KMnO4鈣指示劑羅丹明B化學發(fā)光法測定對乙酰氨基酚的含量

1、KMnO4-鈣指示劑-羅丹明B化學發(fā)光法測定對乙酰氨基酚的含量 作者：孫四娟，唐驍爽，唐玉海，熊鳳梅，木尼熱阿布都克熱木，王麗娟【摘要】 目的 建立快速、準確測定對乙酰氨基酚的流動注射化學發(fā)光新方法。方法 酸性條件下，KMnO4可氧化鈣指示劑產(chǎn)生化學發(fā)光，羅丹明B對此發(fā)光有較強的增敏，對乙酰氨基酚的存在抑制體系發(fā)光，基于此結合流動注射技術建立了一種新的測定對乙酰氨基酚含量的化學發(fā)光法。結果 在優(yōu)化的實驗條件下，在5.010-7-1.010-5g/mL范圍內(nèi)，對乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度與化學發(fā)光信號的降低值有較好的線性關系，檢出限(S/N=3)為7.010-8g/mL，對1.010-6g/mL對乙酰

2、氨基酚進行11次平行測定，其相對標準偏差為2.2%。結論 本方法簡便、快速、準確，用于片劑中對乙酰氨基酚含量的測定，得到較滿意的結果。 【關鍵詞】 化學發(fā)光；KMnO4；鈣指示劑；羅丹明B；對乙酰氨基酚ABSTRACT: Objective To establish a rapid and precise continuous flow-injection chemiluminescence for the determination of paracetamol. Methods In acid solution, calcon could be oxidized by KMnO4 prod

3、ucing a weak chemiluminescence, and great chemilumimescence was obtained with the presence of rhodamine B. Then the signal was inhibited with the presence of paracetamol. The inhibitor intensity was linear with the concentration of paracetamol. Coupled with the flow injection technique, a rapid flow

4、 injection chemiluminescence method was developed for the determination of paracetamol. The parameters affecting the chemiluminescence signal were investigated. Results Under the optimized conditions, the linear range was 5.010-7-1.010-5g/mL. The detection limit was 7.010-8g/mL with a signal-to-nois

5、e ratio of 31. The RSD of 11 times parallel assays for 1.010-6g/mL paracetamol was 2.2%. Conclusion The method is simple, rapid and precise, and satisfactory results were obtained with the method applied for the pharmaceutical preparations of paracetamol.KEY WORDS: chemiluminescence; KMnO4-calcon-rh

6、odamine B; paracetamol對乙酰氨基酚(paracetamol)是具有解熱、鎮(zhèn)痛作用的酰胺類藥物，常與其他解熱、鎮(zhèn)痛藥物組成復方制劑。因此，建立一種快速、簡單、靈敏的方法對對乙酰氨基酚進行分析具有重要意義。文獻報道對乙酰氨基酚含量測定的方法較多，包括高效液相色譜法(HPLC)1-4、紫外分光光度法5、電化學法6-9、毛細管電泳法10-12、熒光法13、化學發(fā)光法14和其他光譜法15等。所采用的各種方法都各有其優(yōu)缺點。文獻報道用KMnO4-Ru(bpy)2+3化學發(fā)光法測定對乙酰氨基酚的含量，方法的檢出限為2.010-7g/mL，且使用了較昂貴的Ru(bpy)2+3試劑14。基

7、于我們對KMnO4化學發(fā)光體系的研究16，本研究發(fā)現(xiàn)對乙酰氨基酚的存在可以抑制KMnO4-鈣指示劑-羅丹明B體系化學發(fā)光，據(jù)此建立了新的測定對乙酰氨基酚含量的化學發(fā)光法。1 材料與方法1.1 材料IFFM-E型流動注射化學發(fā)光分析儀(西安瑞邁電子科技有限公司)，IFFS-A型多功能化學發(fā)光檢測器(西安瑞邁電子科技有限公司)。光電倍增管(PMT)高壓為600 V，使用的連接管均為聚四氟乙烯管(PTFE，0.8 mm i.d.)。 KMnO4溶液：精密稱取KMnO4(西安化學試劑廠)0.395 0 g，用適量水溶解并定容于25 mL容量瓶中得1.010-1mol/L KMnO4儲備液；鈣指示劑溶液

8、：精密稱取鈣指示劑(2-萘酚-4-磷酸-偶氮-2羥基-3-萘酸，上海公私合營新中化學廠)2.191 0 g，用適量水溶解并定容于200 mL容量瓶中，得2.510-2mol/L鈣指示劑儲備液；羅丹明B溶液：精密稱取羅丹明B(天津天泰精細化學品有限公司)，用適量水溶解并定容于100 mL的容量瓶中即得到1.010-2mol/L羅丹明B儲備液。 對乙酰氨基酚對照品溶液：準確稱取對乙酰氨基酚對照品(中國藥品及生物制品檢驗所；批號：100018-200408；純度：99.6%)0.100 0 g，用適量水溶解并分別將其定容于100 mL的容量瓶中可得1.010-3g/mL的對乙酰氨基酚的標準儲備液，使

9、用前逐級稀釋至所需濃度。 對乙酰氨基酚片劑(石藥集團歐意藥業(yè)有限公司)，實驗中所用的試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。1.2 方法流動注射化學發(fā)光的流路圖如圖1所示。流路a、b、c、d分別用來輸送酸性羅丹明B、樣品溶液、KMnO4及鈣指示劑溶液。其中樣品溶液通過Y型混合器與 KMnO4混合，此混合溶液通過六通閥與鈣指示劑混合后，再通過一Y型混合器與羅丹明B混合發(fā)生化學發(fā)光反應，所產(chǎn)生的化學發(fā)光信號由光電倍增管放大檢測并由計算機記錄。主泵與副泵的流速都為1.2 mL/min。2 結果2.1 不同氧化劑的選擇實驗考察了KMnO4、KIO4、K2Cr2O7、KBrO3、Ce()、和H2O2等不同氧化劑

10、的作用，研究發(fā)現(xiàn)只有選用KMnO4時得到的發(fā)光信號最穩(wěn)定，且峰形好。2.2 KMnO4濃度的影響考察了1.010-2-1.010-5mol/L不同濃度KMnO4對檢測信號的影響。結果表明，隨著KMnO4濃度的增大發(fā)光信號也增大，但當其濃度大于5.010-3mol/L時，化學發(fā)光信號值不穩(wěn)定，峰形較差。本實驗選擇5.010-3mol/L KMnO4為最佳實驗條件。2.3 酸性介質(zhì)的影響考察了相同濃度的H2SO4、HNO3、H3PO4、和HCl等酸性介質(zhì)對化學發(fā)光信號的影響。觀察到在其他幾種介質(zhì)中都可以產(chǎn)生發(fā)光，雖使用HNO3可以得到較大的發(fā)光信號，但信號不穩(wěn)定。只有選用介質(zhì)H2SO4時所得到的化

11、學發(fā)光信號較大而且穩(wěn)定，所以實驗選取H2SO4作為酸性介質(zhì)。 同時考察了0.005-2 mol/L不同濃度的H2SO4對化學發(fā)光信號的影響，結果表明當H2SO4濃度從0.005-1 mol/L變化時化學發(fā)光信號不斷增大，H2SO4大于1 mol/L時，H2SO4濃度對化學發(fā)光信號的影響較小。本實驗選擇1 mol/L的H2SO4作為反應的最佳條件。2.4 熒光物的選擇及羅丹明B濃度的影響研究了不同熒光增敏劑羅丹明B、羅丹明6、羅丹明123、熒光素等對實驗體系發(fā)光信號的影響，結果表明只有在選用羅丹明B時得到的化學發(fā)光信號最大且較穩(wěn)定，所以實驗以羅丹明B作熒光增敏劑。 考察了110-3-110-5m

12、ol/L不同濃度羅丹明B 對檢測信號的影響。結果表明，隨著羅丹明B濃度增大，發(fā)光信號增大，當其濃度為2.510-4mol/L時，得到最大的化學發(fā)光信號值，之后，增大羅丹明B的濃度對化學發(fā)光信號的影響不顯著。本實驗選擇1.010-4mol/L羅丹明B為最佳實驗條件。2.5 鈣指示劑濃度的影響研究了2.510-5-2.510-3mol/L范圍內(nèi)不同濃度鈣指示劑對化學發(fā)光信號的影響。實驗表明，當鈣指示劑濃度逐漸增大時，發(fā)光信號也不斷增大，當鈣指示劑濃度達到1.010-4mol/L時，發(fā)光信號達到最大值，濃度大于1.010-4mol/L時，化學發(fā)光信號又減小，因而選取1.010-4mol/L作為優(yōu)化的

13、條件進行以下的實驗。2.6 線性范圍及檢出限在優(yōu)化的實驗條件下，對對乙酰氨基酚標準溶液進行逐級稀釋分析，結果表明對乙酰氨基酚在5.010-7-1.010-5g/mL范圍內(nèi)有良好的線性關系，方法的檢出限為7.010-8g/mL，對1.010-6g/mL對乙酰氨基酚進行11次平行測定，得到的RSD (相對標準偏差)為2.2%。線性關系的相關參數(shù)如表1所示。2.7 干擾實驗對1.010-6g/mL對乙酰氨基酚進行測定，當測定的相對誤差為5%時可認為共存物質(zhì)不引起測定的干擾。結果表明，共存物質(zhì)的允許量為：1 000倍的K+、Na+、NO-3、Cl-、Br-，500 倍的檸檬酸鈉、淀粉、硬脂酸鹽、乳糖，

14、50倍的尿素、SO2-4、PO3-4、CO2-3、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe3+，10倍的Al3+、Fe2+、Zn2+對測定不引起干擾。2.8 樣品分析取對乙酰氨基酚(標示量為0.5 g/片)10片，精密稱定、研細、混勻。準確稱取相當于1.0 g對乙酰氨基酚精細粉末，用適量水溶解并定容于100 mL的容量瓶中，得到1.010-3g/mL的樣品溶液，稀釋至工作曲線線性范圍內(nèi)按圖1所示流路進行分析。并進行加樣回收實驗，結果見表2、表3；同時將本法與藥典方法進行了對照。結果表明，本方法用于對乙酰氨基酚片劑含量的測定與藥典方法無顯著差異，但相對于藥典方法，本法快速、操作簡單，儀器運行成本低。表

15、1 對乙酰氨基酚的線性關系方程及相關參數(shù)（略）表2 樣品的回收率測定結果（略）表3 樣品的測定結果（略）3 討論 在酸性條件下，KMnO4可以單獨氧化羅丹明B或鈣指示劑產(chǎn)生化學發(fā)光，但產(chǎn)生的化學發(fā)光信號都較小，當兩者都存在時產(chǎn)生的化學發(fā)光信號較大且重現(xiàn)性好，可能是由于KMnO4對羅丹明B及鈣指示劑的協(xié)同氧化作用。未報道KMnO4在酸性條件下發(fā)光體的存在，因此其發(fā)光體可能為羅丹明B及鈣指示劑的中間體，其可能的發(fā)光機制如下：高錳酸鉀+羅丹明B+鈣指示劑羅丹明B*+鈣指示劑*+其他物質(zhì)鈣指示劑*鈣指示劑+hv 羅丹明B*羅丹明B+hv對乙酰氨基酚+鈣指示劑*+羅丹明B*鈣指示劑+羅丹明B+其他物質(zhì)

16、應用此方法測定片劑中對乙酰氨基酚含量，簡便、快速、準確，結果滿意?！緟⒖嘉墨I】 1Chen XY, Huang J, Zhang K, et al. Sensitive liquid chromatographytandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of paracetamol and guaifenesin in human plasma J. J Chromatogr B, 2005, 817(2):263-269.2Franeta JT, Agbaba D, Eric S, et al. HP

17、LC assay of acetylsalicylic acid, paracetamol, caffeine and phenobarbital in tablets J. IL Farmaco, 2002, 57(9):709-713.3Lotfi M, Frida D. Simultaneous LC determination of paracetamol and related compounds in pharmaceutical formulations using a carbon-based column J. J Pharm Biomed Anal, 2002, 27(6)

18、:851-860.4Celma C, Allue JA, Prunonosa J, et al. Simultaneous determination of paracetamol and chlorpheniramine in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry J. J Chromatogr A, 2007, 870(1-2):77-86.5徐春梅. 紫外分光光度法測定氨咖黃敏膠囊中對乙酰氨基酚含量 J. 延安大學學報(醫(yī)學科學版), 2006, 4(2):6.6Goyal RN, Singh SP.

19、 Voltammetric determination of paracetamol at-modified glassy carbon electrode C60 J. Electrochim Acta, 2006, 51(15):3008-3012.7El-Saharty YS, Metwaly FH, Refaat M, et al. Application of new membrane selective electrodes for the determination of drotaverine hydrochloride in tablets and plasma J. J P

20、harm Biomed Anal, 2006, 41(3):720-724.8Goyal RN, Gupta VK, Oyama M, et al. Diferential pulse voltammetric determination of paracetamol at nanogold modified indium tin oxide electrode J. Electrochem Commun, 2005, 7(8):803-807.9Wang SF, Xie F, Hu RF. Carbon-coated nickel magnetic nanoparticles modifie

21、d electrodes as a sensor for determination of acetaminophen J. Sensors and Actuators B, 2007, 123(1):495-500.10Liu XM, Liu LH, Chen HL, et al. Separation and determination of four active component sin medicinal preparations by flow injection-capillary electrophoresis J. Pharm Biomed Anal, 2007, 43(5):1700-1705.11Emre D, zaltin N. Simultaneous determination of paracetamol, caffeine and propyphenazone in ternary mixtures bymicellar electrokinetic capillary chromatography J. Chromatogr B, 2007, 847(2):126-132.12Nepote AJ, Olivieri AC. Simultaneous spectrofluorometric determination of oxatom