力達(dá)霉素通過誘導(dǎo)DR5的表達(dá)促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)的人非小細(xì)胞肺

1、力達(dá)霉素通過誘導(dǎo)DR5的表達(dá)促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡 楊 杰中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所2010.5（一） 研究背景（二） 研究結(jié)果（三） 結(jié)論研 究 背 景 TRAIL是TNF超家族成員之一，具有型跨膜蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，分子量33-35 kD。TRAIL的細(xì)胞外部分可降解后形成可溶性sTRAIL，無跨膜區(qū)和胞漿區(qū)，具有生物學(xué)活性，且可以在體外重組表達(dá)。研 究 背 景 TRAIL可與存在于腫瘤細(xì)胞表面的死亡受體DR4、DR5結(jié)合并活化形成三聚體，再募集死亡結(jié)構(gòu)域連接蛋白FADD（Fas associated death domain protein），啟動(dòng)凋亡信號(hào)。 FAD

2、D通過死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域募集Pro-caspase8到DR4和DR5的受體復(fù)合物上，并將其剪切活化為活性caspase8。從而激活相關(guān)的下游凋亡通路，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。 TRAIL目前已經(jīng)發(fā)展到期臨床試驗(yàn)階段，它可以選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞,而正常細(xì)胞則通過表達(dá)誘騙受體等方式逃逸其殺傷作用,這種特性使其具有應(yīng)用于腫瘤治療的巨大潛力。研 究 背 景許多腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL存在天然耐藥，而且同一組織來源的腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性也不一致，克服TRAIL的天然耐藥性將能促進(jìn)TRAIL應(yīng)用于臨床。人們對(duì)TRAIL與多種其他抗腫瘤制劑聯(lián)合用藥做了大量的研究，結(jié)果表明這種聯(lián)用是有效的。研

3、究 背 景 力達(dá)霉素（LDM）是從我國(guó)湖北省潛江縣土壤中分離的一株鏈霉菌（Streptomyces globisporus C-1027）代謝產(chǎn)物中篩選得到的一種新的大分子烯二炔類抗腫瘤抗生素，由一個(gè)發(fā)色團(tuán)和一個(gè)輔基蛋白組成。研 究 背 景 力達(dá)霉素主要抑制細(xì)胞DNA合成，引起 DNA單鏈和雙鏈的斷裂。是迄今已報(bào)道的活性最強(qiáng)的大分子蛋白類抗腫瘤抗生素之一。目前在中國(guó)正在進(jìn)行期臨床試驗(yàn)的力達(dá)霉素在體外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)烈的殺傷作用，在體內(nèi)對(duì)一些移植性小鼠腫瘤及移植于裸鼠的人體腫瘤均具有顯著療效。 研 究 背 景 ApoproteinGluThrAlaAlaProAlaPheSerValSerA

4、laProGlyLeuSerAspSerPheThrThrAlaThrSerCysGlyAlaAlaAlaGlySerValValSerValSerGlnGlySerTyrTyrIleAlaGlnGlyAlaAsnGlyThrAlaGlnAspProSerGlyAlaAlaSerPheSerValPheArgLysSerValAlaAlaThrAlaAspCysSerGlyValTyrValProThrGlySerThrThrProGlyGluAsnLeuGlyCysLeuAlaValAlaThrHisGlyAsnSerGlyGlyLeuLeuAspPheGlyCysAlaProValAspC

5、lNH2OHOOOCH3OOCH2ONOOOH3CNCH3OHCH3OHOHH3CChromophore許多研究已經(jīng)表明，損傷DNA的化療藥物能夠調(diào)節(jié)死亡受體的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞對(duì)死亡受體誘導(dǎo)的凋亡更為敏感。更有研究表明，化療藥物是通過誘導(dǎo)DR4和（或）DR5的表達(dá)來促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。LDM作為具有強(qiáng)殺傷作用的抗腫瘤抗生素，它與TRAIL聯(lián)合作用于腫瘤細(xì)胞是否具有協(xié)同作用，以及相關(guān)的機(jī)制又是怎樣很值得我們?nèi)ヌ骄?。?究 背 景（1）測(cè)定不同濃度的TRAIL對(duì)人非小細(xì)胞肺癌H460的增殖抑制作用（2）測(cè)定不同濃度的LDM對(duì)人非小細(xì)胞肺癌H460的增殖抑制作用（3）測(cè)定不同濃度的L

6、DM和TRAIL聯(lián)合對(duì)人非小細(xì)胞肺癌H460的增殖抑制作用1.MTT試驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響LDM和TRAIL聯(lián)合用藥相互作用指數(shù)CDI值 AB兩藥合用時(shí)存活率 CDI = A藥單用時(shí)存活率 B藥單用時(shí)存活率CDI 1 ，兩藥有協(xié)同作用；CDI 0.7，兩藥有顯著的協(xié)同作用。2. Hoechst 33342熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡 3. Annexin V-FITC/ PI染色結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡4. LDM與TRAIL聯(lián)用對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響 5. 不同濃度LDM對(duì)TRAIL受體DR4和DR5表達(dá)的影響6. LDM不同作用時(shí)間對(duì)TRAIL受體DR4和DR5表達(dá)的影響結(jié) 論TRAIL對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞增殖的抑制作用 LDM對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞增殖的抑制作用TRAIL與LDM對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞具有顯著協(xié)同抗腫瘤作用 。在合適的劑量下LDM與 TRAIL聯(lián)合應(yīng)用比單獨(dú)用藥具有更好的療效，能顯著增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用。結(jié) 論LDM與TRAIL聯(lián)合可使PARP的切割和Caspase-3及 Caspase-8的激活顯著增強(qiáng)，從而增強(qiáng)了單藥的誘導(dǎo)凋亡作用。 LDM能