DB3502T 083-2022 鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程

1、ICS65.020.20CCSB 053502 廈 門 市 標(biāo) 準(zhǔn) 化 指 導(dǎo) 性 技 術(shù) 文 件DB3502/T 0832022鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程Technical specifications for seedling propagation of Dendrobium officinale2022-06-13 發(fā)布2022-06-13 實(shí)施發(fā) 布 DB3502/T 0832022 PAGE 8 目錄 HYPERLINK l _bookmark0 前言2 HYPERLINK l _bookmark1 1 范圍3 HYPERLINK l _bookmark2 規(guī)范性引用文件3 HYPE

2、RLINK l _bookmark3 術(shù)語(yǔ)和定義3 HYPERLINK l _bookmark4 種苗繁育工廠4 HYPERLINK l _bookmark5 種子獲得5 HYPERLINK l _bookmark6 實(shí)生苗培育技術(shù)5 HYPERLINK l _bookmark7 種苗質(zhì)量要求及檢驗(yàn)方法6 HYPERLINK l _bookmark8 標(biāo)簽、包裝和運(yùn)輸7 HYPERLINK l _bookmark9 檔案和檢疫檢驗(yàn)7 HYPERLINK l _bookmark10 附錄 HYPERLINK l _bookmark10 A HYPERLINK l _bookmark11 （資料性

3、） HYPERLINK l _bookmark12 鐵皮石斛實(shí)生苗培養(yǎng)基配方8 前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。 請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由廈門市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。 本文件起草單位：廈門塔斯曼生物工程有限公司、廈門市標(biāo)準(zhǔn)化研究院、廈門市食品藥品審評(píng)認(rèn)證與不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心。 本文件主要起草人：盧紹基、沈群紅、林文亮、余良、孫金全、陳劍成。本文件為首次發(fā)布。 鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了鐵皮石斛種苗的術(shù)語(yǔ)和定義、種苗繁育工廠、種子的獲得、種苗培育技術(shù)、優(yōu)質(zhì)種苗

4、的質(zhì)量要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、檔案、檢疫檢驗(yàn)等要求。 本文件適用于鐵皮石斛種苗工廠化生產(chǎn)。 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB 3095 環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) GB 5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)GB 15569 農(nóng)業(yè)植物調(diào)運(yùn)檢疫規(guī)程 GB/T 10111 隨機(jī)數(shù)的產(chǎn)生及其在產(chǎn)品質(zhì)量抽樣檢驗(yàn)中的應(yīng)用程序 中國(guó)植物志（第 19 卷）2004 年版 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。 3.1鐵皮石斛 Dend

5、robium officinale鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），又名黑節(jié)草、鐵皮石斛楓斗（加工干品通稱）， 為蘭科石斛屬多年生草本植物。 3.2實(shí)生苗 seedling鐵皮石斛種子經(jīng)過(guò)無(wú)菌播種，萌發(fā)生長(zhǎng)得到的種苗。 3.3原球莖 protocorm由鐵皮石斛種子誘導(dǎo)產(chǎn)生，具出葉長(zhǎng)根潛能的球狀器官。 3.4培養(yǎng)基 culture medium由大量元素、微量元素、有機(jī)物、激素等配制而成，能夠滿足鐵皮石斛種子能發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。煉苗 hardened seedling采用自然散射光、人工控制溫度、蔭蔽等措施對(duì)達(dá)到出瓶規(guī)格的瓶裝苗進(jìn)行適應(yīng)

6、性鍛煉，以增加抵抗能力的過(guò)程。 3.5馴化苗 domesticated seedling瓶苗出瓶后移栽到溫室苗床種植，過(guò)渡生長(zhǎng)36個(gè)月后存活下來(lái)的苗。 種苗繁育工廠場(chǎng)地環(huán)境鐵皮石斛種苗工廠包括組培車間、溫室和辦公區(qū)，周圍100 m內(nèi)不允許有垃圾堆放或其他污染源， 且四周通風(fēng)良好，所使用的水源應(yīng)達(dá)到GB 5749或以上標(biāo)準(zhǔn)要求。大氣環(huán)境質(zhì)量應(yīng)達(dá)到GB 3095中二級(jí)或以上標(biāo)準(zhǔn)要求。 組培車間主要功能室配制室：作為培養(yǎng)基配制的場(chǎng)所，要求衛(wèi)生保持清潔干凈。 滅菌室：作為培養(yǎng)基、接種工具、無(wú)菌材料的高溫滅菌處理場(chǎng)所，要求干凈整潔，并建有水池和臺(tái)板，以便于操作。 儲(chǔ)藏室：作為培養(yǎng)基儲(chǔ)藏場(chǎng)所，要求衛(wèi)生保持

7、清潔干凈，溫度 2023，濕度40%，具備防塵、防潮和避光。 接種室：作為培養(yǎng)材料的消毒和接種、培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)移的場(chǎng)所，要求密閉、清潔、整齊， 裝有紫外燈，能隨時(shí)滅菌。 培養(yǎng)室：作為種子實(shí)生培養(yǎng)的場(chǎng)所，要求衛(wèi)生保持清潔干凈，溫濕度均勻一致，內(nèi)置多層培養(yǎng)架，能根據(jù)瓶苗生長(zhǎng)、培養(yǎng)目的進(jìn)行培養(yǎng)溫度和光照強(qiáng)度的調(diào)控。 實(shí)驗(yàn)室：作為瓶苗分析檢測(cè)的場(chǎng)所，要求衛(wèi)生保持清潔干凈。 溫室作為瓶苗適應(yīng)性鍛煉的場(chǎng)所，要求衛(wèi)生保持清潔干凈，通風(fēng)透氣，能根據(jù)瓶苗生長(zhǎng)進(jìn)行光照、溫度及濕度的調(diào)控。 需要配備的儀器設(shè)備及化學(xué)試劑儀器設(shè)備：植物組培所需的儀器設(shè)備，如高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、培養(yǎng)架、灌裝機(jī)、洗瓶機(jī)、冰箱、電子天平

8、、電子秤等?；瘜W(xué)試劑：生產(chǎn)瓶苗所需化學(xué)試劑，如無(wú)機(jī)鹽類和有機(jī)物類、植物激素等；消毒試劑，如次氯酸鈉、酒精等。 種子獲得種源選用：用于生產(chǎn)種子的種源應(yīng)符合中國(guó)植物志第 19 卷收載的蘭科植物鐵皮石斛的植物特征。經(jīng)分類鑒定確認(rèn)，推薦選用高產(chǎn)、抗性強(qiáng)并適合本地氣候的品種或品系。 親本選擇：應(yīng)選擇形態(tài)特征典型，長(zhǎng)勢(shì)均勻，生長(zhǎng)健壯的 3 年生以上植株。 人工授粉：在 5 月份盛花期進(jìn)行人工授粉，掛牌標(biāo)簽，標(biāo)明授粉時(shí)間、方法、編號(hào)。 種子采收：授粉 46 個(gè)月以后，蒴果開始轉(zhuǎn)黃未開裂時(shí)，選擇飽滿的蒴果，帶果柄一起采收。 種子保存：采收的蒴果用吸水紙包裹后保存在 4冰箱中，備用。 實(shí)生苗培育技術(shù)培養(yǎng)容器清洗

9、生產(chǎn)所用的培養(yǎng)容器，應(yīng)先進(jìn)行清洗干凈后，放置瀝干。 培養(yǎng)基配制和滅菌培養(yǎng)基配制：以 MS 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，適配鐵皮石斛培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，添加純水?dāng)嚢璩浞秩芙猓?調(diào)整 pH 至 6.0 左右。 培養(yǎng)基裝瓶：用灌裝機(jī)分裝到培養(yǎng)瓶，瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基高度為 1cm 左右。 培養(yǎng)基滅菌：將分裝密封好的培養(yǎng)瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)，滅菌壓力 0.24 MPa，時(shí)間 20 min。 培養(yǎng)基儲(chǔ)藏：將滅菌好的培養(yǎng)基放置儲(chǔ)藏室備用。儲(chǔ)藏時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月。 無(wú)菌播種在接種室超凈工作臺(tái)，將采收已后熟 7 d 的蒴果置于無(wú)菌的接種皿中；采用 70%75%酒精對(duì)蒴果表面擦拭 35s 或 10%次氯酸鈉浸泡 5 min 后，將蒴果

10、切開，用鑷子夾住果柄端在培養(yǎng)瓶瓶口邊輕輕抖動(dòng)，邊轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，使粉末狀種子均勻撒播到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（配方推薦附錄 A 誘導(dǎo)培養(yǎng)基），每個(gè)蒴果接種 58 瓶。瓶苗培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)瓶放置于培養(yǎng)室，溫度為 2428，光照強(qiáng)度為 16003500lx，每天光照時(shí)間 812h，培養(yǎng)形成原球莖。分化培養(yǎng)：在原球莖生長(zhǎng)膨大至 35mm，轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基（配方推薦見附錄 A 分化培養(yǎng)基） 進(jìn)行出芽長(zhǎng)葉，溫度為 2325，光照強(qiáng)度為 16002000lx，每天光照時(shí)間 812h。分瓶培養(yǎng)：瓶?jī)?nèi)苗過(guò)于密集需進(jìn)行分瓶（配方推薦見附錄 A 分化培養(yǎng)基），每瓶數(shù)量 80100株。培養(yǎng)室溫度 2426，光照強(qiáng)度

11、2000lx2600lx，每天光照時(shí)間 10h12h。生根培養(yǎng)：分化苗長(zhǎng)到 2.04.0cm 左右，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（配方推薦見附錄 A 生根培養(yǎng)基）， 每瓶數(shù)量 2040 株。培養(yǎng)室條件，溫度為 2527、光照強(qiáng)度為 2200lx2800lx，每天光照時(shí)間 10h 12h，待瓶苗長(zhǎng)到 58 cm、根 25 條時(shí)，即達(dá)到出瓶規(guī)格。瓶苗出瓶和移栽煉苗：將培養(yǎng)瓶移至溫室，使其在開放變化的環(huán)境中逐漸適應(yīng)自然環(huán)境 14d21d，待瓶苗葉色濃綠時(shí)即可出瓶種植。 適溫：出瓶前先將瓶蓋打開，讓瓶苗暴露在空氣中放置 2d3d，使其適應(yīng)自然溫濕度。 洗苗：將瓶苗小心取出，用清水將根部基質(zhì)洗凈，晾干至根部發(fā)白。栽培

12、前要用 0.1%代森錳鋅或生根粉溶液（生根粉按說(shuō)明書配制）浸泡根部 2min。 移栽：將苗栽到培養(yǎng)基質(zhì)上，栽培容器應(yīng)采用透氣性、透水性好的容器；栽培基質(zhì)應(yīng)采用既能吸水又能排水，既能透氣又有養(yǎng)分的材料。環(huán)境要求蔭蔽、相對(duì)濕度 70%80%，溫度 2025。應(yīng)避免在高溫或嚴(yán)寒條件下移栽。 馴化：經(jīng)過(guò) 36 個(gè)月馴化，苗生長(zhǎng)健壯，可進(jìn)行第二次移栽。種苗質(zhì)量要求及檢驗(yàn)方法通用要求用于栽培的瓶苗應(yīng)該為非污染、無(wú)爛莖、爛根、黃葉；葉片4片以上，正常展開,葉色嫩綠或翠綠； 合格苗應(yīng)該在總苗量的80%以上；馴化苗的合格苗應(yīng)該在總苗量的100%。 瓶苗分級(jí)應(yīng)符合表 1 規(guī)定。表 1 鐵皮石斛瓶苗分級(jí)表單位：（株

13、）分級(jí)/項(xiàng)目 根（條） 葉片（片） 株高（cm） 莖粗（cm） 合格苗 2條3條 4 2.5 0.2 優(yōu)質(zhì)苗 3條5條 6 5.0 0.3 馴化苗分級(jí)應(yīng)符合表 2 規(guī)定。表 2 鐵皮石斛馴化苗分級(jí)表單位：（株）分級(jí)/項(xiàng)目 根（條） 葉片（片） 株高（cm） 莖粗（cm） 合格苗 4條6條 5 3.0 0.25 優(yōu)質(zhì)苗 6 6 6.0 0.35 檢驗(yàn)方法根、葉片：在自然光線下，采用目測(cè)、計(jì)數(shù)方法進(jìn)行；種苗無(wú)爛根，葉片無(wú)畸形。 株高、莖粗：長(zhǎng)度用分度值 1mm 的直尺測(cè)量，直徑用游標(biāo)卡尺測(cè)量。檢驗(yàn)規(guī)則交收檢驗(yàn)每批瓶苗交貨前，生產(chǎn)單位都要進(jìn)行交收檢驗(yàn)。交收檢驗(yàn)內(nèi)容包括苗的質(zhì)量、數(shù)量、標(biāo)志和包裝， 檢

14、驗(yàn)合格并附合格證后方可出貨。 組批規(guī)則 同一生產(chǎn)單位、同一品種、同一包裝日期的種苗作為一個(gè)檢驗(yàn)批次。 抽樣執(zhí)行GB/T 10111。 判定規(guī)則若檢驗(yàn)結(jié)果符合本標(biāo)準(zhǔn)6.2的指標(biāo)要求，則判該批種苗為合格苗或優(yōu)質(zhì)苗。若檢驗(yàn)結(jié)果不符合要求的，允許對(duì)不合格項(xiàng)目重新取樣復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)仍有一項(xiàng)不合格的，則判該批產(chǎn)品為不合格。 標(biāo)簽、包裝和運(yùn)輸標(biāo)簽每批苗應(yīng)掛有標(biāo)簽，標(biāo)明品種、生產(chǎn)單位、苗齡、苗類型、等級(jí)、數(shù)量、出苗日期、批號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、檢驗(yàn)證書號(hào)等。 包裝和運(yùn)輸瓶苗包裝：用保鮮膜將瓶口包扎防止在運(yùn)輸種受到污染，用開孔紙箱進(jìn)行裝載，放置層數(shù)不宜過(guò)多，一般 34 層，層與層之間用泡沫或是軟質(zhì)材料隔開防止運(yùn)輸過(guò)程中摩擦瓶

15、口膜破裂。 出瓶苗包裝：瓶苗在經(jīng)過(guò)洗苗后，自然晾干表面水分，單層直立放置在塑料筐或紙箱中，包裝箱應(yīng)該結(jié)實(shí)牢固并設(shè)有透氣孔，裝箱后貼上標(biāo)簽。 馴化苗包裝：馴化苗出圃前應(yīng)做好病蟲預(yù)防控制，并適當(dāng)控水，基質(zhì)含水量 30%50%，包裝采用透氣紙箱或泡沫箱，要求輕拿輕放，整齊碼放在箱內(nèi)，不能用力擠壓，防止折斷莖稈或折傷新葉。裝運(yùn)的車廂應(yīng)配有空調(diào)，溫度調(diào)節(jié)至 2025，到目的地后應(yīng)立即進(jìn)行種植或假植。 檔案和檢疫檢驗(yàn)檔案 應(yīng)建立檔案管理記錄，記錄包括種子來(lái)源、投入物品、生產(chǎn)記錄、銷售記錄等，檔案保存周期2年以上。 檢疫檢驗(yàn)按GB 15569規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，跨縣級(jí)行政區(qū)域調(diào)運(yùn)鐵皮石斛苗應(yīng)按有關(guān)規(guī)定辦理出運(yùn)手續(xù)

16、，并應(yīng)附有植物檢疫證書。 附錄A（資料性）鐵皮石斛實(shí)生培養(yǎng)基配方A.1 鐵皮石斛實(shí)生苗培養(yǎng)基配方類別配方誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖 20gL-1 +瓊脂粉 4.5gL-1+馬鈴薯 20gL-1MS+6-BA1.0mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1 +瓊脂粉 6.5gL-1+馬鈴薯 50gL-1+香蕉 25gL-1MS+6-BA1.0mgL-1+NAA 0.1mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1 +瓊脂粉 6.5gL-1+馬鈴薯 50gL-1+香蕉 25gL-1分化培養(yǎng)基MS+6-BA0.1mgL-1+NAA 0.05mgL-1+蔗糖 25gL-1 +瓊脂粉 4.2gL-1+馬鈴薯 80gL-1MS+6-BA0.1mgL-1、NAA 0.2mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1 +瓊脂粉 6.5gL-1+馬鈴薯 50gL-1+香蕉 25gL-1MS+6-BA1.5mgL-1、NAA 0.1mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-