醫(yī)學(xué)免疫學(xué)課件：第22章 免疫學(xué)檢測原理及臨床應(yīng)用

1、1醫(yī)學(xué)免疫學(xué)第二十二章 免疫學(xué)檢測原理及臨床應(yīng)用2抗原抗體檢測免疫細(xì)胞檢測免疫分子檢測3第一節(jié) 基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測方法 用已知抗原檢測未知抗體，診斷或輔助診斷疾病用已知抗體檢測未知抗原，鑒定病原體或輔助診斷疾病定性或定量檢測體內(nèi)各種大分子物質(zhì)，診斷或輔助診斷相關(guān)疾病用已知抗體檢測某些半抗原物質(zhì)，監(jiān)測血清中藥物濃度或運(yùn)動(dòng)員違禁藥品水平4一、抗原抗體結(jié)合 反應(yīng)的特點(diǎn)特異性和交叉反應(yīng) 帶現(xiàn)象與可見性 可逆性 二、抗原-抗體反應(yīng)的影響因素電解質(zhì)，酸堿度，溫度抗原和抗體的性質(zhì)、濃度、比例是決定因素 三、抗原抗體反應(yīng)的基本檢測方法5（一）凝集反應(yīng)(agglutination)6（二）沉淀反應(yīng)(pre

2、cipitation) 單擴(kuò)的原理雙擴(kuò)的原理單擴(kuò)實(shí)驗(yàn)7雙擴(kuò)實(shí)驗(yàn)8免疫電泳9（三）補(bǔ)體參與的反應(yīng)溶血空斑試驗(yàn)（見后）補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn) 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)10 （四）免疫標(biāo)記技術(shù)1. 免疫熒光技術(shù)112. 酶免疫測定(enzyme immunoassay, EIA)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 直接法12ELISA雙抗體夾心法和間接法13ELISPOT14biotin avidin system(BAS)ELISA153. 免疫組化技術(shù)(immunohistochemistry techenique) 4. 放射免疫測定法(radi

3、oimmunoassay，RIA) 5. 膠體金標(biāo)記技術(shù)6. 化學(xué)發(fā)光免疫分析7. 免疫印跡法 (immunoblot) 1617第二節(jié) 免疫細(xì)胞檢測（一）外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分離一、免疫細(xì)胞及其亞群計(jì)數(shù)（二）淋巴細(xì)胞亞群的分離1. 尼龍棉分離法 2. E花環(huán)分離法 183.洗淘法194. 流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)205.磁分離技術(shù)21（三）淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)1. 免疫熒光技術(shù)2. 補(bǔ)體依賴微量細(xì)胞毒試驗(yàn)3. 流式細(xì)胞術(shù)4. 花環(huán)試驗(yàn) 22用FITC-抗IgM單抗計(jì)數(shù)B細(xì)胞2324二、淋巴細(xì)胞功能測定（一）淋巴細(xì)胞功能測定的體外試驗(yàn) 1. 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)刺激

4、物 * 非特異性：絲裂原PHA、Con A、LPS，抗CD3單抗，同種MHC等 * 特異性：破傷風(fēng)類毒素、PPD、白色念珠菌、腫瘤細(xì)胞等方法：核素?fù)饺敕?、MTT法和形態(tài)學(xué)計(jì)數(shù)法淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）252. 細(xì)胞毒試驗(yàn)CTL、NK細(xì)胞可直接殺傷靶細(xì)胞51Cr釋放法LDH釋放法26細(xì)胞凋亡檢測DNA Ladder電泳圖譜27TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞28FCM檢測凋亡細(xì)胞293. 分泌功能測定細(xì)胞因子分泌細(xì)胞： ELISPOT 抗體形成 細(xì)胞測定： 溶血空斑 試驗(yàn)（一）測定淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗(yàn) 遲發(fā)型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)特異性: OT皮試、過敏原皮試非特異性: PHA 皮試、DNCB

5、皮試32第三節(jié) 免疫分子檢測一、免疫球蛋白/抗體的測定免疫比濁、ELISA、RIA、免疫電泳等二、補(bǔ)體測定免疫比濁、ELISA、RIA、CH50 三、細(xì)胞因子檢測1. 免疫學(xué)測定法分泌性細(xì)胞因子檢測：ELISA、RIA、WB胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測：FCM、ELISPOT2. 生物活性測定法 促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性測定法、直接殺傷法、趨化活性測定法3. 分子生物學(xué)測定法PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、RNA印跡法、核酸酶保護(hù)分析法和原位雜交法等33四、CD分子、表面受體和黏附分子檢測細(xì)胞表面分子：間接免疫熒光法、FCM等可溶性分子：ELISA等五、HLA分型方法：血清學(xué)方法、細(xì)胞學(xué)方法、基因分型

6、應(yīng)用：同種移植供受者配型、法醫(yī)鑒定、某些疾病研究等 34第四節(jié) 免疫學(xué)診斷與檢測35一、疾病相關(guān)因子檢測（一）用已知抗體檢測未知抗原病原體及其抗原組分：屬、型、血清型腫瘤抗原的定性、分型、定量與定位：AFP、CEA、體內(nèi)示蹤紅細(xì)胞血型抗原（二）用已知抗原檢測未知抗體病原特異性抗體：檢測HIV抗體確定HIV感染 外斐氏試驗(yàn)檢測立克次體抗體 肥達(dá)氏反應(yīng)測傷寒桿菌抗體變應(yīng)原抗體：體外用不同的變應(yīng)原與患者血清反應(yīng)確定變應(yīng)原；體內(nèi)用多種變應(yīng)原進(jìn)行皮試自身抗體：組織切片，免疫熒光、免疫酶組化細(xì)胞毒抗體：待移植患者血清與供體細(xì)胞混合并加入補(bǔ)體（補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn)，交叉組織配型）36（一）體液免疫功能免疫球蛋

7、白：免疫缺陷病、免疫增殖性疾病抗體水平：檢測某些針對(duì)疫苗或感染因子的抗體B細(xì)胞數(shù)量與功能：原發(fā)或繼發(fā)免疫缺陷（二）細(xì)胞免疫功能T細(xì)胞總數(shù)與亞群：CD3、4、8、25，Th1、Th2T細(xì)胞功能：增殖反應(yīng)（非特異、特異）、細(xì)胞毒、皮試（三）細(xì)胞因子及其受體和粘附分子水平（四）非特異免疫功能 補(bǔ)體、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及其產(chǎn)物、中性粒細(xì)胞等37二、免疫功能檢測感染性疾病轉(zhuǎn)歸和預(yù)后：乙肝、AIDS等腫瘤發(fā)展、預(yù)后與療效判斷移植排斥反應(yīng)的預(yù)測、藥物選擇、療效評(píng)估38三、免疫學(xué)監(jiān)測39抗原與抗體特異性結(jié)合，抗體又能與抗Ig特異性結(jié)合，這一關(guān)系被用于多種檢測方法?？乖贵w反應(yīng)分為凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)，免疫標(biāo)記技術(shù)具有靈敏度高，能定性、定量等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用廣泛。免疫細(xì)胞具表面標(biāo)志，利用抗體可鑒別不同細(xì)胞群及其數(shù)量；體外功能試驗(yàn)反映某一細(xì)胞群的功能，體內(nèi)功能試驗(yàn)則反映整體免疫功能水平。免疫分子的檢測可采用免疫學(xué)方法、生物活性測定法及分子生物學(xué)方法。 了解上述基本原理后，可舉一反三，根據(jù)需要選擇或設(shè)計(jì)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)，用于基礎(chǔ)和臨床研究。 小 結(jié)40思考題名詞解釋：indirect agglutinastion， ELISA， BAS，ELISPOT，double immunodiffusion， immunoblot（Western blot）， FC