實驗大分子物質(zhì)水解和糖發(fā)酵試驗 (2)

1、實驗八大分子物質(zhì)的水解和糖發(fā)酵試驗主 講:徐爾尼1一、目的與要求 證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系。 掌握微生物大分子水解試驗的原理和方法。 了解糖發(fā)酵的原理及在腸道細菌鑒定中的重要作用。 掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。 學(xué)習(xí)微生物接菌技術(shù)。2二、基本原理1、淀粉水解試驗 微生物不能直接利用淀粉，必須靠自身產(chǎn)生的胞外淀粉酶將大分子淀粉分解成糊精、雙糖和單糖才能進入細胞內(nèi)，細菌是否能產(chǎn)生淀粉酶可通過觀察細菌菌落周圍的淀粉物質(zhì)是否被水解來證實，淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍色，被細菌水解淀粉的區(qū)域，用碘則呈褐色。3二、基本原理2、明膠水解試驗 微生物不能直接

2、利用明膠這蛋白質(zhì)，必須靠自身產(chǎn)生的胞外明膠酶將大分子蛋白質(zhì)水解成蛋白胨或氨基酸才能進入細胞內(nèi)，細菌能否產(chǎn)生明膠酶可通過明膠穿刺培養(yǎng)來證實，在微生物的明膠酶作用下，明膠失去凝固性，呈液化狀態(tài)。4二、基本原理3、糖發(fā)酵試驗 糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細菌的鑒定中尤為重要。大腸菌群能在370C培養(yǎng)下，利用乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。當產(chǎn)酸時，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變?yōu)辄S色（pH5.2）。當產(chǎn)氣時，可通過倒置小倒管內(nèi)的氣泡來判斷。5圖 糖類發(fā)酵試驗 6三、實驗器材1、菌種：枯草芽孢桿菌、普通變形桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌2、培養(yǎng)基： 淀粉培養(yǎng)基 2培養(yǎng)血/每組(5人） 明膠半

3、固體培養(yǎng)基 4支試管/每組(5人） 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液 3支試管/每組(5人） 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液 3支試管/每組(5人）2、試劑：碘液3、儀器或其他用具：培養(yǎng)箱、水浴鍋、接種環(huán)、接種針、酒精燈、無菌培養(yǎng)血等。7四、操作步驟1、淀粉水解試驗溶化三角瓶內(nèi)的淀粉培養(yǎng)基 趁熱倒入二塊無菌培養(yǎng)皿各內(nèi)約15ml 冷凝后點植法接入普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌 貼好標簽 平板倒置，370C培養(yǎng)24小時 滴加碘液鑒別有無淀粉水解圈2、明膠水解試驗取四支明膠試管培養(yǎng)基 用接種針分別穿刺接入普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌，另一支不接菌為空白對照管貼好標簽 200C培養(yǎng)35d （或370C培養(yǎng)2

4、d ，取出置冰浴冷卻）觀察明膠液化情況8四、操作步驟3、乳糖發(fā)酵試驗取三支乳糖蛋白胨培養(yǎng)基 分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌， 另一支不接菌為空白對照管 貼好標簽 370C培養(yǎng)24小時 觀察產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況4、葡萄糖發(fā)酵試驗取三支葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基 分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌，另一支不接菌為空白對照管 貼好標簽 370C培養(yǎng)24小時 觀察產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況操作要點： 注意無菌操作，勿染雜菌。 接好菌的平板一定要倒置放入培養(yǎng)箱中。9無菌操作技術(shù)10五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果1、大分子物質(zhì)水解試驗 將結(jié)果填入下表。“+”表示陽性，“-”表示陰性112、糖發(fā)酵試驗 將結(jié)果填入下表?！?”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，“+”表示產(chǎn)酸，“-”表示陰性12六、思考與討