沙門(mén)氏菌檢測(cè)文件

1、 HYPERLINK / FDA沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中文版（一）U.S. Department of Health and Human Services U.S. Food & Drug AdministrationCenter for Food Safety & Applied NutritionBacteriological Analytical Manual April 2003 沙 門(mén) 氏 菌 檢 測(cè)FDA分析手冊(cè)(2003年3月)第5章章節(jié)內(nèi)容1、 簡(jiǎn)介2、 設(shè)備和材料3、 培養(yǎng)基和試劑4、 樣品的制備5、 沙門(mén)氏菌的分離培養(yǎng)6、 沙門(mén)氏菌的鑒定7、 快速檢測(cè)方法(附錄1)8、 參考文獻(xiàn)

2、簡(jiǎn)介在第8版的BAM手冊(cè)中，沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方法有了幾個(gè)改變。第一個(gè)改變是RV培養(yǎng)基的廣泛使用，即可用于檢測(cè)含沙門(mén)氏菌量高的食品，又可于檢測(cè)含沙門(mén)氏菌量低的食品，往常的版本中，RV培養(yǎng)基僅用于蝦類(lèi)的檢測(cè)。依據(jù)AOAC反復(fù)研究的結(jié)果，RV培養(yǎng)基即可用于檢測(cè)含沙門(mén)氏菌量高的食品，又可于檢測(cè)含沙門(mén)氏菌量低的食品。除口香糖外的所有食品，RV培養(yǎng)基替代了SC培養(yǎng)基。此外，RV培養(yǎng)基取代了必須含有活性干酵母的LST肉湯培養(yǎng)基。TTB肉湯接著用于第二種選擇性增菌培養(yǎng)基，包括口香糖在內(nèi)的食品，在檢測(cè)含菌量高的食品時(shí)需進(jìn)行43培養(yǎng)；在檢測(cè)含菌量低的食品時(shí)需進(jìn)行35培養(yǎng)。第二個(gè)改變是關(guān)于冷藏食品前增菌和低水份食品選

3、擇性增菌培養(yǎng)的時(shí)刻為72小時(shí)以內(nèi)，如此，樣品檢測(cè)的時(shí)刻最遲星期三或星期四能夠開(kāi)始，周末也不用加班。第三個(gè)改變是縮短了在LIA斜面上的培養(yǎng)時(shí)刻，在往常的版本(BAM-7)中，TSI和LIA斜面在35培養(yǎng)的時(shí)刻分不為242h和482h。未公布的一些資料表明，48小時(shí)后觀看LIA斜面結(jié)果是沒(méi)有任何診斷價(jià)值。對(duì)193個(gè)LIA斜面進(jìn)行試驗(yàn)，培養(yǎng)242h后，所有的斜面都給出了正確的結(jié)果。再培養(yǎng)24h后，試驗(yàn)的結(jié)果沒(méi)有什么重大的改變。因此，TSI和LIA斜面培養(yǎng)基現(xiàn)在改為培養(yǎng)242h。第四個(gè)改變是蛋殼表面滅菌步驟的改變。在往常的版本(BAM-7)中，蛋殼表面滅菌的方法是在0.1%的HgCl2溶液中浸泡1h，

4、然后在70%的乙醇溶液中浸泡30分鐘。HgCl2對(duì)人體是有害的，依據(jù)環(huán)境愛(ài)護(hù)組織的要求進(jìn)行處理，費(fèi)用是特不昂貴的。在新版的手冊(cè)（BAM-7）中，蛋殼表面的消毒只需通過(guò)浸泡在含0.1%SDS的次氯酸鈉溶液(含Cl-200PPM)中30分鐘。第五個(gè)改變是蛋類(lèi)樣品的制備。在檢測(cè)前，蛋的內(nèi)容物(蛋黃和蛋白)需進(jìn)行完全混勻。之后，取25ml加入含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯中。本版中，制定了口香糖的檢測(cè)方法?？谙闾菢悠泛驮鼍鉁?：9的比例進(jìn)行混合，得到的混合物特不粘，不易被吸管吸出。另外添加纖維素酶時(shí)，容易被吸管吸出。由于最近桔子汁相關(guān)事件的發(fā)生，其檢驗(yàn)方法也己制定出，被檢的桔子汁包括經(jīng)巴氏消毒和未經(jīng)巴氏

5、消毒的。從選擇性平板上挑菌落講明更明白和科學(xué)。假如在選擇性平板上沒(méi)有可疑的典型菌落，建議挑取幾個(gè)非典型菌落接種到TSI和LIA培養(yǎng)基上。由于在過(guò)去的幾年里，F(xiàn)DA的科學(xué)家們從一些食品中，特不是從海產(chǎn)品中分離出沙門(mén)氏菌，其中4%左右在選擇性平板是非典型菌落。最后，自成BAM-7發(fā)行以來(lái)，差不多制定出6種培養(yǎng)基的使用講明。包括3種選擇性培養(yǎng)基（BS瓊脂、HE瓊脂和XLD瓊脂）和3種比較新的培養(yǎng)基(EF-18、XLT、Rambach 瓊脂)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，用一種或幾種新的培養(yǎng)基來(lái)取代BAM中推舉的培養(yǎng)基是不理想的。因些，我們一直保留下來(lái)。A、設(shè)備和材料1、 攪拌器和無(wú)菌攪拌杯2、 無(wú)菌500M

6、L廣口螺口三角瓶、無(wú)菌500ML長(zhǎng)頸三角瓶、無(wú)菌250ML燒杯、無(wú)菌玻璃漏斗、無(wú)菌采樣器3、 無(wú)菌玻璃涂布捧或塑料涂布捧4、 電子天平，精度0.1g，最大量稱(chēng)2000g5、 電子天平，精度5mg，最大量稱(chēng)120g6、 培養(yǎng)箱：3527、 冰箱：428、 水浴箱：4919、 循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：430.210、循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：420.211、無(wú)菌藥匙或其它合適的工具：用于稱(chēng)樣品12、無(wú)菌培養(yǎng)皿：15X100MM，玻璃或一次性的13、1ml無(wú)菌吸管,刻度0.01ml、5ml和10ml無(wú)菌吸管,刻度0.1ml14、接種針和接種環(huán)15、無(wú)菌試驗(yàn)試管或培養(yǎng)試管：16X150MM和20X1

7、50MM血清學(xué)鑒定管：10X75MM或13X100MM16、試管架17、旋轉(zhuǎn)混合器18、無(wú)菌剪刀、大剪刀、解剖刀及鑷子19、燈：用于觀看生化反應(yīng)20、電爐21、PH試紙：PH值6-8，最大變色范圍在0.4PH單位22、PH計(jì)23、28X37CM的無(wú)菌塑料袋，易拉口(在第23-24節(jié)中，檢測(cè)蛙腿和兔體時(shí)用)24、塑料燒杯：能耐高溫高壓，用于振蕩培養(yǎng)過(guò)程中，固定塑料袋B、培養(yǎng)基和試劑1、 乳糖肉湯(M74)2、 脫脂奶粉(M111)3、 SC肉湯(M134)4、 TTB肉湯(M145)5、 RV培養(yǎng)基(M132)6、 XLD瓊脂(M179)7、 HE瓊脂(M61)8、 BS瓊脂(M19)9、 TS

8、I瓊脂(M149)10、色氨酸肉湯(M164) 11、胰酪胨大豆肉湯(M154)12、含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯(M186)13、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(M76)14、胰酪胨示胨大豆肉湯(M160)15、MR-VP肉湯(M104)16、西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基M13817、尿素肉湯(M171)18、尿素肉湯(快速)(M172)19、丙二酸鈉培養(yǎng)基(M92)20、LIA培養(yǎng)基(M89)21、賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯(M87)22、動(dòng)力培養(yǎng)基(M103)23、KCN培養(yǎng)基(M126)24、苯酚紅糖類(lèi)發(fā)酵肉湯(M121)25、紫色糖類(lèi)發(fā)酵肉湯(M130)26、麥康凱瓊脂(M91)27、營(yíng)養(yǎng)肉湯(M114)28、

9、BHI肉湯(M24)29、5%木瓜蛋白酶溶液(M56a)30、1%纖維素酶溶液(M187)31、月示胨羊血瓊脂基礎(chǔ)(M166)32、通用前增菌肉湯(UPM,M188)33、無(wú)水亞硫酸鉀粉末34、200ppm次氯酸鈉溶液，含0.1%SDS(R12a)35、70%乙醇溶液(R23)36、靛基質(zhì)試劑(R38)37、V-P試劑(R89)38、肌酸晶體39、40%KOH溶液(R65)40、1N NaOH溶液(R73)41、1N HCl溶液(R36)42、1%煌綠溶液(R8)43、溴甲酚紫溶液,0.2%(R9)44、甲基紅指示劑(R44)45、無(wú)菌蒸餾水46、Tergitol-7(R78)47、Trito

10、n X-100(R86)48、0.85%生理鹽水(R63)49、適當(dāng)濃度的生理鹽水(R27)50、沙門(mén)氏菌多價(jià)O血清51、沙門(mén)氏菌多價(jià)H血清52、沙門(mén)氏菌多價(jià)O群血清：A、B、C1、C2、C3、D1、D2、E1、E2、E3、E4、F、G、H、I、Vi和其它相應(yīng)血清53、沙門(mén)氏菌Spicer-Edwards H血清C、樣品制備以下的方法均以25g樣品作為抽檢單位，樣品與肉湯培養(yǎng)液的比例為1:9。依照樣品的組成成份不同，添加足夠的肉湯培養(yǎng)基保持1:9的比例，除非專(zhuān)門(mén)講明，例如，蛙腿等不需準(zhǔn)確稱(chēng)量檢測(cè)的樣品，需采納專(zhuān)門(mén)的方法。1、干蛋黃、干蛋白、干全蛋、液體牛奶(脫脂牛奶、含2%脂肪牛奶、全牛奶和脫

11、脂奶粉)，粉狀調(diào)制食品(蛋糕、甜餅、炸面圈、餅干和面包)、嬰兒食品、口食或軟管進(jìn)食的含蛋食品。檢驗(yàn)前的冷凍食品最好不要解凍。假如冷凍樣品必須軟化來(lái)獲得待檢部分，盡可能縮短解凍的時(shí)刻，使竟?fàn)幘荷L(zhǎng)最少，并減小對(duì)沙門(mén)氏菌的損傷。解凍需在45以下進(jìn)行，置于能自動(dòng)控溫的水浴鍋內(nèi)，不斷攪拌15分鐘或在2-5解凍18小時(shí)。無(wú)菌稱(chēng)取25克樣品，放入無(wú)菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ML)或其它合適的容器內(nèi)。關(guān)于非粉末狀的樣品，加入225ml無(wú)菌的乳糖肉湯；關(guān)于粉末狀的樣品，先加入約15ml無(wú)菌的乳糖肉湯，用無(wú)菌的玻璃捧、藥匙或舌狀器具攪拌，使其均勻懸浮，再加入3份無(wú)菌乳糖肉湯，分不為10ml、10ml和190

12、ml,使總量為225ml。充分?jǐn)嚢?，直到樣品完全懸浮，沒(méi)有塊狀物。小心地蓋緊瓶蓋，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈，置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。2、蛋類(lèi)a、 含殼蛋。用硬刷子洗蛋并使其干燥，然后浸泡于含0.1%SDS的200ppm 氯離子溶液中30分鐘。此溶液的配制如下：取8ml 5.25%的次氯酸鈉溶液和1gSDS加入992ml蒸餾水中溶解即可。這種消毒液需在使用前配制。無(wú)菌打開(kāi)蛋殼置于無(wú)菌的容器內(nèi)，用無(wú)菌的藥匙或其它工具混合蛋清和蛋黃。無(wú)菌稱(chēng)取25g于無(wú)

13、菌的三角瓶中或其它合適的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB肉湯(1L TSB中加入35mg硫酸鐵)，混勻，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。b、液全蛋（均勻狀）。無(wú)菌稱(chēng)取25g于無(wú)菌的三角瓶或其他適宜的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB充分搖勻，按上面的方法接著。c、 煮硬的蛋（雞蛋、鴨蛋或其他種類(lèi)的蛋）。假如蛋殼完整，向上述方法進(jìn)行消毒，無(wú)菌分離蛋殼，弄碎蛋黃和蛋白，稱(chēng)取25g與無(wú)菌的500ml的錐形瓶中或其他的容器內(nèi)，加入225mlTSB，

14、同時(shí)搖勻，按上述方法接著。3、脫脂干奶粉a、 速溶型。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于無(wú)菌的燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的煌綠水的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使樣液覆蓋在煌綠水的表面，也可多個(gè)25g檢測(cè)單位混合倒入含有相應(yīng)比例煌綠水的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在煌綠水的表面，按每1000ml滅菌蒸餾水中加入2ml2%的煌綠溶液進(jìn)行配制，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。b、 非速溶。按上述速溶脫脂干奶粉的檢測(cè)方法進(jìn)行，但不同意將多個(gè)25g樣品檢測(cè)單位混合。

15、4、全脂奶粉。按上述速溶脫脂干奶粉的檢測(cè)方法進(jìn)行，但不同意將多個(gè)25g樣品檢測(cè)單位混合。5、酪蛋白a、 乳酪。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于無(wú)菌的250ml燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的一般肉湯的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使其覆蓋在一般肉湯的表面，也可多個(gè)25g檢測(cè)單位混合倒入含有相應(yīng)比例一般肉湯的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在一般肉湯的表面，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。b、 凝乳酪。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于無(wú)菌的250ml燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅

16、菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的乳糖肉湯的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使其覆蓋在乳糖肉湯的表面，也可多個(gè)25g檢測(cè)單位混合倒入含有相應(yīng)比例乳糖肉湯的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在乳糖肉湯的表面，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。c、 咸乳酪。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于無(wú)菌的帶螺旋帽的廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)，添加225ml無(wú)菌的乳糖肉湯同時(shí)混勻，多個(gè)25g樣品檢測(cè)單位能夠混合，旋緊瓶塞，室溫下靜置605min，然后搖勻，用PH試紙檢測(cè)PH，假如必要調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松

17、開(kāi)約1/4圈，置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)接D,1-11進(jìn)行。6、豆粉。按上述凝乳酪和咸乳酪的方法進(jìn)行檢測(cè)，但多個(gè)25g樣品不能混合。7、含蛋制品(面條、蛋卷、空心粉、意大利面條)、干酪、面團(tuán)、調(diào)制色拉(火腿、蛋、雞肉、金槍魚(yú)、火雞)、新奇的、冷凍的或干的水果和蔬菜、果仁和甲殼類(lèi)動(dòng)物(小蝦、蟹、小龍蝦、大蝦、大龍蝦)和魚(yú)。檢測(cè)前最好不要解凍，如檢測(cè)樣品必須解凍，需在45以下進(jìn)行，置于能自動(dòng)控溫的水浴鍋內(nèi)，不斷攪拌15分鐘或在2-5解凍18小時(shí)。無(wú)菌稱(chēng)取25克樣品，放入無(wú)菌的均質(zhì)器內(nèi)。加入225ml無(wú)菌的乳糖肉湯均質(zhì)2分鐘。再無(wú)菌轉(zhuǎn)移均質(zhì)混合物于無(wú)菌的廣口的帶有旋螺帽的錐型瓶或其它合適的容器中

18、，蓋緊瓶蓋，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。8、干酵母(活性和無(wú)活性酵母)無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的胰酪胨大豆肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。9、冷凍和高級(jí)混合食品無(wú)

19、菌稱(chēng)取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。10、調(diào)料a、 黑胡椒、白胡椒、芹菜種子或芹菜葉片、干辣椒粉、紅辣椒、茴香、皺葉歐芹片、迷迭香、芝麻、百里香和蔬菜片。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的TSB肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60m

20、in。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。b、 洋蔥片、洋蔥粉和大蒜片。無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品于滅菌的帶螺旋帽的廣口瓶或其它合適的容器內(nèi)，樣品的前增菌培養(yǎng)基用含K2SO4的TSB肉湯(1000mlTSB肉湯中加入5g K2SO4，最終濃度為0.5%)，將K2SO4加入TSB肉湯中，分裝每瓶225ml，121高壓滅菌15min，滅菌后，無(wú)菌測(cè)定其容量。假如必須，調(diào)整容量至225ml，將225ml含有K2SO4的TSB加入樣品中混勻，以下按C-10a進(jìn)行。c、 多香果

21、粉、肉桂、丁香及薄荷調(diào)味料目前還沒(méi)有方法能夠中和這4種調(diào)料的毒性。將它們稀釋至無(wú)毒的程度后，再進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)多香果粉、肉桂和薄荷時(shí)，樣品與肉湯的比例為1:100，而丁香與肉湯的比例為1:1000；檢驗(yàn)葉狀調(diào)味品時(shí)，由因此脫水產(chǎn)品，可汲取部分肉湯，在實(shí)際檢測(cè)中樣品與肉湯的比例大于1:10，檢測(cè)這些調(diào)味品時(shí)，按以上C-10a進(jìn)行，保持推舉的樣品與肉湯的比例。11、密餞和糖衣(包括巧克力)無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品于滅菌的攪拌器內(nèi)，加入225ml重溶的脫脂奶粉，攪拌2分鐘，再無(wú)菌操作移取樣品液到滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，室溫下靜置605min。搖勻，用PH試紙測(cè)P

22、H值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。加入0.45ml1%亮綠水溶液，混勻，把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。12、椰子無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，室溫下靜置605min。搖勻的攪拌器內(nèi)，加入225ml乳糖肉湯，攪拌2分鐘，再無(wú)菌操作移取樣品液到，用PH試紙測(cè)PH值，假如需糾正PH值，用無(wú)菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。加入2.25ml已蒸過(guò)的Tergitol-7溶液，混勻。也可用已蒸過(guò)的Triton-100。這些表面活性劑要使用最

23、少的量，剛好產(chǎn)生氣泡。Triton-100滴上2-3小滴即可。把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。13、食品染料和食品色素PH值6.0或以上的染料(10%的水懸浮液)，按上述干全蛋方法(以上C-1法)進(jìn)行檢測(cè)。沉淀染料或PH值低于6.0的染料，無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅菌的帶螺旋帽的500ml廣口瓶?jī)?nèi)，加入225ml不含煌綠的TTB肉湯混勻，蓋緊瓶塞，室溫下靜止605min。用PH計(jì)調(diào)整PH值至6.80.2，加入2.25ml 1%的煌綠溶液，搖勻，把瓶蓋松開(kāi)約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗(yàn)按D,3-11進(jìn)行。14、明膠無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品，放入滅

24、菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌的乳糖肉湯和5mL5%明膠酶水溶液?；旌暇鶆?，蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)，置35培養(yǎng)242小時(shí)。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。15、肉、肉代用品、肉副產(chǎn)品、動(dòng)物產(chǎn)品、腺體制品和粗粉（魚(yú)，肉，骨）無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品放入滅菌的攪拌器中。加入225mL滅菌的乳糖肉湯，攪拌2分鐘。再無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移已攪拌的混合物到滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。假如混合物為粉狀，研磨過(guò)或已粉碎的，則不用攪拌。不需要攪拌

25、的樣品，加入乳糖肉湯，并充分混勻；蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。旋動(dòng)使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.80.2?？傆?jì)加入2.25mL已蒸過(guò)（15分鐘）的Tergitol-7，混勻。也可用已蒸過(guò)（15分鐘）的Triton-100來(lái)代替。操縱使用這些表面活性劑劑量，剛剛起泡沫即可。實(shí)際用量取決于試驗(yàn)材料的成分；分析粉狀腺體制品，不需要用表面活性劑。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)后，將樣品混合物置35培養(yǎng)242小時(shí)。以下試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。16、田雞腿（此方法用于國(guó)內(nèi)的和國(guó)外的所有田雞腿檢驗(yàn)）將15對(duì)田雞腿放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒(méi)，其比例樣品比乳糖肉湯為1:9(見(jiàn)以上A，23

26、-24)。假如單個(gè)腿可能平均重在25g或以上，則只需檢查15對(duì)的每對(duì)中的一條腿。把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機(jī)械蕩器上震蕩15min，以4cm（1-1/2in）機(jī)械振蕩100次/分鐘。從袋中傾倒出乳糖肉湯于另一個(gè)滅菌塑料袋內(nèi)。加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫下靜置60分鐘。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。再把裝有乳糖肉湯的塑料袋放入塑料燒杯或其它合適的容器內(nèi)，于35培養(yǎng)242小時(shí)。接下去按下面的D，1-11進(jìn)行。17、野兔骨架（此方法用于國(guó)內(nèi)的和國(guó)外的所有的野兔骨架）取3只野兔骨架放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒(méi)，其比例：樣品比乳糖肉湯為1:9(見(jiàn)上

27、述A，23-24)，把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機(jī)械震蕩器上以4cm（1-1/2in）幅度振蕩100次/分鐘，震蕩15min。從袋中傾倒出乳糖肉湯混合物于另一個(gè)滅菌塑料袋內(nèi)，加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫靜置60分鐘。必要時(shí)用pH試紙調(diào)置6.80.2，于35培養(yǎng)242小時(shí)。接下去按下面D，1-11進(jìn)行。18、口香糖無(wú)菌操作稱(chēng)取25g樣品到滅菌燒杯（250mL）或其他合適容器中。制備過(guò)濾除菌的1.0%纖維素酶溶液（加1g纖維素酶到99mL無(wú)菌水中），用0.45um膜過(guò)濾除菌，置于150mL瓶中。（纖維素酶溶液在2-5可保存最長(zhǎng)2周時(shí)刻）。加入225mL無(wú)菌

28、乳糖肉湯和2.25mL無(wú)菌1%纖維素酶溶液于500mL無(wú)菌帶螺旋蓋的廣口瓶或其他合適容器。用磁力攪拌器劇烈攪拌酶/肉湯混合物時(shí)，通過(guò)無(wú)菌玻璃漏斗迅速倒入25g待檢樣品。旋好瓶蓋，室溫下靜置60分鐘，無(wú)須調(diào)pH值。旋松瓶蓋，35培養(yǎng)242小時(shí)。以下按D，1-11進(jìn)行。19、桔子汁、蘋(píng)果汁(經(jīng)巴氏消毒或未經(jīng)巴氏消毒)和果酒(經(jīng)巴氏消毒)無(wú)菌稱(chēng)取25ml樣品加入到含有225mlUPB肉湯中，放入滅菌的帶螺旋帽的500ml廣口瓶?jī)?nèi)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，充分搖勻，室溫下靜止605min。不用調(diào)PH值，旋松瓶蓋，35培養(yǎng)242小時(shí)。以下按D，1-11進(jìn)行(按低含量微生物進(jìn)行處理)。20、豬耳和狗顎

29、類(lèi)從每個(gè)樣品中挑出一片(尺寸小的可挑2-3片)置于無(wú)菌的塑料袋中，將塑料袋置于大燒杯中或其它合適的容器內(nèi)，按1:9的比例(g/L) (見(jiàn)以上A，23-24)加入無(wú)菌的乳糖肉湯，浸沒(méi)樣品。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。旋動(dòng)使充分混勻，用試紙測(cè)定pH值。必要時(shí)調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。加入0-1%已蒸過(guò)（15分鐘）的Tergitol-7或已蒸過(guò)（15分鐘）的Triton-100來(lái)代替。操縱使用這些表面活性劑劑量，剛剛起泡沫即可。例如，225ml乳糖肉湯加入最大體積為2.25ml。將樣品混合物置35培養(yǎng)242小時(shí)。接下來(lái)的試驗(yàn)按D,1-11進(jìn)行。D、沙門(mén)氏菌的分離培養(yǎng)1、 擰緊瓶蓋并輕輕振蕩培養(yǎng)過(guò)的

30、樣品混合物?？谙闾牵何?ml樣品液到10ml的SC肉湯中，另取1ml樣品液到10ml TTB肉湯中，混勻。所有其它食品：吸取0.1ml樣品液到10ml的RV培養(yǎng)基中，另取0.1ml樣品液到10mlTTB肉湯中，混勻。2、 選擇性增菌按如下步驟進(jìn)行：含菌量高的食品：RV培養(yǎng)基在420.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時(shí)。TTB肉湯在430.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時(shí)。含菌量低的食品(口香糖除外)：RV培養(yǎng)基在420.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時(shí)。TTB肉湯在352（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時(shí)?？谙闾牵篠C和TTB肉湯在35培養(yǎng)242小時(shí)

31、。3、 混合均勻（假如是試管，渦旋式混合），用3mm直徑的接種環(huán)，滿環(huán)（10l）劃線接種TTB肉湯于亞硫酸鉍（BS）瓊脂，XLD瓊脂和HE瓊脂平板上。BS瓊脂平板于劃線接種的前一天制備好儲(chǔ)存在室溫暗處。4、 再用3mm直徑的接種環(huán)，從RV培養(yǎng)基（樣品為含菌量高的食品和菌量高的食品）和SC肉湯（樣品為口香糖）取滿環(huán)（10l），劃線接種于上述平板上。5、 參考官方檢測(cè)方法994.04，關(guān)于冷藏食品的前增菌和低水份食品的選擇性增菌(僅SC和TTB肉湯)方法。如此樣品的檢測(cè)最遲可從星期四開(kāi)始，周末不用加班工作。6、 把選擇性平板置35培養(yǎng)242小時(shí)。7、 檢查平板中可疑沙門(mén)氏菌菌落的存在。FDA沙門(mén)氏

32、菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中文版（二）典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài)：從每個(gè)通過(guò)242小時(shí)培養(yǎng)后選擇性平板上挑取2個(gè)或更多個(gè)菌落。典型的沙門(mén)氏菌菌落如下：a、 在HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂上。菌落呈蘭綠至蘭色，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的光澤黑色中心或幾乎全部黑色的菌落。b、 在木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上. 粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可有大的光澤黑色中心或呈幾乎全部黑色的菌落。c、 亞硫酸鉍（BS）瓊脂上。呈褐色，灰色或黑色，有時(shí)帶有金屬光澤。菌落周?chē)呐囵B(yǎng)基通常開(kāi)始呈褐色，但伴隨培養(yǎng)時(shí)刻的延長(zhǎng)而變?yōu)楹谏?，并有所謂的暈環(huán)效應(yīng)。假如典型菌落出現(xiàn)在經(jīng)242小時(shí)培養(yǎng)后

33、的BS瓊脂上，則挑取2個(gè)或更多個(gè)典型菌落。不論BS瓊脂平板在培養(yǎng)242小時(shí)時(shí)是否挑取過(guò)菌落，BS平板再培養(yǎng)242小時(shí)。培養(yǎng)了482小時(shí)后，假如BS平板上出現(xiàn)典型菌，則挑取2個(gè)或更多個(gè)菌落，假如只在通過(guò)242小時(shí)培養(yǎng)的BS平板上挑取了菌落，接種到三糖鐵瓊脂（TSI）和賴(lài)氨酸瓊脂（LIA）上，會(huì)呈現(xiàn)非典型反應(yīng)以至視為培養(yǎng)物中不存在沙門(mén)氏菌 。參見(jiàn)下面D.8部分和D.9部分，有關(guān)TSI和LIA反應(yīng)的詳細(xì)描述。非典型的沙門(mén)氏菌菌落形態(tài):不存在典型的或可疑的沙門(mén)氏菌菌落時(shí)，按如下步驟檢驗(yàn)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。a. HE和XLD瓊脂. 非典型的沙門(mén)氏菌在HE和XLD瓊脂上呈黃色菌落，帶或不帶黑色中心。HE

34、和XLD平板經(jīng)242小時(shí)培養(yǎng)后，沒(méi)有典型的沙門(mén)氏菌菌落，則挑取2個(gè)或更多個(gè)非典型的沙門(mén)氏菌菌落。b. BS瓊脂.某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落，其周?chē)囵B(yǎng)基略微或不呈暗色。假如BS平板培養(yǎng)242小時(shí)后，沒(méi)有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板接著培養(yǎng)242小時(shí)。假如經(jīng)482小時(shí)培養(yǎng)后，仍沒(méi)有典型或可疑的菌落出現(xiàn)，則挑取2個(gè)或更多個(gè)非典型的菌落。參考的對(duì)比培養(yǎng)物除了陽(yáng)性對(duì)比外（典型沙門(mén)氏菌），3個(gè)附加的沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物也可用來(lái)輔助非典型沙門(mén)氏菌在選擇性平板上的獲得，這些對(duì)比是乳糖陽(yáng)性，H2S陽(yáng)性的沙門(mén)氏菌（ATCC12325）和乳糖陰性，H2S陰性的沙門(mén)氏菌（ATCC9842），或者乳糖陽(yáng)性，H2S

35、陰性的沙門(mén)氏菌（ATCC29934），這些菌種可從ATCC購(gòu)買(mǎi)到。8、 用滅菌接種針輕輕地接觸每個(gè)菌落中心部位，接種TSI斜面，先在斜面上劃線，再于底層穿刺。不需灼燒接種針，即可接種LIA斜面，先穿刺接種底層兩次，再劃線斜面上。由于賴(lài)氨酸脫羧反應(yīng)需嚴(yán)格厭氧條件，因而LIA斜面必須有深的底層（4cm）。將已挑過(guò)菌落的選擇性平板于5-8儲(chǔ)存。9、 將TSI和LIA瓊脂斜面于35分不培養(yǎng)242小時(shí)。當(dāng)進(jìn)行斜面培養(yǎng)時(shí)放松試管帽以保持需氧條件，以防止過(guò)量的H2S產(chǎn)生。在TSI瓊脂中，典型的沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物使斜面呈堿性（紅色），底層呈酸性（黃色），產(chǎn)生或不產(chǎn)生H2S（瓊脂變黑色）。在LIA瓊脂中，典型的沙門(mén)

36、氏菌培養(yǎng)物其試管底層呈堿性（紫色）反應(yīng)。只有試管底層呈明顯黃色時(shí)才認(rèn)為有酸性（陰性）反應(yīng)。不要單純依照其試管底層產(chǎn)生的褪色反應(yīng)就排除它。在LIA中，大多數(shù)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物皆產(chǎn)生H2S；一些非沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物產(chǎn)生磚紅色反應(yīng)。10、 在LIA瓊脂上所有底層呈堿性反應(yīng)的培養(yǎng)物，不管其在TSI瓊脂上反應(yīng)如何，皆應(yīng)全部保留為可疑的沙門(mén)氏菌分離物，并進(jìn)一步做生化和血清學(xué)試驗(yàn)。在LIA中呈酸性底層反應(yīng)和在TSI中呈斜面堿性，底層酸性的培養(yǎng)物，均視為可疑的沙門(mén)氏菌分離物，應(yīng)進(jìn)一步做生化和血清學(xué)試驗(yàn)。在LIA中呈酸性底層和在TSI中呈酸性斜面和酸性底層的培養(yǎng)物，可視為非沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物而棄去。對(duì)所保留的擬定陽(yáng)性TIS

37、瓊脂培養(yǎng)物，可按下面四，11節(jié)敘述的進(jìn)行檢測(cè)，是否為沙門(mén)氏菌，包括亞利桑那沙門(mén)氏菌。假如TSI中培養(yǎng)物沒(méi)有呈現(xiàn)沙門(mén)氏菌的典型反應(yīng)（斜面堿性，底層酸性），再?gòu)奈磾M定陽(yáng)性的選擇性平板上另外挑取可疑菌落，象上面四，8節(jié)所述的接種TSI和LIA斜面。11、 生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)：a. 從RV培養(yǎng)基（或口香糖中亞硒酸鹽胱氨酸肉湯）劃線分離的選擇性瓊脂平板上所挑取的3個(gè)擬定陽(yáng)性TSI瓊脂培養(yǎng)物和從四硫磺酸鹽肉湯劃線分離的選擇性平板所挑取的3個(gè)擬定陽(yáng)性TSI瓊脂培養(yǎng)物，進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)。b. 如從一組選擇性瓊脂平板未分離出3個(gè)擬定陽(yáng)性的TSI瓊脂培養(yǎng)物，則對(duì)其它已分離到的擬定陽(yáng)性的TSI瓊脂培養(yǎng)物進(jìn)

38、行生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)。對(duì)所分析的每個(gè)25g樣品，至少應(yīng)檢查6個(gè)TSI培養(yǎng)物。E、沙門(mén)氏菌的鑒定：1、 混雜培養(yǎng)物. 對(duì)呈混雜菌的TSI瓊脂培養(yǎng)物，皆應(yīng)劃線接種于麥康凱（MC）瓊脂，HE瓊脂，或木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上，于35培養(yǎng)242小時(shí)。檢查平板上可疑沙門(mén)氏菌存在與否。a. 在麥康凱（MC）瓊脂上：典型菌落呈透明、無(wú)色，有時(shí)帶有暗色中心。沙門(mén)氏菌菌落有時(shí)可使培養(yǎng)基中其它細(xì)菌所造成的膽鹽沉淀區(qū)透明。b. 在HE瓊脂上：見(jiàn)上述四，7ac. 在木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上：見(jiàn)上述四，7b. 按上面的四，7節(jié)所述轉(zhuǎn)種至少2個(gè)可疑沙門(mén)氏菌菌落到TSI瓊脂和LIA瓊脂斜面上，接下去

39、按上述的四，9節(jié)進(jìn)行鑒定.2、 純培養(yǎng)物：a、 尿素酶試驗(yàn)（常規(guī)）。由每個(gè)擬定陽(yáng)性TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物，用滅菌針?lè)植唤臃N生長(zhǎng)物到每個(gè)尿素肉湯試管中。間或也會(huì)有未接種的尿素肉湯管變紫紅色（試驗(yàn)陽(yáng)性），因而應(yīng)包括未接種該肉湯管作為對(duì)比，于35培養(yǎng)242小時(shí)。b、 可選的尿素酶試驗(yàn)（快速法）。用3mm直徑接種環(huán)，自每一擬定陽(yáng)性的TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物中取2環(huán)轉(zhuǎn)種到快速尿素肉湯管中，370.5水浴中培養(yǎng)2小時(shí)。棄去所有呈陽(yáng)性結(jié)果的培養(yǎng)物，保留所有陰性反應(yīng)的（培養(yǎng)基不變色）培養(yǎng)物，為進(jìn)一步研究試驗(yàn)用。3、 血清學(xué)多價(jià)鞭毛（H）試驗(yàn)：a、 現(xiàn)在或以后進(jìn)行多價(jià)鞭毛（H）試驗(yàn)，可按下面五，4節(jié)所述進(jìn)行。從每個(gè)尿

40、素酶陰性的TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物接種到以下任一項(xiàng)， 1）腦心浸液肉湯，于35培養(yǎng)46小時(shí)，直到可見(jiàn)的生長(zhǎng)物出現(xiàn)（供當(dāng)日試驗(yàn)用），或2）胰胳胨大豆肉湯，于35培養(yǎng)242小時(shí)（供次日試驗(yàn)用）。在各5mL肉湯培養(yǎng)物中加2.5mL甲醛生理鹽水溶液。b、 選兩個(gè)以甲醛處理的肉湯培養(yǎng)物同沙門(mén)氏菌多價(jià)鞭毛（H）抗血清試驗(yàn)。在1075mm或13100mm血清學(xué)試管內(nèi)，加入0.5mL經(jīng)合適稀釋的沙門(mén)氏菌多價(jià)鞭毛（H）抗血清，再加入0.5mL待測(cè)抗原進(jìn)行試驗(yàn)。并以0.5mL甲醛生理鹽水溶液同0.5mL甲醛處理的抗原混合好，制成鹽水對(duì)比，將各混合物于48-50水浴培養(yǎng)，每隔15分鐘觀看一次初步結(jié)果，并于1小時(shí)讀數(shù)最終

41、結(jié)果。陽(yáng)性反應(yīng)：在甲醛肉湯培養(yǎng)物與血清混合物中凝集，而在甲醛肉湯培養(yǎng)物與甲醛鹽水管中（對(duì)比管）不凝集。陰性反應(yīng)：在甲醛肉湯培養(yǎng)物與血清混合物中（試驗(yàn)混合物）不凝集，在對(duì)比管中也不凝集。非特異反應(yīng)：在試驗(yàn)混合物與對(duì)比管中皆出現(xiàn)凝集。對(duì)出現(xiàn)這類(lèi)結(jié)果的培養(yǎng)物，需用“SpicerEdwards”氏抗血清做進(jìn)一步試驗(yàn)。4、 Spicer-Edwards血清試驗(yàn)用那個(gè)實(shí)驗(yàn)可代替多價(jià)H血清試驗(yàn)，也可用來(lái)關(guān)于多價(jià)H血清反應(yīng)不明顯的培養(yǎng)物的進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。如E、3b所述，進(jìn)行Spicer-Edwards抗原實(shí)驗(yàn)，當(dāng)結(jié)果是H血清陽(yáng)性時(shí)，需按E、5a-c進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)；假如兩個(gè)通過(guò)甲醛處理的培養(yǎng)物是陰性的，按E、3a得

42、到的四個(gè)額外的培養(yǎng)物進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，假如可能，獲得兩個(gè)陽(yáng)性培養(yǎng)物，按E、3a進(jìn)行附加的生化實(shí)驗(yàn)，假如所有的來(lái)自于樣品的尿素酶陰性反應(yīng)的TSI培養(yǎng)物的H血清實(shí)驗(yàn)是陰性的，按E、5a-c進(jìn)行附加的生化實(shí)驗(yàn)。5、 尿素酶陰性培養(yǎng)物試驗(yàn). a、 賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯。假如所做的LIA試驗(yàn)是中意的，則不需重復(fù)試驗(yàn)。假如培養(yǎng)物呈現(xiàn)可疑的LIA反應(yīng)，則以賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯進(jìn)行賴(lài)氨酸脫羧酶的最終鑒定。將少量可疑沙門(mén)氏菌陽(yáng)性TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物接種至賴(lài)氨酸脫羧酶肉湯管。將試管帽旋緊，置于35培養(yǎng)482小時(shí)，至少每隔24小時(shí)檢查一次。沙門(mén)氏菌因堿性反應(yīng)，則使整個(gè)培養(yǎng)基呈紫色。陰性反應(yīng)則使整個(gè)培養(yǎng)基呈黃色。假如培養(yǎng)基出現(xiàn)

43、褪色現(xiàn)象（即不呈紫色也不呈黃色），可加入幾滴0.2%溴甲酚紫溶液，然后再觀看試管的反應(yīng)。b、 酚紅衛(wèi)茅醇肉湯或含有0.5%衛(wèi)茅醇的紫色肉湯基礎(chǔ)液。由TSI瓊脂上取少量培養(yǎng)物接種至肉湯管中。將試管帽放松。置于35培養(yǎng)482小時(shí)，但24h后觀看反應(yīng)。大多數(shù)沙門(mén)氏菌呈陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表現(xiàn)為內(nèi)部發(fā)酵管中產(chǎn)氣和培養(yǎng)基變酸（黃色）。產(chǎn)酸為陽(yáng)性反應(yīng)。陰性反應(yīng)為倒管內(nèi)無(wú)氣體產(chǎn)生。整個(gè)培養(yǎng)基呈紅色（有酚紅指示劑）或紫色（有溴甲酚紫指示劑）。c、 胰蛋白胨（或色氨酸）肉湯。將少量TSI瓊脂培養(yǎng)物接種到肉湯管中，置35培養(yǎng)242小時(shí)，并按以下進(jìn)行試驗(yàn)。1) 氰化鉀（KCN）肉湯。從24h色氨酸培養(yǎng)物移取3mm接種環(huán)一

44、環(huán)轉(zhuǎn)種到KCN肉湯管中。將管口加熱，以便加塞時(shí)蠟封良好。35培養(yǎng)482小時(shí)，但24h后觀看反應(yīng)。有生長(zhǎng)者（有渾濁）為陽(yáng)性。大多數(shù)沙門(mén)氏菌在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，即無(wú)渾濁現(xiàn)象。2) 丙二酸鹽肉湯。用3mm接種環(huán)移取24h色氨酸肉湯培養(yǎng)物，轉(zhuǎn)種到丙二酸鹽肉湯管中。因間或會(huì)出現(xiàn)未接種的丙二酸鹽肉湯在存放期間變蘭（陽(yáng)性反應(yīng)），因此應(yīng)有未接種的丙二酸鹽肉湯管作對(duì)比。35培養(yǎng)482小時(shí)，但在培養(yǎng)24h后觀看反應(yīng)。大多數(shù)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物在此肉湯中為陰性反應(yīng)（綠色或不變色）。3) 吲哚試驗(yàn)。轉(zhuǎn)種5mL24h色氨酸肉湯培養(yǎng)物到空試管中，加入0.2-0.3mLKovacs氏試劑，大多數(shù)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物為陰性反應(yīng)（在肉湯

45、表面無(wú)深紅色）。并記錄呈桔色和粉色變化的中間型為反應(yīng)。4) 沙門(mén)氏菌血清學(xué)鞭毛（H）試驗(yàn)。假如未做多價(jià)鞭毛（H）試驗(yàn)或Spicer-Edwards氏鞭毛（H）試驗(yàn)，可任選其一。5) 吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性和血清學(xué)鞭毛（H）試驗(yàn)陰性；或者KCN試驗(yàn)陽(yáng)性和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性的非沙門(mén)氏菌任一培養(yǎng)物予以去除。6、 沙門(mén)氏菌血清學(xué)菌體（O）試驗(yàn)。（用已知沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物同所有抗血清做予試驗(yàn)）。a、 多價(jià)菌體（O）試驗(yàn)：用蠟筆在每個(gè)玻璃或塑料平板（15100mm）內(nèi)側(cè)劃出2個(gè)約12cm的區(qū)域?？墒褂蒙唐坊姆謪^(qū)載玻片，用2mL0.85%生理鹽水乳化從24-48hTSI斜面或者更好是胰胨血瓊脂基礎(chǔ)（無(wú)血），用3mm接

46、種環(huán)移取培養(yǎng)物。加1滴菌懸液于用蠟筆標(biāo)出的每一矩形區(qū)域的上部。這一區(qū)域的下部加1滴生理鹽水。在另一區(qū)域加1滴沙門(mén)氏菌多價(jià)菌體（O）抗血清。再以潔凈滅菌的接種環(huán)或針將一個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌懸液和生理鹽水混合。在另一區(qū)域內(nèi)菌懸液和抗血清液混合。將混合液前后傾斜移動(dòng)1min，并在良好照明下對(duì)著黑暗背景觀看，任何程度的凝集都視為陽(yáng)性反應(yīng)。多價(jià)菌體（O）試驗(yàn)結(jié)果分類(lèi)如下：陽(yáng)性反應(yīng)：混合物試驗(yàn)?zāi)?，而在鹽水對(duì)比中不凝集。陰性反應(yīng)：混合物試驗(yàn)不凝集，在鹽水對(duì)比中也不凝集。非特異性反應(yīng)：混合物試驗(yàn)和鹽水對(duì)比中皆凝集，需按Edwards和Ewing氏的腸桿菌科鑒定中所描述的進(jìn)一步作生化學(xué)和血清學(xué)試驗(yàn)。b、 菌體(O)群

47、試驗(yàn). 如有各群菌體（O）抗血清，包括Vi，代替沙門(mén)氏菌多價(jià)菌體（O）抗血清，按上述五，5a試驗(yàn)。對(duì)Vi凝集反應(yīng)陽(yáng)性的可參照官方分析分析方法的967.28B部分專(zhuān)門(mén)處理這些培養(yǎng)物。與菌體（O）群抗血清呈陽(yáng)性凝集的培養(yǎng)物，作該菌體（O）群陽(yáng)性記錄；不能與菌體（O）群抗血清發(fā)生反應(yīng)者，做該菌體（O）群試驗(yàn)陰性記錄。7、補(bǔ)充生化試驗(yàn). 按表1中1-11項(xiàng)試驗(yàn)，對(duì)培養(yǎng)物呈典型沙門(mén)氏菌反應(yīng)者，進(jìn)行沙門(mén)氏菌分類(lèi)。如在25g分析樣品中有一個(gè)TSI培養(yǎng)物被劃為沙門(mén)氏菌，則該25g分析樣品的其他TSI培養(yǎng)物就無(wú)需進(jìn)一步試驗(yàn)。沙門(mén)氏菌鞭毛（H）試驗(yàn)陽(yáng)性表明有沙門(mén)氏菌抗原，但不具有沙門(mén)氏菌生化特性者，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)物作純

48、分離（按上述五、1），按上述五、2開(kāi)始重新做試驗(yàn)。對(duì)表1中1-11項(xiàng)目，不呈典型沙門(mén)氏菌反應(yīng)的培養(yǎng)物做以下補(bǔ)充試驗(yàn)以最終推斷為非沙門(mén)氏菌。a、 酚紅乳糖肉湯或紫色乳糖肉湯。1) 從每個(gè)尚未分類(lèi)的24-48hTSI瓊脂斜面上挑取少許培養(yǎng)物，接種到肉湯管中，35培養(yǎng)482h。并在24h后開(kāi)始觀看變化。陽(yáng)性反應(yīng)：產(chǎn)酸（黃色）和在倒立發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)氣。只要產(chǎn)酸就視為陽(yáng)性反應(yīng)。大多數(shù)沙門(mén)氏菌為陰性結(jié)果。即在倒立發(fā)酵管內(nèi)沒(méi)有氣體形成，和整個(gè)培養(yǎng)基呈紅色（含酚紅指示劑）或紫色（含溴甲酚紫指示劑）。2) 除培養(yǎng)物在TSI瓊脂斜面上產(chǎn)酸和在LIA中呈陽(yáng)性反應(yīng)，或丙二酸鹽肉湯試驗(yàn)呈陽(yáng)性的培養(yǎng)物外，棄去乳糖試驗(yàn)陽(yáng)性的非

49、沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物。為了證明他們是否為亞利桑那菌，需對(duì)這些培養(yǎng)物作進(jìn)一步試驗(yàn)。b.酚紅蔗糖肉湯或紫色蔗糖肉湯。按上述五,7a-1所敘述的程序進(jìn)行，除那些培養(yǎng)物在TSI瓊脂斜面上產(chǎn)酸和在LIA中呈陽(yáng)性反應(yīng)者外，呈蔗糖試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果者皆作為非沙門(mén)氏菌棄去。c. MR-VP肉湯.對(duì)每個(gè)未分類(lèi)的TSI瓊脂斜面上可疑沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物，挑取少許，接種到此肉湯管中，置于35培養(yǎng)482h。1) 在室溫下按下述進(jìn)行Voges-Proskauer氏(VP)試驗(yàn)：移取1mL48h培養(yǎng)物于試管中，并將剩余的MR-VP肉湯于35再培養(yǎng)48h。加入0.6mL-萘酚溶液于試管中并振搖；加40%KOH溶液0.2mL，并振搖。為了加快

50、反應(yīng)速度，加少許肌酸結(jié)晶。4h后觀看結(jié)果：陽(yáng)性反應(yīng)為整個(gè)培養(yǎng)基由粉紅色轉(zhuǎn)變至紅寶石色。絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌VP試驗(yàn)陰性，即整個(gè)肉湯不呈粉紅至紅色變化。2) 甲基紅試驗(yàn)：吸取經(jīng)96h培養(yǎng)的MR-VP肉湯5mL于試管中，加入5-6滴甲基紅指示劑，立即觀看結(jié)果。絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物呈陽(yáng)性結(jié)果，即培養(yǎng)基呈彌散性紅色。明顯的黃色為陰性結(jié)果。對(duì)KCN陽(yáng)性，V-P試驗(yàn)陽(yáng)性及甲基紅試驗(yàn)為陰性培養(yǎng)物，皆可作為非沙門(mén)氏菌棄去。d. Simmons氏枸櫞酸鹽瓊脂. 從未分類(lèi)的TSI瓊脂斜面上，用接種針沾取培養(yǎng)物，劃線接種于枸櫞酸鹽瓊脂斜面上，并穿刺底層。置于35培養(yǎng)962h，按下述方法讀取結(jié)果。陽(yáng)性反應(yīng)：能生長(zhǎng)，通常

51、伴隨顏色由綠色變蘭色。大多數(shù)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物為枸櫞酸鹽陽(yáng)性。陰性反應(yīng)：不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，而且不變色。8、培養(yǎng)物的分類(lèi)：沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物應(yīng)具有表1反應(yīng)模式。凡培養(yǎng)物具有表2所列任何一小項(xiàng)結(jié)果，為非沙門(mén)氏菌則棄去。對(duì)任何培養(yǎng)物，當(dāng)不能按表1的分類(lèi)表，明確地鑒定為非沙門(mén)氏菌屬，或也不能依照表2所列試驗(yàn)反應(yīng)從沙門(mén)氏菌屬中排除者，可按Edwards和Ewings氏的“腸桿菌科鑒定”所述的補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步分類(lèi)。如2個(gè)TSI培養(yǎng)物皆不能按生化試驗(yàn)證實(shí)分離物為沙門(mén)氏菌時(shí)，則對(duì)同一個(gè)25g檢驗(yàn)樣品中保留的尿素酶陰性TSI培養(yǎng)物，按五，5開(kāi)始進(jìn)行生化學(xué)試驗(yàn)。FDA沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中文版（三）表1.沙門(mén)氏菌的生化和血清學(xué)

52、反應(yīng) 反應(yīng)和底物 結(jié)果 沙門(mén)氏菌的反應(yīng)(a) 陽(yáng)性 陰性 1.葡萄糖(TSI) 黃色底部 紅色底部 + 2.賴(lài)氨酸脫酸酶(LIA) 紫色底部 黃色底部 + 3.H2S(TSI和LIA) 黑色 無(wú)黑色 + 4.尿素酶 紫紅色 無(wú)顏色變化 - 5.賴(lài)氨酸脫酸酶肉湯 紫色 黃色 + 6.苯酚紅衛(wèi)茅醇肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不產(chǎn)氣或無(wú)顏色變化 +(b) 7.KCN肉湯 生長(zhǎng) 不生長(zhǎng) - 8.丙二酸鈉肉湯 藍(lán)色 無(wú)顏色變化 -(c) 9.吲哚試驗(yàn) 溶液表面為紫色 溶液表面為黃色 - 10.多價(jià)鞭毛試驗(yàn) 凝集 不凝集 + 11.多價(jià)菌體試驗(yàn) 凝集 不凝集 + 12.苯酚紅乳糖肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不

53、產(chǎn)氣；無(wú)顏色變化 -(c) 13.苯酚紅蔗糖肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不產(chǎn)氣；無(wú)顏色變化 - 14.V-P試驗(yàn) 粉色至紅色 無(wú)顏色變化 - 15.甲基紅試驗(yàn) 紅色 黃色 + 16.西蒙氏枸櫞酸鹽 生長(zhǎng)，藍(lán)色 不生長(zhǎng)，無(wú)顏色變化 v a+， 90%陽(yáng)性(1-2天內(nèi))；- ，90%陰性(1-2天內(nèi))；V，不穩(wěn)定b大部分亞利桑那沙門(mén)氏菌陰性c大部分亞利桑那沙門(mén)氏菌陽(yáng)性 表2.分離非沙門(mén)氏菌的關(guān)鍵特征 反應(yīng)和底物 結(jié)果 1、尿素酶2、吲哚多價(jià)H血清實(shí)驗(yàn) 陽(yáng)性（粉-紅色）陽(yáng)性（粉-紅色）陰性（不凝集） 吲哚Spicer-Edwards血清試驗(yàn) 陽(yáng)性（粉-紅色）陰性（不凝集） 3賴(lài)氨酸脫羧酶KCN肉湯 陰

54、性（黃色）陽(yáng)性（生長(zhǎng)） 4、苯酚紅乳糖肉湯 陽(yáng)性（黃色、有或沒(méi)有氣體）（a） 5、苯酚紅蔗糖肉湯 陽(yáng)性（黃色、有或沒(méi)有氣體）（a）（b） 6、KCN肉湯V-P實(shí)驗(yàn)中性紅實(shí)驗(yàn) 陽(yáng)性（生長(zhǎng)）陽(yáng)性（粉-紅色）陰性（明顯的黃色） a 丙二酸鈉陽(yáng)性的培養(yǎng)物需進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)確定是否是S.arzonae；b 假如在LIA上有典型的沙門(mén)氏特征的培養(yǎng)物不要棄去，需進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，確定是否是沙門(mén)氏菌。 9. 沙門(mén)氏菌屬的擬定性鑒定。使用5種商品化的生物化學(xué)試劑盒（API 20E, Enterotube II, Enterobacter aceae II, MICRO-ID,或Vitek GNI）中任一種，代替

55、常規(guī)的生化管系統(tǒng)，鑒定擬定食源性沙門(mén)氏菌屬。按本節(jié)鑒定所述，檢驗(yàn)人員依照自己試驗(yàn)室選擇商品試劑盒與生化管系統(tǒng)相適應(yīng)的一種商品試劑盒。生化學(xué)商品試劑盒不能用來(lái)代替血清學(xué)試驗(yàn)（1）。組裝試劑盒，配制試劑盒所需試劑。參照官方分析方法的978.24部分（API-20E, Enterotube II和Enterobacterlaceae II）,989.12部分（MICRO-ID）,和991.13部分（Vitek GNI）,接種于每個(gè)組合，并按規(guī)定的時(shí)刻與溫度進(jìn)行培養(yǎng)。加試劑，觀看與記錄結(jié)果。參照上述Ref.1把培養(yǎng)物擬定為沙門(mén)氏菌或非沙門(mén)氏菌屬。為證實(shí)擬定為沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)物，尚需進(jìn)行沙門(mén)氏菌菌體（O）

56、血清學(xué)試驗(yàn)，按上述五，5；和沙門(mén)氏菌鞭毛（H）血清試驗(yàn)，按上述五，3；或進(jìn)行Spicer-Edwards氏鞭毛（H）試驗(yàn)。并按下列原則對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行分類(lèi)：a. 用商品化試劑盒擬定為沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)物，若沙門(mén)氏菌菌體（O）血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性與沙門(mén)氏菌鞭毛（H）血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性的則報(bào)告為沙門(mén)氏菌。b. 用商品化試劑盒確定為非沙門(mén)氏菌的培養(yǎng)物，參照AOAC標(biāo)準(zhǔn)（1）確定亦為非沙門(mén)氏菌，應(yīng)作非沙門(mén)氏菌予以排除。c. 凡不符合a或b的培養(yǎng)物，應(yīng)按上述五,2-7項(xiàng)中有關(guān)規(guī)定作進(jìn)一步試驗(yàn)，或按Ewing(2)氏的有關(guān)項(xiàng)目進(jìn)一步試驗(yàn)，或送至標(biāo)準(zhǔn)定型實(shí)驗(yàn)室，做最后的血清定型與鑒定。10. 鞭毛（H）試驗(yàn)陰性培養(yǎng)物的處理：

57、對(duì)一些生化反應(yīng)典型，被認(rèn)為是沙門(mén)氏菌，但鞭毛（H）試驗(yàn)陰性的培養(yǎng)物，可能是無(wú)動(dòng)力的菌株，或鞭毛抗原發(fā)育不充分，對(duì)此培養(yǎng)物的動(dòng)力測(cè)定方法如下：從TSI斜面上挑取少量的培養(yǎng)物，接種于動(dòng)力試驗(yàn)培養(yǎng)基平板中，在距平板邊緣10mm處一次穿刺2-3mm深，不要刺到平板底或接種到其他任何部位。置于35培養(yǎng)24h。假如細(xì)菌游散生長(zhǎng)至40mm或更遠(yuǎn)，按下述方法再試驗(yàn)：在游散生長(zhǎng)最遠(yuǎn)處，用3mm接種環(huán)轉(zhuǎn)種一環(huán)培養(yǎng)物至胰酪胨大豆蛋白胨肉湯中。重復(fù)沙門(mén)氏菌多價(jià)鞭毛（H）（按上述五，3）或作Spicer-Edwards氏鞭毛（H）血清學(xué)試驗(yàn)。假如培養(yǎng)物經(jīng)第一個(gè)24h培養(yǎng)后無(wú)動(dòng)力，于35培養(yǎng)24h；假如仍無(wú)動(dòng)力，則置25

58、再培養(yǎng)5天。假如上述試驗(yàn)仍為陰性，把該培養(yǎng)物定為無(wú)動(dòng)力菌株。假如鞭毛（H）陰性培養(yǎng)物，按生化學(xué)反應(yīng)可疑為沙門(mén)氏菌，應(yīng)將培養(yǎng)物呈送微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室作進(jìn)一步的鑒定和/或血清學(xué)分型。11.血清學(xué)定型培養(yǎng)物遞送。除非另有講明，每個(gè)檢驗(yàn)樣品要遞送1個(gè)分離物。培養(yǎng)物要放在腦心浸液瓊脂斜面的試管(13X100mm或16X125mm)內(nèi)遞送。試管的螺旋帽應(yīng)擰緊以確保安全。試管標(biāo)貼上樣品編號(hào)，分析編號(hào)和密碼。提交的每一個(gè)樣品應(yīng)有以下記錄：1)收集報(bào)告 FD-464或進(jìn)口報(bào)告FD-784；2)檢測(cè)者的工作記錄 FD-431；3)沙門(mén)氏菌的記錄 FD-431g。放置培養(yǎng)物于培養(yǎng)容器內(nèi)并加蓋FDA印章封口，此培養(yǎng)物的記

59、錄(以上E-11)放在搬運(yùn)箱內(nèi)，但不要放在加蓋FDA印章的容器內(nèi)。提交關(guān)于樣品編號(hào)的申請(qǐng)或信函，以便早日出結(jié)果，按病原微生物的運(yùn)輸規(guī)定進(jìn)行運(yùn)輸。依據(jù)聯(lián)邦登記以最快的方式進(jìn)行運(yùn)輸。關(guān)于提交的樣品需保留一份拷貝。沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌（Salmonella）沙門(mén)氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)覺(jué)的近一千種(或菌株)。按其抗原成分，可分為甲、乙、丙、丁、戊等差不多菌組。其中與人體疾病有關(guān)的要緊有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引起人類(lèi)的疾病外，大多數(shù)僅能目引起家畜、鼠類(lèi)

60、和禽類(lèi)等動(dòng)物的疾病，但有時(shí)也可污染人類(lèi)的食物而引起食物中毒。沙門(mén)氏菌差不多介紹沙門(mén)氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門(mén)氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。它們除可感染人外，還可感染專(zhuān)門(mén)多動(dòng)物包括哺乳類(lèi)、鳥(niǎo)、爬行類(lèi)、魚(yú)、兩棲類(lèi)及昆蟲(chóng)。人畜感染后可呈無(wú)癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動(dòng)物的生殖生產(chǎn)力。蛋、家禽和肉類(lèi)產(chǎn)品是沙門(mén)氏菌病的要緊傳播媒介，感染要緊取決于沙門(mén)氏菌的血清型和食用者的軀體狀況，受威脅最大的是小孩、老年人及免疫缺陷個(gè)體。依照國(guó)際慣例，要求對(duì)易受沙門(mén)氏菌污染的食品進(jìn)行分類(lèi)治理，以使