EGFR-TK背景研究進(jìn)展及相關(guān)酶測(cè)試講課講稿

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。EGFR-TK背景研究進(jìn)展及相關(guān)酶測(cè)試-肺癌是當(dāng)今世界各國常見的惡性腫瘤，并已成為絕大多數(shù)國家癌癥死亡的主要原因。其中以非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)最常見。目前靶向治療已經(jīng)成為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）臨床治療的重要手段。易瑞沙（Iressa/吉非替尼/Gefitinib,阿斯利康）和特羅凱（Tarceva/厄羅替尼/Erlotinib，羅氏制藥）作為表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，是美國FDA批準(zhǔn)用于NSCLC靶向治療的主要藥物。但是，臨床試驗(yàn)表明易瑞沙和特羅凱僅對(duì)10-30%的

2、NSCLC病人有顯著療效。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與NSCLC靶向治療的療效具有相關(guān)性，絕大多數(shù)攜帶EGFR基因突變的病人療效顯著。大量研究資料表明EGFR基因突變主要集中在酪氨酸激酶區(qū)(tyrosinekinasecodingdomain，18-2l外顯子)，其中19外顯子多為框內(nèi)缺失(746-753)性突變，約占所有突變的45；21外顯子多為替代突變(主要是L858R)，約占所有突變的40。目前普遍認(rèn)為，這兩個(gè)熱點(diǎn)突變可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)TKI的敏感性，并且可作為TKI治療的有效預(yù)測(cè)指標(biāo)。因此，檢測(cè)EGFR基因突變對(duì)于指導(dǎo)NSCLC病人臨床用藥具有重要的參考價(jià)值。HYPERLINK/

3、z/Search.e?sp=S%E8%A1%A8%E7%9A%AE%E7%94%9F%E9%95%BF%E5%9B%A0%E5%AD%90&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank表皮生長(zhǎng)因子HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E5%8F%97%E4%BD%93&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank受體（EGFR）是一個(gè)170kDa的跨膜糖HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E8%9B%8B%E7%99%BD&ch=w.search.yjjlink&c

4、id=w.search.yjjlinkt_blank蛋白受體HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E9%85%AA%E6%B0%A8%E9%85%B8%E6%BF%80%E9%85%B6&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank酪氨酸激酶，由表皮生長(zhǎng)因子激活，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。EGF或TGF對(duì)EGFR的結(jié)合激活受體的HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E9%85%AA%E6%B0%A8%E9%85%B8&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank酪氨酸激酶

5、活力。EGFRHYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E7%BE%A7%E5%9F%BA&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank羧基末端的酪氨酸殘基Tyr1068、Tyr1148、和Tyr1173是EGF結(jié)合后發(fā)生的自動(dòng)HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E7%A3%B7%E9%85%B8%E5%8C%96&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank磷酸化的主要位點(diǎn)。一旦被激活，EGFR1068位和1173位磷酸化的酪氨酸殘基就能介導(dǎo)Grb2對(duì)EGFR的結(jié)合。

6、此外，1173位磷酸化的酪氨酸殘基是SHC在EGFR上的主要結(jié)合位點(diǎn)。EGFR廣泛分布在許多正常和惡性HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E4%B8%8A%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank上皮細(xì)胞中，其過度表達(dá)和自我激活可能與許多HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E8%82%BF%E7%98%A4&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。目前主要用于各種上皮源性HYPERL

7、INK/z/Search.e?sp=S%E6%81%B6%E6%80%A7%E8%82%BF%E7%98%A4&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank惡性腫瘤包括頭頸部HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E9%B3%9E%E7%99%8C&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank鱗癌、HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E8%82%BA%E7%99%8C&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank肺癌、

8、HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E4%B9%B3%E8%85%BA%E7%99%8C&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank乳腺癌和HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E8%86%80%E8%83%B1%E7%99%8C&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank膀胱癌等的研究。表皮生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑表皮生長(zhǎng)因子與其受體表皮生長(zhǎng)因子受體結(jié)合后可引發(fā)一系列細(xì)胞內(nèi)變化，最終使細(xì)胞發(fā)生分化或增殖。表皮生長(zhǎng)因子受體是一種受體酪氨酸HYPERLINK

9、/z/Search.e?sp=S%E8%9B%8B%E7%99%BD%E6%BF%80%E9%85%B6&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank蛋白激酶，而受體酪氨酸蛋白激酶RasMAPKHYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E7%BA%A7%E8%81%94&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank級(jí)聯(lián)途徑是表皮生長(zhǎng)因子刺激HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E4%BF%A1%E5%8F%B7%E4%BC%A0%E9%80%92&ch=w.search.

10、yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank信號(hào)傳遞到HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%A0%B8&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank細(xì)胞核內(nèi)的最主要途徑。它由以下成員組成：表皮生長(zhǎng)因子受體含有SH2HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E7%BB%93%E6%9E%84%E5%9F%9F&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白(如Grb2)HYPERLINK/z/

11、Search.e?sp=S%E9%B8%9F%E5%98%8C%E5%91%A4%E6%A0%B8%E8%8B%B7%E9%85%B8&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank鳥嘌呤核苷酸釋放因子(如SOS)Ras蛋白MAPKKK(如Raf1)MAPKKMAPKHYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E8%BD%AC%E5%BD%95%E5%9B%A0%E5%AD%90&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank轉(zhuǎn)錄因子等EGF受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程表皮生長(zhǎng)因子與受體結(jié)合后，可

12、以使受體發(fā)生HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E4%BA%8C%E8%81%9A%E4%BD%93&ch=w.search.yjjlink&cid=w.search.yjjlinkt_blank二聚體化，從而改變了受體的構(gòu)象，使其中的蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，磷酸化的受體便形成了與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子Grb2結(jié)合的位點(diǎn)，導(dǎo)致Grb2與受體的結(jié)合。Grb2中有兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域，該部位與一種稱為SOS的HYPERLINK/z/Search.e?sp=S%E9%B8%9F%E8%8B%B7%E9%85%B8&ch=w.search.yjjlink&

13、cid=w.search.yjjlinkt_blank鳥苷酸交換因子結(jié)合，使之活性改變，SOS則進(jìn)一步活化Ras，激活的Ras作用于MAPK激活系統(tǒng)，導(dǎo)致ERK的激活。最后ERK轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，導(dǎo)致某些轉(zhuǎn)錄因子的活性改變從而改變基因的表達(dá)狀態(tài)及細(xì)胞的增殖與分化過程。EGFR是原癌基因c-erbB1的表達(dá)產(chǎn)物，是表皮生長(zhǎng)因子受體（HER）家族成員之一。該家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在細(xì)胞生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。EGFR廣泛分布于哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞表面，

14、EGFR信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵因子的活性或細(xì)胞定位異常，均會(huì)引起腫瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發(fā)生。分布EGFR廣泛分布于哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞表面，EGFR信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵因子的活性或細(xì)胞定位異常，均會(huì)引起腫瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發(fā)生。EGFR研究進(jìn)展EGFR的單克隆抗體西妥昔單抗和帕尼單抗的問世大大拓寬了轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸腫瘤療效，而當(dāng)人們意識(shí)到使用免疫組織化學(xué)技

15、術(shù)檢測(cè)EGFR蛋白表達(dá)陽性與應(yīng)用EGFR單抗治療的療效并沒有相關(guān)性，便致力于可能的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物的研究。EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)下游的例如K-ras、BRAF、PIK3CA的基因突變，以及腫瘤抑制基因PTEN的失活都成了研究的熱點(diǎn)。在結(jié)直腸癌中，K-ras基因突變率為35%-45%，已成為EGFR單克隆抗體治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的主要療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物。另外，在K-ras野生型基因的患者中，BRAF、PIK3CA基因突變以及PTEN的缺失表達(dá)，都可能與EGFR單克隆抗體的耐藥有關(guān)，但在這些可能的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物被運(yùn)用到臨床實(shí)踐中前，還需進(jìn)一步地研究以明確他們的價(jià)值，以期在選擇適合接受EGFR單克隆抗體的患者

16、中起到更大的作用，而K-ras基因突變被作為治療前的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物，則是開創(chuàng)了轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌個(gè)體化治療的第一步。HYPERLINK/view/1566965.htm編輯本段其他相關(guān)資料EGFR和KRAS基因檢測(cè)意義EGFR表達(dá)EGFR表達(dá)EGFR表達(dá)于正常上皮細(xì)胞表面，而在一些腫瘤細(xì)胞中常過表達(dá)，EGFR的過表達(dá)和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵潤(rùn)、預(yù)后差有關(guān)。EGFR信號(hào)通路EGFR信號(hào)通路ShcGrb2PI3KSos-1RasMEKK-1RafMEKmTORMKK-7ERKJNKAKTEGFR靶向藥物分類EGFR靶向藥物分類EGFR突變EGFR突變EGFR酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在1821外EGFR

17、酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在1821外酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在18顯子,其中19和21號(hào)外顯子突變覆蓋突變的90%.顯子,其中19和21號(hào)外顯子突變覆蓋突變的19細(xì)胞外區(qū)域跨膜區(qū)域細(xì)胞內(nèi)區(qū)域EGFR突變率EGFR突變率100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%NS腺癌NS腺癌東亞歐美EGFR突變細(xì)胞癌基因休克假說EGFR突變細(xì)胞癌基因休克假說突變細(xì)胞EGFR基因檢測(cè)在肺癌中的應(yīng)用EGFR基因檢測(cè)在肺癌中的應(yīng)用檢測(cè)方法：DNA測(cè)序法檢測(cè)方法檢測(cè)周期:檢測(cè)周期7-10天檢測(cè)位點(diǎn)：EGFR的18，19，21號(hào)外顯子檢測(cè)位點(diǎn)標(biāo)本要求：標(biāo)本要求腫瘤組織病理切片，厚度8-1

18、0m,5-10張，要求腫瘤組織占標(biāo)本的70%以上支氣管鏡活檢組織，厚度8-10m，需要10張切片KRAS基因檢測(cè)KRAS基因檢測(cè)KRAS蛋白處于EGFR信號(hào)通路通路的下游。在生理情況下，EGFR信號(hào)通路活化后，KRAS蛋白短暫激活，其后迅速失活，KRAS激活/失活效應(yīng)是受控的。而KRAS基因突變時(shí)，可以導(dǎo)致EGRF信號(hào)通路持續(xù)激活，加速腫瘤細(xì)胞增殖。KRAS基因突變KRAS基因突變KRAS基因突變96%發(fā)生在第2號(hào)外顯子的12、13號(hào)密碼子。20%非小細(xì)胞肺癌、30-35%大腸癌患者中存在KRAS基因突變。KRAS基因檢測(cè)的重要性基因檢測(cè)的重要性?K-ras基因可以是正常狀態(tài)（稱為野生型）或異

19、常狀態(tài)（突變型）。?K-ras突變型編碼異常的蛋白，刺激促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散；并且不受上游EGFR的信號(hào)影響，所以對(duì)抗EGFR治療效果差。KRAS基因檢測(cè)可以篩選出EGFR靶向治療藥物有效的大腸癌患者，幫助醫(yī)生選擇對(duì)腫瘤病人最有效的治療方法，實(shí)現(xiàn)腫瘤病人的個(gè)體化治療。目前在歐美國家，大腸癌患者內(nèi)科治療前已經(jīng)常規(guī)檢測(cè)KRAS狀態(tài)，并且成為能否報(bào)銷相關(guān)抗EGFR治療費(fèi)用的憑據(jù)。KRAS基因-K-ras基因突變發(fā)生的時(shí)間基因基因突變發(fā)生的時(shí)間?K-ras基因突變發(fā)生在腫瘤惡變的早期，并且原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的K-ras基因高度保持一致。一般認(rèn)為，K-ras基因狀態(tài)不會(huì)因治療而發(fā)生變化。大腸癌患者K

20、-ras基因突變異常的概率為30%35%。KRAS基因-K-ras基因檢測(cè)（K-ras,p21）臨床意義?檢測(cè)K-ras基因突變是深入了解癌基因的情況、了解各種癌癥的發(fā)展預(yù)后、放化療療效的重要指標(biāo)。?1.K-ras基因突變發(fā)生在腫瘤惡變的早期，并且原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的K-ras基因高度保持一致。一般認(rèn)為，K-ras基因狀態(tài)不會(huì)因治療而發(fā)生變化。?2.K-ras基因突變見于20%的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，其中肺腺癌占30%50%。KRAS基因檢測(cè)在大腸癌中的應(yīng)用KRAS基因檢測(cè)在大腸癌中的應(yīng)用檢測(cè)方法：DNA測(cè)序法檢測(cè)方法檢測(cè)周期:檢測(cè)周期7-10天檢測(cè)位點(diǎn)：KRAS基因第2外顯子的12，13密

21、碼子檢測(cè)位點(diǎn)標(biāo)本要求：標(biāo)本要求腫瘤組織病理切片，厚度8-10?m,5-10張，要求腫瘤組織占標(biāo)本的70%以上。腸鏡活檢組織，厚度8-10?m，需要10張切片。項(xiàng)目開展情況生物治療研究室于2009年10月開始進(jìn)行靶向藥物特異靶點(diǎn)的基因檢測(cè)工作，目前已經(jīng)獨(dú)立檢測(cè)60余例，突變率達(dá)到27%，為個(gè)體化治療提供依據(jù)，取得較好的臨床療效，希望更多的臨床醫(yī)生充分利用這個(gè)技術(shù)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)腫瘤病人的個(gè)體化治療。上皮生長(zhǎng)因子受體（EpidermalGrowthFactorReceptor;EGFR）是上皮生長(zhǎng)因子（EGF）細(xì)胞增殖和信號(hào)傳導(dǎo)的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，該家族包括EGFR(ErbB-1

22、),HER2/c-neu(ErbB-2),Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)。EGFR也被稱作HER1、ErbB1，突變或過表達(dá)一般會(huì)引發(fā)腫瘤。EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細(xì)胞膜貫通，分子量170Da。HYPERLINK/image/7aad4ae72f657c66b8382059t_blanko查看圖片EGFR位于細(xì)胞膜表面，靠與配體結(jié)合來激活，包括EGF和TGF（transforminggrowthfactor）.激活后，EGFR有單體轉(zhuǎn)化為二聚體-盡管也有證據(jù)表明，激活前也存在二聚體。EGFR還可能和ErbB受體家族的其他成員聚合來激活，例如ErbB2/H

23、er2/neu。EGFR二聚后可以激活它位于細(xì)胞內(nèi)的激酶通路。包括Y992,Y1045,Y1068,Y1148andY1173等激活位點(diǎn)。這個(gè)自磷酸化可以引導(dǎo)下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和JNK通路,誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。受體激活對(duì)于皮膚的免疫來說很重要。研究表明在許多實(shí)體腫瘤中存在EGFR的高表達(dá)或異常表達(dá)。EGFR與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。其可能機(jī)制有：EGFR的高表達(dá)引起下游信號(hào)傳導(dǎo)的增強(qiáng)；突變型EGFR受體或配體表達(dá)的增加導(dǎo)致EGFR的持續(xù)活化；自分泌環(huán)的作用增強(qiáng)；受體下調(diào)機(jī)制的破壞;異常信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活等。EGFR的過表達(dá)在惡性腫瘤的演進(jìn)中起重要

24、作用，膠質(zhì)細(xì)胞、腎癌、HYPERLINK/view/22315.htmt_blank肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等組織中都有EGFR的過表達(dá)。對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究發(fā)現(xiàn)EGFR的高表達(dá)主要與其基因擴(kuò)增有關(guān)。但有時(shí)EGFR表達(dá)水平的調(diào)節(jié)異常也存在于翻譯及翻譯后。EGFR在腫瘤中的高表達(dá)還可能與活化后降解減少有關(guān)，一些研究指出c-Src可通過抑制受體泛素化和內(nèi)吞作用而上調(diào)EGFR水平。許多腫瘤中有突變型EGFR存在，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多種EGFR突變型。突變型EGFR的作用可能包括：具有配體非依賴型受體的細(xì)胞持續(xù)活化；由于EGFR的某些結(jié)構(gòu)域缺失而導(dǎo)致受體下調(diào)機(jī)制的破壞；異常信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活；細(xì)胞凋亡的抑

25、制等。突變體的產(chǎn)生是由于EGFR基因的缺失、突變和重排。EGFR的配體對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)有很大影響。EGFR的配體通過自分泌形式激活EGFR促進(jìn)細(xì)胞增殖，他們的共表達(dá)往往預(yù)示腫瘤預(yù)后不良，例如，在乳腺HYPERLINK/view/715869.htmt_blank浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的研究中發(fā)現(xiàn)，TGF與EGFR共表達(dá)，且這種共表達(dá)與病人的生存率顯著相關(guān)。Kopp等人對(duì)結(jié)/直腸癌的研究表明腫瘤的自分泌生長(zhǎng)是EGFR的過表達(dá)及其配體表達(dá)共同作用的結(jié)果。此外，對(duì)EGFR與腫瘤的血管生成、高侵襲性及轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)EGFR可以通過Ang-1及VEGF等因子水平的調(diào)節(jié)而影響腫瘤血管生成。相關(guān)術(shù)語解釋表皮生長(zhǎng)因

26、子受體在過去的20多年里，制藥公司與生物技術(shù)公司一直將表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）作為腫瘤治療的主要靶點(diǎn)，因?yàn)橛醒芯勘砻髯钄郋GFR，就可以使細(xì)胞信號(hào)傳遞中斷，從而遏制細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖。表皮生長(zhǎng)因子受(EpidermalGrowthFactorReceptor)表皮生長(zhǎng)因子吸煙史與健擇方案的關(guān)系在NSCLC靶向治療中,患者吸煙史可影響治療轉(zhuǎn)歸,例如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)抑制劑治療時(shí),吸煙史(特別是從未吸煙者)是這些藥物有效、有生存受益的臨床預(yù)測(cè)指標(biāo)。上皮生長(zhǎng)因子受體(EpithelialGrowthFactorReceptor)盡管Argos與SpitZ結(jié)合的模式和上皮生長(zhǎng)因子(EGF)和上皮

27、生長(zhǎng)因子受體(EGFR)結(jié)合的模式十分相似，但Argos與上皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)卻無相同的氨基酸序列也無相同的結(jié)構(gòu)。短語EGFRinhibitors因子蒙體克制劑MDRDeGFR估計(jì)腎小球過濾率EGFRinhibitor抑制劑認(rèn)識(shí)EGFR認(rèn)識(shí)EGFR-正常分裂中的EGFR在配體與表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）結(jié)合后，受體發(fā)生了二聚作用，二聚作用既包括兩個(gè)同種受體分子的結(jié)合（同源性二聚作用），也包括人類EGF相關(guān)性受體（HER）酪氨酸激酶家族中的不同成員的結(jié)合（異源性二聚作用）。二聚作用后是酪氨酸殘基的自磷酸化作用。這在配體與表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）結(jié)合后，受體發(fā)生了二聚作用，二聚作用既

28、包括兩個(gè)同種受體分子的結(jié)合（同源性二聚作用），也包括人類EGF相關(guān)性受體（HER）酪氨酸激酶家族中的不同成員的結(jié)合（異源性二聚作用）。二聚作用后是酪氨酸殘基的自磷酸化作用。這些磷酸化的殘基是募集適配蛋白和額外的酪氨酸激酶底物的結(jié)合位點(diǎn)。蛋白質(zhì)在激活的受體復(fù)合物中相互作用刺激ras蛋白，導(dǎo)致磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生和絲裂原激活蛋白（MAP）激酶的激活。或者轉(zhuǎn)錄信號(hào)傳導(dǎo)和激活、磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）-Akt和應(yīng)激活化蛋白激酶（SAPK）信號(hào)傳導(dǎo)通路將被激活。這些信號(hào)通路依次觸發(fā)基因轉(zhuǎn)錄，同時(shí)控制細(xì)胞增生、分化和生存的通路被激活。EGFR介導(dǎo)信號(hào)通路的特異性和強(qiáng)度取決于激活蛋白的性質(zhì)和四種EGF

29、R家族成員的水平。與HER2結(jié)合的配體不詳，但當(dāng)HER2和EGFR共表達(dá)時(shí)，前者經(jīng)常與配體激活的后者結(jié)合形成二聚體。這種異源性二聚體與EGFR同源性二聚體相比，往往具有更高的再利用率、穩(wěn)定性和傳導(dǎo)信號(hào)的能力。EGFR也能與HER3和HER4發(fā)生二聚作用，其產(chǎn)物具有更高的持久性和更強(qiáng)的PI3K活性。EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路一旦配體結(jié)合的EGFR被內(nèi)吞入細(xì)胞，信號(hào)將終止，受體將被降解或再循環(huán)到細(xì)胞膜表面，這取決于配體的性質(zhì)。例如，EGF結(jié)合的受體將被降解，而TGF-結(jié)合的受體則進(jìn)入再循環(huán)。不同的生長(zhǎng)因子會(huì)影響EGFR信號(hào)通路的數(shù)量和持續(xù)時(shí)間。EGFR信號(hào)通路有多重的生物學(xué)作用。例如，ras-MAPK信

30、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路刺激細(xì)胞的分裂和遷徙。EGFR也是多種受體通路的重要介體，起到信號(hào)會(huì)聚點(diǎn)的作用，能夠?qū)⑿盘?hào)整和與多樣化。例如，在應(yīng)激、膜解聚作用和一些非生理性刺激物（包括氧化劑、放射線和烷化劑）的反應(yīng)中，反向激活能誘導(dǎo)EGFR酪氨酸激酶的磷酸化并隨后發(fā)生信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。EGFR家族的成員在正常發(fā)育中起了重要的作用，但在人類腫瘤中經(jīng)常過度表達(dá)并失去控制，具體內(nèi)容見惡性腫瘤中的EGFR。HYPERLINK/view/1566965.htm編輯本段eGFR公式：評(píng)價(jià)與選擇正確理解eGFR公式腎小球?yàn)V過率（GFR）是慢性腎臟病（CKD）診斷和分期所依據(jù)的重要功能指標(biāo)。它不能直接測(cè)量，只能用某些物質(zhì)的腎臟或血漿清

31、除率表示。臨床常用內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）估算GFR，但測(cè)量Ccr操作繁瑣，影響因素多，易出偏差。數(shù)十年前臨床學(xué)者即開始嘗試開發(fā)含肌酐及性別、年齡、身高和體重等因素的GFR估算值（eGFR）公式。eGFR公式為CKD分期提供了極大便利，但其缺陷促使人們不斷對(duì)其進(jìn)行完善。最近發(fā)布的美國腎臟病膳食改良實(shí)驗(yàn)（MDRD）公式和慢性腎臟病流行病學(xué)合作（CKD-EPI）公式就是努力的結(jié)果。在MDRD公式本土化過程中，我國和日本為公式添加的種族系數(shù)分別為1.23和0.8。同是黃種人，為何有如此大的差異？是否有種族之外的影響因素？我國和日本腎病學(xué)者已開始共同探討這一話題。為此，北京大學(xué)第一醫(yī)院左力教授闡述了e

32、GFR公式開發(fā)歷程，并就種族系數(shù)的差異性進(jìn)行評(píng)說，希望能幫助讀者正確理解eGFR公式。MDRD公式應(yīng)用發(fā)表于1999年的MDRD原始公式用苦味酸法測(cè)量肌酐，用接近GFR真值的碘（125I）海醇腎臟清除率作為GFR參考值（rGFR）。用于開發(fā)公式的1628例患者平均肌酐2.3mg/dl，rGFR39.8ml/（min1.73m2）。經(jīng)檢測(cè)，該公式在美國人群中的準(zhǔn)確性和精確性優(yōu)于既往eGFR公式，獲得腎臟病預(yù)后生存指南（K/DOQI）的推薦。為提高準(zhǔn)確性，研究者于2006年用更準(zhǔn)確的同位素稀釋質(zhì)譜法（IDMS-Traceable）重新測(cè)量上述1628例患者的血肌酐水平，將重新表達(dá)的MDRD公式用于

33、美國國家健康和營養(yǎng)調(diào)查研究（NHANES）人群，得到eGFR60ml/（min1.73m2）患病率為8.1%。大量研究證實(shí)，上述公式用于GFR正?；蚪咏５娜巳簳r(shí)，所得eGFR將低于rGFR。2009年研究者將樣本量擴(kuò)大到8254例，平均rGFR68ml/（min1.73m2），平均肌酐1.7mg/dl，用IDMS-Traceable法測(cè)定肌酐，再次修訂eGFR公式，得到CKD-EPI公式。該公式用于NHANES人群，得到eGFR60ml/（min1.73m2）的患病率為6.7%。eGFR協(xié)作組對(duì)公式的改良由北京大學(xué)第一醫(yī)院腎內(nèi)科牽頭的我國9個(gè)腎臟病中心組成eGFR協(xié)作組，于2005年對(duì)MD

34、RD原始公式進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)rGFR接近正?；蜉^低時(shí)，MDRD公式會(huì)較rGFR偏低或偏高。2006年，協(xié)作組納入684例CKD患者，通過添加種族系數(shù)對(duì)MDRD原始公式進(jìn)行本土化。研究采用雙血漿法锝（99mTc）-DTPA血漿清除率作為rGFR，患者平均rGFR55ml/（min1.73m2）；用苦味酸法測(cè)定血漿肌酐，通過線性回歸將肌酐標(biāo)準(zhǔn)化為MDRD肌酐，回歸斜率1.3，即將eGFR協(xié)作組肌酐乘以1.3轉(zhuǎn)化為MDRD肌酐，決定系數(shù)為0.999。將標(biāo)準(zhǔn)化肌酐水平（平均2.0mg/dl）、患者性別和年齡代入MDRD原始公式計(jì)算eGFR，以eGFR為自變量、rGFR為因變量進(jìn)行線性回歸，確定種族系數(shù)

35、為1.23。協(xié)作組還公布了與MDRD原始公式形式相同、無種族系數(shù)的eGFR公式：eGFR=175肌酐（mg/dl）-1.234年齡(歲)-0.179性別(男性=1，女性=0.79)。用其得到北京市人群eGFR60ml/（min1.73m2）患病率為1.7%。日本eGFR公式變化過程2007年，日本學(xué)者開發(fā)了適合其民族的eGFR公式。該公式來自248例CKD患者，使用IDMS-Traceable肌酐方法并校準(zhǔn)到MDRD研究方法?；颊邅碜詢山M研究，平均血肌酐水平分別為1.83mg/dl和1.28mg/dl，使用菊粉清除率作為rGFR。同樣通過為MDRD原始公式添加種族系數(shù)的方法，得到的種族系數(shù)為0

36、.88。該公式估算日本人群eGFR60ml/（min1.73m2）患病率為20%。2009年，日本學(xué)者將樣本量擴(kuò)大到413例，對(duì)種族系數(shù)進(jìn)行調(diào)整。肌酐方法和rGFR方法不變，入選患者平均rGFR59ml/（min1.73m2），平均肌酐1.6mg/dl，調(diào)整后的種族系數(shù)為0.80。美、中、日eGFR相關(guān)研究啟示中國和日本為MDRD公式添加的種族系數(shù)分別為1.23和0.80。同為黃種人，為何差異如此之大？當(dāng)建立線性回歸模型時(shí)，我們假設(shè)變量呈線性相關(guān)。如果一個(gè)變量的變化完全可以用另一變量的變化來解釋，則此回歸分析決定系數(shù)為1。通常臨床研究不可能達(dá)到如此精度。在上述種族系數(shù)調(diào)整建模過程中，實(shí)際作了如

37、下假設(shè)：rGFR=MDRD種族系數(shù)+隨機(jī)誤差。據(jù)此，若用MDRD原始公式計(jì)算出的eGFR與rGFR之間無系統(tǒng)差異，則全部為隨機(jī)誤差，種族系數(shù)是1；若兩者間有系統(tǒng)差異，則該差異只能由種族系數(shù)承擔(dān)，盡管理想的種族系數(shù)是“種族差異”（可能包括身體構(gòu)成、飲食差異、甚至基因方面差異），而非其他原因?qū)е碌南到y(tǒng)誤差。在計(jì)算種族系數(shù)時(shí)，以下因素可能導(dǎo)致偏大或偏小。rGFR的系統(tǒng)差異MDRD研究使用碘海醇皮下注射，計(jì)算4個(gè)時(shí)段平均rGFR；我國采用雙血漿法99mTc-DTPA血漿清除率；日本采用持續(xù)靜脈點(diǎn)滴菊粉，計(jì)算3個(gè)時(shí)段菊粉清除率均值。這三種rGFR存在系統(tǒng)差異：CKD-EPI公式計(jì)算的人群平均rGFR為6

38、8ml/（min1.73m2），平均肌酐1.7mg/dl；日本平均rGFR59ml/（min1.73m2），平均肌酐1.6mg/dl。日本的平均肌酐比美國低0.1mg/dl，而相應(yīng)rGFR卻也低9ml/（min1.73m2）。由于日本血肌酐是跟MDRD研究校準(zhǔn)過的，這種rGFR之間的差異只能用rGFR系統(tǒng)偏差來解釋。日本rGFR偏低，當(dāng)然計(jì)算的種族系數(shù)1.0。肌酐方法的系統(tǒng)差異我國和日本的肌酐都校準(zhǔn)到MDRD研究的方法，但需要把我國的肌酐乘以1.3才能轉(zhuǎn)化為MDRD肌酐值。若eGFR協(xié)作組測(cè)定的肌酐為3.0mg/dl，轉(zhuǎn)變?yōu)镸DRD肌酐就成了3.9mg/dl。這個(gè)巨大的系統(tǒng)誤差使人聯(lián)想到是否存

39、在因校準(zhǔn)帶來系統(tǒng)誤差，例如標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)、凍融、測(cè)量過程等。如果用在中國國內(nèi)測(cè)量的肌酐值直接套入加中國系數(shù)的MDRD方程，得到的eGFR高于GFR真值。如果使用加種族系數(shù)的方程，則首先需把肌酐校準(zhǔn)到MDRD研究的方法，可直接將肌酐乘以1.3，再套用加種族系數(shù)的方程。我們不建議這樣做，實(shí)際上直接使用公式eGFR=175肌酐(mg/dl)-1.234年齡(歲)-0.179性別(男性=1，女性=0.79)更方便。由于不同實(shí)驗(yàn)室存在系統(tǒng)誤差，如果用該公式進(jìn)行人群研究，建議首先將肌酐水平校準(zhǔn)到eGFR協(xié)作組方法，否則獲得的eGFR下降患病率差異較大。但如果將公式用于個(gè)體患者和臨床決策，就沒有必要進(jìn)行這種復(fù)雜校

40、準(zhǔn)。rGFR分布的系統(tǒng)差異原始MDRD研究的rGFR平均值為39.8ml/（min1.73m2），據(jù)此NHANES的eGFR降低患病率為8.1%；CKD-EPI研究rGFR均值為68ml/（min1.73m2），據(jù)此NHANES的eGFR降低患病率為6.7%。這說明用于研發(fā)公式的患者rGFR分布對(duì)eGFR公式的最終形式有很大影響。當(dāng)rGFR包含早期CKD或健康者較少時(shí)，研發(fā)的公式不適用于健康人群。MDRD公式和日本修訂公式的rGFR均包含較少的早期CKD患者，日本公式甚至還包含急性腎衰竭患者。因此用于社區(qū)人群調(diào)查時(shí)，eGFR60ml/（min1.73m2）患病率將被高估。rGFR分布差異導(dǎo)致的

41、公式形式差異不但影響對(duì)人群eGFR降低患病率的估計(jì)，也會(huì)導(dǎo)致種族系數(shù)偏差。如何使eGFR更接近真值是個(gè)難題，需要證實(shí)不同的rGFR是否有系統(tǒng)差異，并計(jì)算其大小。另外，在用肌酐估計(jì)eGFR公式時(shí)，是否存在“真正的”種族系數(shù)、種族系數(shù)是多少。EGFR（epithelialgrowthfactorreceptor，表皮生長(zhǎng)因子受體）本身具有酷氨酶激酶活性，一旦與表皮生長(zhǎng)因子（EGF）組合可啟動(dòng)細(xì)胞核內(nèi)的有關(guān)基因，從而促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖。胃癌、乳腺癌、膀胱癌和頭頸部鱗癌的EGFR表達(dá)增高。EGFR是原癌基因c-erbB1的表達(dá)產(chǎn)物，是表皮生長(zhǎng)因子受體（HER）家族成員之一。該家族包括HER1（erbB1

42、，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在細(xì)胞生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。試劑盒：人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱：通用名：人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)水平。用純化的人抗-EGFR抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長(zhǎng)因子受體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液30ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6ml1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（9g/L）0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶1