常規(guī)標(biāo)本制作程序

1、常規(guī)標(biāo)本制作程序第一節(jié) 組織標(biāo)本收集取材固定一， 標(biāo)本收集和查驗(yàn)程序。對(duì)于所有送檢的標(biāo)本，必須認(rèn)真執(zhí)行查驗(yàn)程序，方能進(jìn)入下一程序，其主要程序是：1， 收集標(biāo)本時(shí)：要仔細(xì)查對(duì)申請(qǐng)單上的姓名與標(biāo)本上的姓名，序號(hào)是否一致；標(biāo)本的件數(shù)與申請(qǐng)單是否相符；標(biāo)本是否用固定液固定過(guò)。2， 標(biāo)本經(jīng)上述驗(yàn)收后，進(jìn)行編號(hào)登記，以防錯(cuò)亂。編號(hào)按年份和流水號(hào)兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號(hào)為較好。二， 活檢組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對(duì)于每一例病例的材料，大小都不一樣，但對(duì)于較大的標(biāo)本，不可能都對(duì)其進(jìn)行制作切片，因此，選擇適合于病理技術(shù)制作，適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病理活

2、檢的關(guān)鍵，通常把這過(guò)程稱為取材。（一）取材時(shí)必須注意以下問(wèn)題： 取出所有送檢的標(biāo)本，量其大小，稱其重量，描寫(xiě)其色澤，質(zhì)地，形狀和肉眼所見(jiàn)表面情況。當(dāng)標(biāo)本切開(kāi)后，應(yīng)詳細(xì)描寫(xiě)其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時(shí)繪圖說(shuō)明。 對(duì)于細(xì)小標(biāo)本如肺支氣管穿刺物標(biāo)本胃腸鏡活檢標(biāo)本1等，應(yīng)將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。 對(duì)于有傳染性的標(biāo)本，讓標(biāo)本徹底固定后再取材。如結(jié)核瘤標(biāo)本等。 對(duì)于罕見(jiàn)特殊的標(biāo)本，應(yīng)小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標(biāo)本。以利于教學(xué)標(biāo)本，陳列標(biāo)本的收集。 邊取材邊固定，組織標(biāo)本較多的單位，取材經(jīng)常要花上幾個(gè)小時(shí)，如果從下午2：3

3、0開(kāi)始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定幾個(gè)小時(shí)，如此可以防止固定時(shí)間不足，同時(shí)也可防止組織發(fā)生自溶。 對(duì)于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘左右，然后再與其它組織進(jìn)行處理。 骨組織和鈣化組織，應(yīng)徹底脫鈣后，方能進(jìn)行制作。具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。 活檢組織取材，不能太厚，以不超過(guò)2mm為宜。以防脫水不徹底，不利于制片。 每取完一例標(biāo)本后，所有的工具如刀，剪，盤(pán)鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。 組織取完即刻放入打印好號(hào)碼的盒內(nèi)，放入固定液中固定。（二） 各種器官及其腫瘤取材的方法1、乳腺： 纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切

4、面是否均勻，有無(wú)壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫瘤可取1塊）。乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無(wú)水腫或變硬，腫大淋巴結(jié)，數(shù)量，組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長(zhǎng)徑經(jīng)過(guò)乳頭切開(kāi)，觀察腫瘤的面積，顏色，硬度及浸潤(rùn)情況等。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應(yīng)取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。2、食管癌： 切除的食管長(zhǎng)度及周徑，管壁有無(wú)水腫或粘連，腫大淋巴結(jié)的位置，大小，硬度及數(shù)目。沿腫瘤對(duì)側(cè)縱形切開(kāi)，腫瘤大小及形狀。取材：腫瘤上下交界處各取

5、一塊。或沿長(zhǎng)軸通過(guò)腫瘤全徑取出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋3、胃潰瘍及胃癌：全胃或部分切除，大彎及小彎長(zhǎng)度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，硬度及數(shù)目，病變處相應(yīng)漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開(kāi)，觀察病變大小，深度，邊緣及周?chē)兓?，如為癌瘤，屬何種類型，與大小切端的距離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織（盡量側(cè)重于小彎，并注意沿長(zhǎng)軸切取組織塊），上下切端組織，腫大的淋巴結(jié)（注明組別）4、闌尾：一般于近、中、遠(yuǎn)三段各取一組織塊，遠(yuǎn)端一塊盡量靠近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開(kāi)者，沿縱軸取組織塊，如檢查時(shí)不能發(fā)現(xiàn)病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。5、腸癌：切除腸管的長(zhǎng)度，腫瘤

6、生長(zhǎng)部位、大小、局部漿膜等情況。如為十二指腸癌，則應(yīng)注意與特氏壺腹的關(guān)系。取材：腫瘤 及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結(jié)。6、腸梗阻：梗阻部位、長(zhǎng)度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無(wú)潰瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊。7、腸套疊：注意套疊部位及套疊 關(guān)系，尋找闌尾，腸壁是否增厚及變硬，以手指放入小腸為引導(dǎo)，沿腸系膜 剪開(kāi)，尋找有無(wú)原發(fā)病變（在套入部位的最前端尋找有無(wú)腫瘤、潰瘍等到變化）。切面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變

7、等到情況。取材：原發(fā)病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結(jié)。8、腸結(jié)核：外部有無(wú)粘連，白色斑塊、結(jié)節(jié)、狹窄，病變上下的腸段有何改變，有無(wú)淋巴結(jié)腫大。沿病變對(duì)側(cè)切開(kāi)，觀察病變情況（潰瘍、突起、體積、有無(wú)息肉樣改變，腸道是否變?yōu)楠M窄或增厚）。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無(wú)結(jié)節(jié)狀或纖維組織增生，有無(wú)灰白色結(jié)節(jié)等。取材：包含各病變的組織，如標(biāo)本較小，全部切取。10、陰莖癌：腫瘤生長(zhǎng)的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤(rùn)情況，切端與腫瘤明顯浸潤(rùn)處的距離?？v切（通過(guò)尿管）觀察切面情況。取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。11、腎結(jié)核：注入

8、福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑，有無(wú)粘連、灰白色小結(jié)節(jié)，輸尿管長(zhǎng)度，直徑，及硬度。沿輸尿管及腎盂切開(kāi)，腎盂是否擴(kuò)張，切面破壞情況，粘膜變化，主質(zhì)變化，乳頭情況，（注明哪一個(gè)）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜情況。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。12、腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、表面性狀（色澤、平滑否、結(jié)節(jié)、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切開(kāi)，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴(kuò)張情況，腎實(shí)質(zhì)厚度。取材：腎實(shí)質(zhì)厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關(guān)系，表面有無(wú)水腫或粘連，有無(wú)腫大淋巴結(jié)。切面：腫瘤位置

9、、形狀、大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無(wú)蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般沿前側(cè)切開(kāi)，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長(zhǎng)情況及浸潤(rùn)情況，有無(wú)淋巴結(jié)（大小，硬度，切面變化）。取材：沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應(yīng)包括蒂部組織，三角區(qū)組織。15、前列腺：形態(tài)，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色，質(zhì)均勻否，有無(wú)壞死，出血，囊性變。作多個(gè)與尿道垂直的平行切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時(shí)在發(fā)黃處盡量多切，包含尿道。16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林

10、固定。檢察前應(yīng)觀察X線片。病變與支氣管有關(guān)者，沿支氣管切開(kāi)；病變不沿支氣管者，可作書(shū)頁(yè)狀切開(kāi)： 肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠(yuǎn)，大小，形狀，質(zhì)地是否均勻，有無(wú)壞死、空洞、邊緣有無(wú)纖維組織圍繞或不規(guī)則浸潤(rùn)，是否壓迫支氣管干，肺門(mén)淋巴結(jié)情況。取材：癌組織，癌與正常組織的交界處，支氣管斷端，肺門(mén)或局部淋巴結(jié)。 支氣管擴(kuò)張：新鮮時(shí)剪開(kāi)，系囊形或圓柱形（管形）擴(kuò)張，屬哪級(jí)支氣管，擴(kuò)張的支氣管之直徑，或?qū)挾?，管壁厚度，顏色周?chē)M織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔有無(wú)膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴(kuò)張的支氣管，支氣管周?chē)l(fā)炎組織，膿腫壁。 肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質(zhì)及氣味，有無(wú)懸梁

11、狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管相通，有無(wú)散布的小膿腫，有無(wú)支氣管擴(kuò)張，支氣管中有無(wú)異物，膿腫內(nèi)有無(wú)硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫有關(guān)的支氣管，肺組織。 肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無(wú)膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內(nèi)為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門(mén)淋巴結(jié)情況。取材：空洞壁，散播的病變，肺門(mén)淋巴結(jié)。 肺囊腫：數(shù)目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與支氣管的關(guān)系，收集囊內(nèi)液體檢查其性狀。取材：囊腫壁及其旁肺組織，如為包蟲(chóng)病，則應(yīng)在包蟲(chóng)囊的液體中尋找子囊及幼蟲(chóng)頭節(jié)（離心后）。17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿

12、脾長(zhǎng)軸作多個(gè)平行切開(kāi)，在切面上看包膜及脾髓情況。 淤血性脾腫大或脾功能亢進(jìn)，注意靜脈內(nèi)有無(wú)血栓，靜脈壁有無(wú)變化，有無(wú)梗死，切面上有無(wú)含鐵小結(jié)節(jié)。 脾破裂：注意踴裂部位，長(zhǎng)度，有無(wú)血凝塊充填破裂口。取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門(mén)附近包括較大的血管，如有副脾，淋巴結(jié)各一塊，脾破裂應(yīng)包括裂呂充物。18、淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。取材：整個(gè)短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤無(wú)關(guān)部剔除，然后鋸開(kāi)，有條件者，可與鋸開(kāi)前攝X線片以作比較。檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出

13、血，壞死，囊變，何處為原發(fā)，與骨膜 ，骨皮質(zhì)及骨髓之間關(guān)系，有無(wú)破壞情況，有無(wú)包膜，其厚度及硬度，無(wú)包膜者注意其對(duì)軟組織浸潤(rùn)情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤(rùn)處。20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無(wú)結(jié)節(jié)，尋找背面有無(wú)甲狀旁腺，切面質(zhì)地是否均勻，含膠質(zhì)狀況，有無(wú)結(jié)節(jié)，出血，壞死，鈣化，囊變等，有無(wú)細(xì)小灰白色疤痕樣病變。甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位， 大小， 包膜完整否，切面質(zhì)地，有無(wú)出血，壞死，鈣化，囊性變及其內(nèi)容物，有無(wú)乳頭或絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無(wú)灰白色小節(jié)。取材：最大面積，切成數(shù)塊全作切片，如為根治術(shù)，要取全部淋巴結(jié)。21、刮宮或陰道排出物標(biāo)志：疑有妊娠者，須仔細(xì)尋找有

14、無(wú)胎盤(pán)絨毛，眼觀不能判斷時(shí)，須取組織塊，尤應(yīng)注意檢查血凝塊。22、子宮標(biāo)本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與子宮頸12點(diǎn)，3點(diǎn)，6點(diǎn)，9點(diǎn)處取宮頸及宮頸內(nèi)膜交界處組織，必要時(shí)取其他各點(diǎn)組織。23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應(yīng)稱其重量，表面色澤，光滑度，與輸卵管的關(guān)系，有無(wú)粘連，囊性者自膨大部遠(yuǎn)端剪開(kāi)，查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內(nèi)壁光滑度，有無(wú)質(zhì)或乳頭狀生長(zhǎng)區(qū)，乳頭脆性，囊內(nèi)容物性質(zhì)。實(shí)性腫瘤切面色澤、硬度，有無(wú)出血，壞死，變性等。 取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實(shí)質(zhì)，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。實(shí)性瘤取邊緣及中央不同結(jié)構(gòu)組織及輸卵管。24、胎盤(pán)：形狀，大小，重量，母體面絨毛

15、有無(wú)缺損、出血、鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長(zhǎng)度，直徑，有無(wú)扭轉(zhuǎn)打結(jié)、血管栓塞等。取材：母體面、子體面臍帶各一塊。25、瘺管或竇道組織：應(yīng)作多數(shù)橫斷面檢查，適當(dāng)取材。26、眼球標(biāo)本：標(biāo)本固定后，先經(jīng)緩慢脫水至今95%酒精，然后切開(kāi)，除病變部位特殊取材外，一般取水平切面，通過(guò)視神經(jīng)和瞳孔。要求保存眼球隊(duì)的完整性，如結(jié)膜、視神經(jīng)、黃斑及晶狀體等，都應(yīng)完整無(wú)缺，切時(shí)刀刃銳利，以免人為地?fù)p壞眼球結(jié)構(gòu)。若須行火棉膠切片，而本單位無(wú)條件時(shí)，可送到有關(guān)單位檢查。27、軟組織腫瘤標(biāo)本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無(wú)包膜，完整否，硬度，切面有無(wú)出血、壞死、囊性變等，與周?chē)M織的關(guān)系，切面

16、暴露最大面，必要時(shí)多作幾個(gè)平行切面。取材：腫瘤，周?chē)M織，切端組織。28、其它標(biāo)本：依上述原則檢查及取材，如標(biāo)本有特殊情況，則依其特點(diǎn)處理。2第三節(jié) 常規(guī)病理標(biāo)本的制作程序 常規(guī)組織固定在組織病理學(xué)中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標(biāo)本的保存，都必須進(jìn)行及時(shí)的適當(dāng)?shù)暮陀行У墓潭ā＝M織只有經(jīng)過(guò)固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個(gè)醫(yī)務(wù)工作人員都能容易地把組織固定起來(lái)，但是，要清楚了解固定的過(guò)程及其定義是一件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。（一）、固定的作用 組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡(jiǎn)

17、單的定義是，保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)；防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴(kuò)散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時(shí)，不產(chǎn)生過(guò)深的背景，影響對(duì)陽(yáng)性物的判斷。（二）固定的目的1、 能防止細(xì)菌的腐蝕和組織的自溶。細(xì)菌無(wú)處不存在，它們隨時(shí)都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都 由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細(xì)菌也就失

18、去了活力。另者，在日常生活中，人們常可碰到這樣的問(wèn)題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會(huì)變質(zhì)，這是為什么呢？除了細(xì)菌參與外，其本身也是很重要的。因?yàn)榻M織離體后，供應(yīng)這此組織的血液隨之消失，細(xì)胞缺氧，細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的肉變質(zhì)，就是細(xì)菌污染加組織自溶的結(jié)果。2、 保存細(xì)胞固有的物質(zhì)，能凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)或組織液，糖元等，使細(xì)胞或組織基本上保持與生活時(shí)的物質(zhì)一樣。細(xì)胞的固有物質(zhì)，即細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過(guò)氧體，細(xì)胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質(zhì)，如果不將其及時(shí)固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應(yīng)特別小心。3、

19、 使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒(méi)有固定時(shí)就取材，效果就很差，不是取材不規(guī)整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開(kāi)，因此，要取得規(guī)整標(biāo)致的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。4、 對(duì)某些具有傳染性的標(biāo)本，能防止疾病的擴(kuò)散。病理標(biāo)本、種類繁多，成份復(fù)雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結(jié)核、肝炎、麻風(fēng)、性病等等。對(duì)于此類標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行徹底的固定后，再行取材，如結(jié)核球，固定時(shí)間應(yīng)在3-5天。5、 保存好大體標(biāo)本。對(duì)于有教學(xué)任務(wù)的醫(yī)院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價(jià)值的大體標(biāo)本，有些大體標(biāo)本，是很難得到的。因此要求在平時(shí)就

20、要留心觀察，小心處理。遇到有教學(xué)價(jià)值的罕見(jiàn)的典型的標(biāo)本，就必須及時(shí)固定，認(rèn)真給予對(duì)待。6、 可增強(qiáng)染色的作用。組織經(jīng)過(guò)及時(shí)的固定，最終可見(jiàn)到切片有鮮艷的染色，而些時(shí)如果有一批未經(jīng)及時(shí)固定的組織，將看到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定可以增強(qiáng)染色的作用。（三）固定的注意事項(xiàng)1、 組織固定越新鮮越好。組織一經(jīng)離體，就能及時(shí)地固定，這是最好的。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對(duì)于其它達(dá)不到些要求是越快越好。2、 組織固定，組織塊不宜過(guò)大。凡是需要固定的組織，都不應(yīng)該太大太厚，這是因?yàn)樗械墓潭ㄒ捍┩噶Σ粔驈?qiáng)，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的

21、組織，不經(jīng)處理就進(jìn)行固定，那么待固定液進(jìn)入至中間對(duì)可能這些組織早就發(fā)生自溶了。因此，對(duì)于較大的組織，必須先進(jìn)行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應(yīng)將其剪開(kāi)，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開(kāi)，沒(méi)固定時(shí)，難以取得最佳制片材料，對(duì)于產(chǎn)酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。3、 對(duì)不同類型的組織應(yīng)適當(dāng)合理地選擇固定液。有的固定液對(duì)于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學(xué)試劑，有液體和固體之分，一般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用于實(shí)驗(yàn)研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復(fù)雜，對(duì)組織的

22、作用不盡相同，英國(guó)著名的組織化學(xué)專家Pearse指出：對(duì)于每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來(lái)說(shuō)，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學(xué)研究準(zhǔn)備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分的反應(yīng)基團(tuán)的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止?jié)B透損傷和妝縮，以達(dá)到在各級(jí)可見(jiàn)度的水平皆無(wú)形態(tài)變化；要求組織所有的成分能保留于原位。他認(rèn)為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于達(dá)到上述要求。4 為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來(lái)，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認(rèn)真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對(duì)組織有明顯的皺縮，

23、硬化作用，平常它是決不會(huì)被用來(lái)作固定液的，用它不但太浪費(fèi)，造價(jià)太高，而且也使切片較為困難，但是，對(duì)于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細(xì)胞的培養(yǎng)等。最好的固定液還是丙酮。因?yàn)槿绻褂酶栺R林固定液、石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會(huì)消失掉，又如醋酸，它對(duì)膠原纖維等有膨脹的作用。由于各種固定液對(duì)不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據(jù)各種固定液的優(yōu)缺點(diǎn)，配制出許多混合液的方法來(lái)，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對(duì)組織固定很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對(duì)固定脫水盒為銅質(zhì)的組織

24、時(shí)，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對(duì)抗原的損害，對(duì)于免疫組織化學(xué)的顯示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：可呈弱陽(yáng)性乃至陰性。由此可見(jiàn)，固定液的選擇正確與否決定著對(duì)某些病例的免疫組化標(biāo)記的成敗關(guān)鍵。在我們的日常工作科研中，對(duì)于組織的固定，應(yīng)有針對(duì)性的選擇，方能獲得滿意的效果。4、 組織固定，時(shí)間不宜太短，也不宜太長(zhǎng)。時(shí)間太短，就不能很多的固定組織，因?yàn)椴还芙M織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時(shí)間，時(shí)間太短，就會(huì)影響組織固定的效果，對(duì)以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時(shí)間太長(zhǎng)，也不好。組織長(zhǎng)時(shí)間的固定，福爾馬林會(huì)產(chǎn)生一種酸，影響核的染色。對(duì)于固定很長(zhǎng)時(shí)

25、間的陳列性標(biāo)本制片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長(zhǎng)時(shí)間的固定往往會(huì)出現(xiàn)福爾馬林色素，尤其是造血器官的標(biāo)本，更應(yīng)注意。固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可降低抗原的活性。5、 固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認(rèn)為，固定液的量與組織的比應(yīng)是20：1，這個(gè)要求對(duì)于小組織來(lái)說(shuō)是完全可以達(dá)到的，但對(duì)于大標(biāo)本來(lái)說(shuō)，則是一件非常困難的事情。因?yàn)閷?duì)于大醫(yī)院來(lái)說(shuō)，每天都有幾十上百例的標(biāo)本，小如大頭針大小，大的達(dá)幾十斤的腫瘤，對(duì)于這樣大的標(biāo)本，按20：1的比例來(lái)做，顯然是不可能的事，既要做到組織能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對(duì)于大的標(biāo)本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因?yàn)?/p>

26、在現(xiàn)實(shí)111當(dāng)中，大的標(biāo)本往往露出容器一大半，因此對(duì)于這種情況，應(yīng)取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風(fēng)干，影響制片效果。6、 特殊病例或特殊物質(zhì)應(yīng)選擇特殊的固定液。一般的病例標(biāo)本，如沒(méi)特殊的要求，都可以應(yīng)用甲醛配成的各種固定液來(lái)固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時(shí)，應(yīng)用上述的的固定液就不行了，必須采用丙酮來(lái)固定，顯示糖元，可選擇無(wú)水酒精或丙酮來(lái)固定組織。固定劑是一種化學(xué)語(yǔ)試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對(duì)每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來(lái)說(shuō)，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學(xué)研究中的準(zhǔn)備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道

27、它們對(duì)于各種組織成分反應(yīng)基團(tuán)的效用。7、 組織的第二次固定或后固定。在一般的常規(guī)病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達(dá)到目的，獲得滿意的結(jié)果。但是，對(duì)于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據(jù)不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫紋肌肉瘤，由于腫瘤細(xì)胞發(fā)育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進(jìn)行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進(jìn)行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來(lái)。否則，效果不佳。另外，電鏡固定的標(biāo)本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。（四）固定液的使用當(dāng)前

28、，應(yīng)用于固定試劑的種類較多，它們對(duì)于固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們?cè)谑褂脮r(shí)應(yīng)該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據(jù)Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。類：其他，氯化汞，苦味酸等。5上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術(shù)方面中用到。下面根據(jù)使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。（十）甲醛甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛3740%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為1.12。它也可以

29、穩(wěn)定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，這種在組織化學(xué)方法當(dāng)中，能使酶鈍化，影響其反應(yīng)。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標(biāo)本或長(zhǎng)時(shí)間固定的組織，由于酸的作用，往往細(xì)胞核染色欠佳。甲醛有效固定作用的要點(diǎn)是，在蛋白質(zhì)末端基團(tuán)之間形成交聯(lián)鏈。參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)。甲醛與組織蛋白類的反應(yīng)是多樣和復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯(lián)的功能，也是它的缺點(diǎn)，在用甲醛固定過(guò)的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗

30、原修復(fù)法來(lái)使蛋白與甲醛交聯(lián)的醛鍵斷裂開(kāi)，以利于后來(lái)的染色。甲醛可配成簡(jiǎn)單的或混合的固定液，最簡(jiǎn)單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林.當(dāng)然,現(xiàn)在使用的固定液要求較為嚴(yán)格些,最好是使用緩沖福爾馬林固定液,這將有利于后來(lái)的免疫組化染色的需要.從組織學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)說(shuō),甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優(yōu)點(diǎn):1. 組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.2. 固定均勻,穿透力強(qiáng).3. 能使組織硬化,增進(jìn)組織彈性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂類物質(zhì).5. 成本較低.雖然甲醛有上述的優(yōu)點(diǎn),但這都是相對(duì)而言,任何物質(zhì)都不可能十全十美的,它也有許多缺點(diǎn):1. 雜質(zhì)含量較

31、多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應(yīng).2. 含有微量甲酸,導(dǎo)致固定液酸變,影響染色.3. 可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.4. 不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5. 容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.6. 可長(zhǎng)期存在于固定過(guò)的組織上.有人做過(guò)實(shí)驗(yàn),組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,但需要經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去.可見(jiàn)存在于組織上的甲醛是不可能除去的.因?yàn)榕R床活檢不可能有這么長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)沖洗組織.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會(huì)給各種染色造成影響,甚至導(dǎo)致失敗.應(yīng)用甲醛,可以配成許多種固定

32、液:1. 10%緩沖福爾馬林固定液甲醛 100ml蒸餾水 900mlNaH2PO4H2O 4gNa2HPO4 (無(wú)水) 6.5g該固定液是當(dāng)今流行的固定液,因它對(duì)組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫娴难芯慷驾^好,尤其是對(duì)免疫組化的染色.2、10%福爾馬林固定液甲醛100 ml自來(lái)水900ml這是一種最簡(jiǎn)單的固定液，適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。3、10%福爾馬林鹽固定液甲醛100 ml自來(lái)水900mlNacl9克先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡(jiǎn)單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進(jìn)和

33、改善染色，增加染色的強(qiáng)度。4、Bouin氏固定液苦味酸飽和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml該固定液中的冰醋酸，對(duì)膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平。5醛糖鈣固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸鈣20g蒸鎦水90ml先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外基本上都還是要用甲醛來(lái)固定組織。從免疫組織化學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化的手段來(lái)檢測(cè)，據(jù)多人認(rèn)為，它對(duì)lgA ，lgM，J鏈，K鏈和鏈的

34、標(biāo)記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經(jīng)它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯(lián)蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。固此，在免疫組化實(shí)際檢測(cè)中，應(yīng)根據(jù)不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修復(fù)如微波、高壓等的方法，以便破壞醛鍵重新暴露抗原。（2）酒精：又稱乙醇，為無(wú)色透明的液體，沸點(diǎn)是78度，工業(yè)酒精是95%。酒精它有許多優(yōu)點(diǎn)：1、 可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。高濃度的酒精如95%，無(wú)水酒精可保存上述兩種物質(zhì)，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物質(zhì)的存在，就不能用含水的固定液來(lái)固定組織。2、 能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術(shù)中，酒精是一種十分重要的試劑，它起著關(guān)鍵的作用。如果沒(méi)有酒精，將會(huì)無(wú)法完

35、成必要的工作。如組織的脫水，切片染色前后都離不開(kāi)酒精，在常規(guī)的工作中，通常都用95%的工業(yè)酒精來(lái)配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來(lái)使用。3、 可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進(jìn)行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等，常用的有苯類試劑，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在這里充擔(dān)著除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋梁，因此稱它為橋梁試劑。4、 能除去切片上的水份，使切片無(wú)水化。切片經(jīng)染色后，由于所用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經(jīng)系列梯度酒精的置換吸附后，到無(wú)水酒精中已完全無(wú)水，這樣處理對(duì)于切片的保存是有好處的，否則

36、，切片將會(huì)褪色。5、 可用來(lái)保存標(biāo)本。大體標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定后，如為了陳列保存，必須取出沖冼。然后移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列標(biāo)本的固定液，則因?yàn)楦栺R林含有雜質(zhì)較多，液體容易酸化，時(shí)間一長(zhǎng)，會(huì)逐漸變?yōu)槲ⅫS色或淡黃色，影響美觀，影響陳列的效果。6、 可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時(shí)為了加快固定，常采用酒精和其它試劑來(lái)配成混合固定液，這種固定液在固定的同時(shí)，兼有對(duì)組織脫水的作用。應(yīng)用酒精配成的混合固定液有： Carnoy氏固定液氯仿 300ml冰醋酸 100 ml95%酒精 600 ml該固定液固定組織快速，在固定的同時(shí)兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對(duì)組織的收縮較厲害，但

37、應(yīng)用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被中和去。 AF固定液甲醛 100 ml 冰醋酸 50 ml95%酒精 850 ml這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應(yīng)，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測(cè)的失敗。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意。酒精也有許多不足之處，它的缺點(diǎn)是：1、 可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時(shí)，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，因?yàn)榫凭蓪⑺鼈內(nèi)芙馊?，而石蠟切片組織中含有的脂類物質(zhì)，則在組織脫水時(shí)被溶解去，只留下脂類或類脂物所占有的空間。2、 對(duì)

38、組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精，對(duì)組織有顯著的收縮作用，造成組織發(fā)硬易脆，難以切片等現(xiàn)象。因此，它不作為單純的固定液。3、 滲透力不強(qiáng)。當(dāng)用酒精固定組織時(shí)，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現(xiàn)象。4、 可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組織，核的染色都不好。5、 可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時(shí)，必須仔細(xì)地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強(qiáng)，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時(shí)，要較快地通過(guò)低濃度的酒

39、精，以免使已著染的顏色被脫去。6、 價(jià)格較貴。從經(jīng)濟(jì)學(xué)的角度，應(yīng)用酒精固定組織劃不來(lái)，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標(biāo)本需要100ml計(jì)，可固定50例標(biāo)本，而一瓶 500ml的酒精，即使配成80%酒精，也只能固定6例標(biāo)本，因此，若用酒精固定組織，其價(jià)格比用甲醛固定組織的要高8倍。（1） 冰醋酸。冰醋酸為無(wú)色透明的液體，易揮發(fā)，氣味大，一打開(kāi)瓶蓋，整個(gè)文章都可聞其味道，純醋酸在17時(shí)常為結(jié)晶狀，因稱為冰醋酸，在冬天使用時(shí)，可用微波爐進(jìn)行解凍，再行使用，它的優(yōu)點(diǎn)有：1、 能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對(duì)于染色質(zhì)的固定快，因此，

40、用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時(shí)，常常需加入一定量的醋酸，以促進(jìn)染色。2、 能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用，尤其是對(duì)富含纖維的組織。而它不但不會(huì)使組織收縮，而且還會(huì)令許多組織發(fā)生膨脹的作用。根據(jù)這個(gè)特點(diǎn)，用它配成許多種不同的混合固定液，以達(dá)到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：（1） Zenker氏固定液：6重鉻酸鉀 25G升汞 50G蒸餾水 1000ml冰醋酸 50ml先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸鉀，應(yīng)用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過(guò)濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中，如暴露于空氣中，該溶液將會(huì)被慢慢氧化

41、而便顏色加深，導(dǎo)致失效。臨用時(shí)，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。應(yīng)用該固定液固定的組織，一般不要超過(guò)24h，取出組織，流水沖冼12小時(shí)以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應(yīng)用該固定液的組織，細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時(shí)，應(yīng)用本液可獲得滿意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含鐵血黃素。（2） Flemming氏液2%酸水溶液 200ml1%鉻酸水溶液 700ml冰醋酸 100ml該液中的奧酸對(duì)脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對(duì)有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該

42、液不適合。應(yīng)用該液固定的組織，切片不能太大過(guò)厚，一般1-2毫米厚固定時(shí)間1-3天，后經(jīng)水洗，保存于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有許多不足之處：1、 不能作為單一的固定劑。冰醋酸在實(shí)際應(yīng)用中，常被作為添加劑來(lái)使用，如許多種固定液，都加入了冰醋酸。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。2、 不能凝固蛋白質(zhì)，不能保存白細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含血鐵黃素等。3、 價(jià)格較貴。(4) 重鉻酸鉀是一種固體，粉末狀，桔紅色，具有毒 性，較難溶解于涼水，因此在配制時(shí)用較高溫度的水來(lái)溶解，也較易發(fā)生沉淀。它的優(yōu)點(diǎn)是：1、 能固定脂肪及類脂物。2、 為髓鞘及嗜鉻細(xì)

43、胞優(yōu)良的媒染劑。3、 可配成多種的混合固定液（1） Helly氏液7重鉻酸鉀 25g升汞 50g蒸餾水 1000ml甲醛 50ml臨用時(shí)加入甲醛，因其加入后于24小時(shí)后可發(fā)生沉淀而失效，因用時(shí)應(yīng)特別注意。該液是白細(xì)胞顆粒的優(yōu)良固定劑，因此凡為白細(xì)胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，硫酸鈉在液中對(duì)組織無(wú)任何作用，故省去。（2） Orth氏液重鉻酸鉀 20g蒸餾水 1000ml甲醛 100ml該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時(shí)間需36-72小時(shí)，該液對(duì)于染色質(zhì)的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細(xì)

44、胞和含鐵血黃素。重鉻酸鉀的不足之處有：1、 不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。2、 具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應(yīng)特別注意。3、 它不能長(zhǎng)期固定組織，經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中。（六） 氯化汞又稱升汞，具有毒性。單獨(dú)用于固定組織，對(duì)組織有較大的收縮力，故很少單獨(dú)使用。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由于它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。它常與其它的試劑配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定組織的效果非常好。應(yīng)用升汞配成的固定液的

45、優(yōu)點(diǎn)有：1、 細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色清晰。2、 對(duì)白細(xì)胞顆粒，造血器官如骨髓和脾臟等是優(yōu)良的固定劑。3、 可配成許多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。它的不足之處是：1、 容易產(chǎn)生汞鹽沉淀。經(jīng)升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長(zhǎng)時(shí)間，經(jīng)24h后沖水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉淀，以免由于汞鹽沉淀在切片上而影響對(duì)切片的觀察。2、 對(duì)組織有較大的收縮力且穿透力弱，用它不能固定過(guò)厚的組織，因穿透力弱，組織中間部分固定不好。3、 具有毒性。（五）、微波輻射固定組織。89組織固定的結(jié)果是組織中的蛋白質(zhì)凝固，以保存組織中原有的

46、微細(xì)結(jié)構(gòu)。常規(guī)固定用的是甲醛或酒精等。但是這些固定劑從某些方面來(lái)說(shuō)其穿透力不很強(qiáng)，因而需要較長(zhǎng)時(shí)間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應(yīng)用快速加熱法預(yù)先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發(fā)，污染環(huán)境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點(diǎn)。微波輻射固定組織，就是在這種情況下產(chǎn)生的。微波是一種具有能量的電磁波，在其運(yùn)動(dòng)期間可產(chǎn)生瞬間熱。由于微波的快速運(yùn)動(dòng)，也導(dǎo)致了物體內(nèi)部極性分子的快速運(yùn)動(dòng)，產(chǎn)生了熱量，致使組織蛋白凝固，因此，舊的叫法稱微輻射固定組織。按實(shí)際的應(yīng)稱為微波輻射凝固蛋白。1、 組織固定溫度和時(shí)間的選擇。究竟微波產(chǎn)生的熱量需要多高，才級(jí)使蛋白凝固的呢：Masson氏

47、等人的研究表明，700-90，對(duì)沒(méi)有固定的蛋白可發(fā)生變性。Bernard經(jīng)過(guò)一系列的研究后認(rèn)為，肝、腎、肺的最佳固定溫度是70，和77，因?yàn)楦鞣N組織的結(jié)構(gòu)不同，成分不一，電子密度不一樣，因而固定所需要的溫度也不樣。我們的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，65左右的溫度可適合于各種組織，條件是固定取小塊材料，時(shí)間在截取3-4min。2、 微波爐檔次的選擇目前市售微波爐品種繁多，要選用合適的微波爐，必須根據(jù)各人的使用習(xí)慣和愛(ài)好。微波爐一般分為高火、中火及低火。使用時(shí)要進(jìn)行系列實(shí)驗(yàn)。例如多少ml的固定液需要多少時(shí)間達(dá)到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。3、 微波輻射需固定液的選擇張素娟等應(yīng)用臨床活檢新鮮組織如：甲狀腺、乳腺和

48、淋巴結(jié)，實(shí)驗(yàn)小鼠的腫瘤、肝臟、腎臟、心和肺等組織，分別用10%的福爾馬林和生理鹽水經(jīng)微波輻射后，通過(guò)HE、網(wǎng)染、AB-PAS以及幾種抗體如CEA、EMA和L26等的檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，生理鹽水的結(jié)果最好。一提固定，以往總與福爾馬林分不開(kāi)，而經(jīng)微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結(jié)果導(dǎo)致福爾馬林蒸發(fā)，使整個(gè)房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環(huán)境，也影響了身體的健康。雖然生理鹽水用微波輻射后對(duì)組織有良好的固定效果，但是它只能適合于少量的快速制片和某些研究，絕不可能適合于大批量的活檢。因?yàn)榛顧z取材，現(xiàn)目前組織的制作，都基本上用機(jī)器

49、來(lái)進(jìn)行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所制成，組織取材后，一個(gè)一個(gè)的盒子裝著組織，如果除去金屬來(lái)用微波固定，這是不現(xiàn)實(shí)的事情。另外，微波輻射，它的穿透力較弱，大量的組織塊，其中間是達(dá)不到要求的。第四節(jié) 病理制片程序一常規(guī)石蠟切片制片法組織經(jīng)系列酒精的脫水，經(jīng)透明劑的作用，經(jīng)熔化的石蠟的浸漬，包埋后所切成的切片稱為石蠟切片。它適合于尸體解剖，臨床活檢和某些科研的切片。（一） 組織脫水把含于組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)的水份用脫水劑把其置換出來(lái)的過(guò)程稱組織脫水。不管是正常的組織，還是有病變的組織，都含有不同程度量的水分。據(jù)測(cè)定，人體的物質(zhì)組成約含水5567%，蛋白質(zhì)1518%，脂類1015%，無(wú)機(jī)鹽34%

50、及糖類12%14。如果不把這些水分脫去，石蠟切片將無(wú)法進(jìn)行，因?yàn)槭灪退荒芑旌显谝黄穑猿ソM織中的水分成為制片中的關(guān)鍵，用什么物質(zhì)才能擔(dān)當(dāng)起這個(gè)重任呢，至今為止，國(guó)內(nèi)所用的都是酒精。因它不管在什么樣比例的情況下都能和水混合，所以它可以慢慢地將水從組織中置換出來(lái)。酒精脫水力強(qiáng)，對(duì)組織又有硬化和易脆的不良影響。在使用時(shí)，通常是從低濃度至高濃度，濃度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，組織經(jīng)過(guò)這一系列處理后，基本可達(dá)到脫水的目的。臨床上如使用含酒精的固定液固定組織時(shí)，(Carnoy氏、AAF液)組織不需要經(jīng)過(guò)低濃度的酒精，可直接進(jìn)入95%酒精脫水。組織脫水，目前常用的有兩種方法

51、1、 人工組織脫水法該法經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，靈活度高，可根據(jù)不同的組織及其大小來(lái)確定脫水時(shí)間，也可根據(jù)不同組織及大小分批進(jìn)行脫水，其優(yōu)點(diǎn)是：1、 可根據(jù)不同的組織及大小，任意增減脫水時(shí)間，達(dá)到脫水目的。2、 可隨時(shí)觀察組織的變化，隨時(shí)中斷組織的脫水，不使組織過(guò)度硬脆。3、 可以多層次地進(jìn)行脫水。缺點(diǎn)1、 需耗費(fèi)人力，每個(gè)步驟的遞增都需要人工完成。2、 不能大批量的進(jìn)行脫水。3、 必須在班上完成脫水或者定點(diǎn)于某一濃度的酒精中過(guò)夜，晚上無(wú)法進(jìn)行梯度遞增。（2）、自動(dòng)組織脫水機(jī)脫水法自動(dòng)組織脫水機(jī)的機(jī)型品種繁多，大小不一，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的軌道式和圓盤(pán)式兩種，國(guó)外生產(chǎn)的有圓盤(pán)式和柜式兩種，上述國(guó)內(nèi)外四種型號(hào)的機(jī)子，我

52、們都使用過(guò)，根據(jù)使用的效果做一簡(jiǎn)單介紹。1、 軌道式自動(dòng)組織脫水機(jī)。這種機(jī)子容量小，脫水用的試劑不足一升毫升，組織塊脫水用的提籃小，每次只能容納40塊組織左右，它適合于較小的單位，但不適合于大單位。另外，該機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，裝試劑的蓋子打開(kāi)，試劑容易揮發(fā)，污染環(huán)境，對(duì)人身體健康不利。2、 圓盤(pán)式自動(dòng)組織脫水機(jī)。國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的這種機(jī)器容量也不夠大，每天處理組織塊，40塊左右，如果大的病理科每天需要處理150塊左右組織塊時(shí)，需要這種機(jī)器4臺(tái)左右。這種機(jī)器脫水時(shí)也屬于揭蓋式的，因此，試劑容易揮發(fā)，特別在夏天，必須經(jīng)常添加試劑，以補(bǔ)充被揮發(fā)去的試劑。這種機(jī)器，對(duì)環(huán)境同上述機(jī)器一樣。國(guó)外生產(chǎn)的也有同類產(chǎn)品。3、

53、全密閉柜式電腦控制自動(dòng)組織脫水機(jī)。這種脫水機(jī)由電腦、反應(yīng)缸和試劑貯存缸三個(gè)部分組成，這三部分可以分開(kāi)使用，也可以結(jié)合在一起，形成一個(gè)柜式，一臺(tái)電腦可控制5臺(tái)脫水機(jī)。電腦功能包括時(shí)間、溫度和真空負(fù)壓等，可在小熒屏上顯示出來(lái)，同時(shí)可顯示正在進(jìn)行的脫水程序。根據(jù)需要，該機(jī)可編九套程序輸入電腦，我們的編程如下：第一套為正常室溫下脫水程序，該程序在換新試劑的幾天內(nèi)使用。第二套程序組織塊脫水不充分時(shí)啟動(dòng)使用，當(dāng)?shù)谌壮绦虻慕M織塊脫水不好時(shí)，則應(yīng)更換新液；第四套為周末程序，該套程序根據(jù)兩天的休假時(shí)間，安排好組織塊的脫水時(shí)間。第五套為“八一”程序，第六套為“十一”程序，第七套為元旦程序，第八套為春節(jié)程序，這后

54、面幾套為節(jié)假日程序，根據(jù)節(jié)假日的放假時(shí)間不同，編排不同的程序。反應(yīng)缸內(nèi)在15秒左右的時(shí)間里抽入反應(yīng)所需的試劑，當(dāng)按程序表的時(shí)間反應(yīng)完畢后，在15秒左右的時(shí)間，將其送回貯存缸，然后則另?yè)Q其它試劑，如此反復(fù)，直至整個(gè)程序完畢。試劑貯存箱內(nèi)由12個(gè)缸組成，每個(gè)缸的容量為2.25升。其中用于裝固定液的缸1個(gè)，裝酒精脫水劑的缸7個(gè)，裝透明劑的缸為2個(gè)，另有2個(gè)缸，一個(gè)裝二甲苯，當(dāng)石蠟在反應(yīng)缸中完成或浸蠟后，被送回蠟缸（在反應(yīng)缸的右邊）后，用以清除遺存的石蠟，還有一個(gè)缸裝無(wú)水酒精，用以清除遺存的石蠟，還有一個(gè)缸裝有無(wú)水酒精，用以清除二甲苯的殘存液。根據(jù)我們對(duì)各種不同的脫水機(jī)的應(yīng)用比較，認(rèn)為這種脫水機(jī)有以下

55、特點(diǎn)：1、 該機(jī)容量大，每次可處理組織塊250-300塊，這對(duì)于大、中等醫(yī)院的病理科較合適。2、 全部密閉，所有的試劑都由管道輸送。這樣一是保證了試劑不揮發(fā)，尤其是夏天，室溫較高，試劑揮發(fā)快，如為揭蓋式的脫水機(jī)，試劑揮發(fā)的程度無(wú)法形容，幾乎每天都必須添加，這樣試劑用量大，二是對(duì)環(huán)境污染不明顯，保證了舒適的工作環(huán)境。3、 帶有定期的攪動(dòng)裝置，如此可使組織固定均勻，脫水徹底。4、 整個(gè)過(guò)程過(guò)置于真空負(fù)壓的條件下來(lái)進(jìn)行，尤其是浸蠟，可節(jié)省1/3以上的時(shí)間，浸蠟充分徹底，尤其是對(duì)多孔的組織如肺組織，效果更明顯。脫水機(jī)脫水的優(yōu)點(diǎn)有：1、 組織脫水均勻；2、 能在無(wú)人在的情況下完成組織的梯度遞增，完成脫水

56、，透明和浸蠟程序，如此可節(jié)省人力物力。3、 能大批量地處理標(biāo)本。脫水機(jī)脫水存在的不足：1、 由于機(jī)子的的原因，在脫水時(shí)，大小組織一窩煮，造成小組織過(guò)度處理而產(chǎn)生硬脆的現(xiàn)象，使之難以切成佳片。2、 如為揭蓋式的脫水機(jī)，液體容易揮發(fā)，污染環(huán)境，影響工作條件。（二）組織的透明組織經(jīng)過(guò)一系列酒精的處理后，雖然組織里所含有的水分已基本上被脫去，但是組織脫水時(shí)機(jī)里可殘留著許多酒精，如果不將其去除掉，必然影響組織的進(jìn)一步處理，酒精不能溶解石蠟，必須尋找一種既能與酒精混合，又能溶解石蠟的試劑，方能使石蠟浸入到組織中去，這類物質(zhì)被稱為透明劑。它們是二甲苯、苯、三氯甲烷（氯仿）、香柏油、苯酚、松節(jié)油和汽油等。雖然

57、透明劑種類多，但根據(jù)性能及效果看，還是二甲苯為最好。二甲苯是一種透明無(wú)色的液體，揮發(fā)性強(qiáng)，打開(kāi)后即可聞其味道，能溶解石蠟，能溶于酒精及丙酮等，但不能溶于水，它是一種良好的透明劑，組織經(jīng)充分脫水后放入該試劑，視組織的大小、種類的不同，確定不同的時(shí)間，便能達(dá)到透明目的。在一般的情況下，胃、腸粘膜透明時(shí)間5-10分鐘，鼻咽部及排出物為15-20分鐘左右，子宮肌瘤、平滑肌組織為60-120 分鐘?？傊M織的透明，應(yīng)視組織的大小而定，不能千篇一律，要經(jīng)常觀察組織的透明情況，組織一經(jīng)透明，就必須從二甲苯中取出。因?yàn)槎妆綄?duì)組織的硬化程度特強(qiáng)，如果在其放置過(guò)長(zhǎng)，就會(huì)引起組織的硬脆，難切片。如果組織在二甲苯放置到一定時(shí)間后