(zhì)是在很小的表面積上有序的集成多重抗原（或抗體），利用抗原與抗體可進(jìn)行特異性的結(jié)合反應(yīng)來進(jìn)行檢測。 免疫芯片是由于固定于不同種類支持載體上的抗原或抗體微陣列組成，陣列中固定成分的位置及組成是已知的，用標(biāo)，然后精確定位提取信號，通過計算機(jī)綜合記錄分析。 免疫芯片根據(jù)原理不同可分為間接法、雙抗體夾心法、競爭法免疫芯片和免疫-PCR芯片。Page 30免疫芯片構(gòu)建步驟免疫芯片構(gòu)建步驟一、確定檢測目標(biāo)，建立抗原抗體庫二、載體及抗原或抗體的固定三、抗