藥學(xué)院藥分小學(xué)期實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)-復(fù)方乙酰水楊酸的質(zhì)量檢查

1、 藥學(xué)院藥分小學(xué)期實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 復(fù)方乙酰水楊酸的質(zhì)量檢查 院 系： - 姓 名： - 學(xué) 號(hào)： - 指導(dǎo)老師： - 學(xué) 科： 藥物分析 2014年09月24日石河子大學(xué)藥學(xué)院復(fù)方乙酰水楊酸中阿司匹林的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定 2011級(jí)藥學(xué)（4）班 摘要 目的：復(fù)方乙酰水楊酸片劑中阿司匹林的鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。方法：（1）鑒別：薄層色譜法，展開劑 氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2)，在紫外燈(2 54n m ) 下檢視。 （2）雜質(zhì)檢查：高效液相色譜法，采用色譜柱（，）， 流動(dòng)相: 甲醇-水-冰醋酸(70：29：1) ; 檢測波長為，柱溫為，流速為1.0mL/m

2、in，進(jìn)樣量為。 （3）含量測定：高效液相色譜法，采用色譜柱（，），以乙腈為溶劑，流動(dòng)相為甲醇水冰醋酸(70：29：1 )，檢測波長276nm，柱溫 ，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為。結(jié)果：（1）鑒別：樣品中一個(gè)斑點(diǎn)與阿司匹林對(duì)照品的斑點(diǎn)比移值相差不大（Rf供 =7.25/10.1=0.72 Rf對(duì)=R1/R=7.8/10.1=0.77） （2）雜質(zhì)檢查：水楊酸在424ug/ml 內(nèi), 線性關(guān)系良好, r=0.9952, （3）含量測定：阿司匹林在0.030.12ug/ml內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.9863關(guān)鍵詞:阿司匹林 水楊酸 高效液相 薄層色譜 1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 藥品性狀本品為白色

3、結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭或微帶醋酸臭，味微酸；遇濕氣即緩緩水解。溶解度：本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或無水乙醚中微溶；在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解。酸性：阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中具有鄰位取代苯甲酸結(jié)構(gòu)，故具有酸性。水解性：本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯鍵，可發(fā)生水解。吸收光譜特性：阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)的大共軛結(jié)構(gòu)，故可以產(chǎn)生紫外吸收。1.2儀器與試劑1.1.1儀器：微孔濾膜、高效液相色譜儀、燒杯、硅膠板、層析缸、玻璃棒、容量瓶、分析天平、移液管、紫外燈等1.1.2試劑：復(fù)方乙酰水楊酸片（25mg/片）、阿司匹林對(duì)照品（25mg/25ml=1000ug/1ml ）、水楊酸

4、對(duì)照品（12.5mg/25ml=500ug/1ml ）、氯仿、乙醚、丙酮、冰醋酸、無水乙醇、色譜甲醇、分析純冰醋酸、純凈水等展開劑（氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2) ）、流動(dòng)相（甲醇-水-冰醋酸(70：29：1)。1.3 鑒別試驗(yàn)薄層色譜法鑒別1.3.1 溶液的制備1.3.1.1 樣品溶液的制備 取復(fù)方乙酞水楊酸片1片, 研細(xì), 加氯仿15 m,l, 振搖溶解, 濾過, 濾液作為樣品溶液。 1.3.1.2 單一對(duì)照品溶液的制備分別稱取乙酞水楊酸、加氯仿制成每l m l 中含乙酞水楊酸1 4.7mg的單一對(duì)照品溶液。1.3.2 薄層色譜鑒別： 1.3.2.1 層析液的

5、制備：用移液管量取氯仿27ml,乙醚18ml,丙酮1ml,冰醋酸2ml,倒入層析缸中，配成展開劑（氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2) ），蓋上蓋子，飽和10min。 1.3.2.2跑板：取對(duì)照品和供試品溶液，用點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠板，將點(diǎn)樣完畢的層析板放入已飽和的層析缸中，進(jìn)行展開，蓋上蓋子，放平層析缸。待層析液最前端距離層析板頂端還有2厘米左右時(shí)，取出層析板，晾干，在254nm紫外燈下觀察斑點(diǎn)位置。記錄斑點(diǎn)位置。1.4 雜質(zhì)檢查與含量測定高效液相法試藥：對(duì)照品溶液、供試品溶液1.4.2實(shí)驗(yàn)步驟：溶液的制備 供試品溶液的制備： 取本品20片，稱重，求得平均片中，研細(xì)，

6、精密稱取適量（相當(dāng)于阿司匹林220），置于100ml容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取5ml于100ml容量瓶稀釋至刻度為樣品溶液。 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備： 阿斯匹林標(biāo)準(zhǔn)品：取阿司匹林對(duì)照品25.，精密稱定，置于25容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為阿司匹林對(duì)照品儲(chǔ)備 游離水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品：取水楊酸對(duì)照品12.5，精密稱定，置于25容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為水楊酸對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。 用移液管量取適量阿斯匹林對(duì)照品溶液1ml、0.6ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml稀釋到10ml容量瓶中，配成一系列濃度的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。同理移液管量取適量水楊酸對(duì)照品

7、溶液1ml、0.5ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml稀釋到10ml容量瓶中，配成一系列濃度的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。1.4.2.2 流動(dòng)相的制備 分別取甲醇140ml、純凈水60ml、冰醋酸1ml于試劑瓶中配成甲醇-水-冰醋酸為70：29：0.5的流動(dòng)相（甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純），超聲15min后使用。 進(jìn)樣測定 用高效液相色譜法，采用色譜柱（，）， 流動(dòng)相: 甲醇-水-冰醋酸(70：29：0.5) ; 檢測波長為，柱溫為，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為，分別記錄出峰面積等數(shù)據(jù)。 2 結(jié)果與討論 2.1鑒別 2.1.1結(jié)果D1=7.80cmD0=10.1cmD2=7.25cm供試品對(duì)照

8、品 Do=10.1cm D1=7.80cm D2=7.25cm 比移值（Rf）=從基線至展開斑點(diǎn)中心的距離/從基線至展開劑前巖的距離 標(biāo)準(zhǔn)品：Rf=R1/R=7.8/10.1=0.77 樣品：Rf=R2/R=7.25/10.1=0.72 即測得供試品斑點(diǎn)中心到基線距離為7.25cm，樣品斑點(diǎn)到基線的距離為7.80cm 則計(jì)算結(jié)果為Rf供= Rf=R2/R=7.25/10.1=0.72 Rf對(duì)=R1/R=7.8/10.1=0.77結(jié)果如圖顯示樣品中的最遠(yuǎn)斑點(diǎn)即阿斯匹林與對(duì)照品中斑點(diǎn)距離并不完全一致，但能定性的表明樣品中含有所阿斯匹林置紫外燈( 2 5 4n m ) 下檢視，樣品溶液 與相應(yīng)的對(duì)照

9、品溶液所顯的斑點(diǎn)一致,均顯暗紅色。且能夠清晰地觀察到復(fù)方乙酰水楊酸片中乙酰水楊酸、非那西丁、咖啡因3個(gè)完全分離的樣品斑點(diǎn),易于辯認(rèn)。 2.1.2討論： 雖然最終定性測出含有阿斯匹林，且使復(fù)方乙酰水楊酸片中乙酰水楊酸、非那西丁、咖啡因3個(gè)樣品成功的得到了很好的分離。但是如圖樣品和對(duì)照品含有的阿斯匹林斑點(diǎn)位置并不完全一致，并且在實(shí)驗(yàn)過程中由于各種原因，在結(jié)果出來之前，進(jìn)行了三次跑板點(diǎn)都沒分開，經(jīng)過第四次矯正，點(diǎn)才分離開，經(jīng)分析，出現(xiàn)上述現(xiàn)象原因可能有以下幾點(diǎn)： 斑點(diǎn)位置不一致原因：基線未畫水平，而使跑樣起點(diǎn)不同；薄層板沒放好或展開槽沒有放平；點(diǎn)樣時(shí)點(diǎn)樣位置沒有完全在同一水平線上，也使跑點(diǎn)開始時(shí)起點(diǎn)

10、不同。前幾次跑點(diǎn)失敗原因：（1）第一次跑樣時(shí)可能是點(diǎn)樣時(shí)，樣品和對(duì)照組的點(diǎn)樣量不均勻，斑點(diǎn)大小不同，且供試品點(diǎn)樣量相對(duì)過大，以至于跑點(diǎn)時(shí)沒能夠跑開。（2）第一次和第二次可能是前面長時(shí)間跑樣，以致使展開劑的有些成分揮發(fā)，而改變了原來有效的成分組成比，以使樣品組分不能展開。針對(duì)以上問題，我們又做出了一些相應(yīng)的調(diào)整，得出較滿意的結(jié)果。2.2含量檢查2.2.1結(jié)果測得阿司匹林對(duì)照品梯度濃度結(jié)果如下表1和圖1。表1：峰面積濃度（ug/ml）102030 60 100123平均峰面積124991123396134994127793.5174978157849166413.5281207 585529285

11、874 568622283540.5 577075.5117146411063651138915 圖1回歸方程為：10373x43315（0.9863） 樣品測定兩次進(jìn)樣測定結(jié)果分別如下：峰# 保留時(shí)間 面積高度面積%拖尾因子相對(duì)保留時(shí)間1 1.513 13506 9041.2570 - -2 1.845 7534 6650.7012 - -3 2.321 8123 3330.7561 - -4 2.883 3190641746029.6962 2.295 -5 3.806 210080947619.5528 2.488 -6 4.725 5161181907848.0367 2.728 -峰

12、#保留時(shí)間面積高度面積%拖尾因子相對(duì)保留時(shí)間1 1.517 15982 10481.3293 - -2 1.849 8607 7660.7159 - -3 2.333 12694 4611.0559 - -4 2.891 360123 1953829.9536 2.281 -5 3.813 235267 1055619.5686 2.456 -6 4.731 569594 21244 47.3767 2.671 -由一系列阿司匹林對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖可知：阿司匹林保留時(shí)間在4.5min左右，且樣品中最后一個(gè)峰與阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)品出的峰相似。因此可推斷出樣品色譜圖中最后一個(gè)峰代表阿司匹林。 平均峰

13、面積=（516118+569594）/2=542856 帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得 54285610373x43315 解得x=56.51ug/ml 實(shí)驗(yàn)稱取20片復(fù)方APC,總重為9.1739g，平均片重為0.4587g，實(shí)驗(yàn)稱得0.1663g樣品，甲醇溶解，于25ml容量瓶中定容。樣品濃度為：0.1663g/100/20/100=83.15ug/ml此濃度樣品中阿司匹林含量為x： 4587mg/220mg=83.15ug/x X=3.9880ug因此樣品中阿司匹林的濃度為3.9880ug/ml.標(biāo)示量%=實(shí)測值/理論值*100% =3.9880/56.51*100% =7.06%2.2.3 討論測

14、得結(jié)果偏小，可能是（1）由于過濾時(shí)用水潤洗，而導(dǎo)致溶液稀釋。（2）可能是由于樣品未充分震蕩溶解，而造成濃度偏小。（3）也可能是本藥品由于生產(chǎn)或儲(chǔ)存不當(dāng)，而使有效成分降解，使阿斯匹林含量降低。并且在做高效液相時(shí)，出現(xiàn)了一些如下問題：2.2.3.1 實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性不是很好，個(gè)別峰不是很理想，以至于有些峰面積值未能測出；標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)也出現(xiàn)有雜峰，可能是基線噪音，或者是在配置、稀釋或進(jìn)樣時(shí)引入了一些雜質(zhì)，而對(duì)峰形產(chǎn)生了一定的影響；數(shù)據(jù)的線性回歸系數(shù)（0.9863）有點(diǎn)小，說明由于上述各種原因而使這次試驗(yàn)的誤差比較大。 2.2.3.2 流動(dòng)相的選擇:曾考察過1%醋酸溶液- 甲醇(4 ：6)、1%醋酸溶液(用

15、二乙胺調(diào)節(jié)pH 3.3 3.4) - 甲醇( 60:40) 為流動(dòng)相,但效果不是很好，不能達(dá)到測定的效果，后又根據(jù)峰形加了甲醇的用量，最終確定配比為甲醇：水：冰醋酸為70：29：1，而得到了很好的測定效果，故選用本流動(dòng)相, 保留時(shí)間適中, 分離效果好, 且峰對(duì)稱性好。 2.2.3.3 溶劑的選擇: 因乙酰水楊酸不穩(wěn)定,且為了增加實(shí)驗(yàn)的成功率，故選用甲醇為溶劑，結(jié)果得到了很好得測定效果。 2.2.3.4 測定波長的選擇: 由相關(guān)權(quán)威文獻(xiàn)查得乙酰水楊酸的最大吸收波長為280nm, 故綜合考慮處方量及靈敏度, 選用276nm 為檢測波長。 結(jié)論 實(shí)驗(yàn)最終測得的阿斯匹林含量標(biāo)示量為7.06%，含量偏低

16、。2.3雜質(zhì)檢查2.3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果測得水楊酸對(duì)照品梯度濃度測定結(jié)果如下表2和圖2表2：濃度（ug/ml）峰面積5.1210.2415.36 25.6051.20 12平均峰面積167776306200236988302218298333300275.5426499421467423983 586065954622 圖2:回歸方程為：15678+163236（20.9952）。樣品雜質(zhì)檢查結(jié)果水楊酸雜質(zhì)峰為緊鄰第一個(gè)高峰左邊的小峰。平均峰面積=（164234+169396）/2=166399帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得 16639915678x+163236 解得x=0.2017ug/ml樣品濃度為：0

17、.1663g/100/20/100=83.15ug/ml所以雜質(zhì)百分含量為:0.201783.15*100%=0.24% 中國藥典采用顯色反應(yīng)對(duì)阿司匹林片中水楊酸進(jìn)行檢查，規(guī)定其限量為0.3%，實(shí)驗(yàn)檢測得雜質(zhì)水楊酸含量為0.24%0.3%，所以本品復(fù)方阿司匹林片中雜質(zhì)水楊酸的含量在雜質(zhì)限量范圍內(nèi)，合格。2.4討論 檢測波長的選擇: 查得文獻(xiàn)得水楊酸溶液用紫外分光光度法測定時(shí), 流動(dòng)相為空白, 在250一350nm 掃描,其最大吸收選擇檢測波長為295nm。 樣品溶劑的選擇:樣品復(fù)方乙酰氨基酚與水楊酸對(duì)照品均使用甲醇溶解，通過觀察，溶解性很好，再使用微孔濾膜過濾，之后使用高效液相色譜法測定。限度

18、: 美國藥典復(fù)方乙酰水楊酸中游離水楊酸限度為3.0 %。根據(jù)國內(nèi)生產(chǎn)廠家實(shí)際生產(chǎn)情況(上表)及國外同品種限度確定游離水楊酸限度為0.3 % (原標(biāo)準(zhǔn)游離水楊酸的限度為0.3 % )。在雜質(zhì)測定時(shí)采用HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線測定，相對(duì)即準(zhǔn)確又簡單，故為大部分雜質(zhì)檢查的主要方法。2.5結(jié)論: 本方法能夠較好的分離復(fù)方乙酰水楊酸與游離水楊酸，實(shí)驗(yàn)檢測得雜質(zhì)水楊酸含量為0.24%0.3%， 本品復(fù)方阿司匹林片中雜質(zhì)水楊酸的含量在雜質(zhì)限量范圍內(nèi)，合格。 參考文獻(xiàn)1 ISBN7 一5025 一2736 一2 / R60. 中國藥典二部2000(S2李銳，李香鳳測定復(fù)方乙酰水楊酸片中游離水楊酸雜質(zhì)檢查及限量中 國 現(xiàn) 代