溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果影響

1、溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果影響溶血的定義01溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響02溶血標(biāo)本的處理04標(biāo)本溶血的原因03如何避免溶血05一、溶血的定義溶血是紅細(xì)胞破壞,紅細(xì)胞的一些組分釋放進(jìn)入血清或血漿，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)樣品出現(xiàn)特有的紅色增加。很多因素都可以使紅細(xì)胞破壞，發(fā)生溶血，從而干擾監(jiān)測(cè)，使檢驗(yàn)結(jié)果失去真實(shí)性和準(zhǔn)確性，影響疾病的診斷和治療。溶血是臨床生化檢驗(yàn)中最常見的一種干擾和影響因素。溶血后顯著增高的有AST、ALT、LDH、K+、TBIL、TP、ALB等；溶血后顯著降低的項(xiàng)目有GLU、CR等。（一）溶血對(duì)肝功能測(cè)定的影響1.天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST） 溶血造成AST升高可能是由以下兩個(gè)方面的原因引起(1)人

2、類紅細(xì)胞中AST活性約為血清中的40倍，當(dāng)標(biāo)本溶血時(shí)紅細(xì)胞破裂后釋放AST，勢(shì)必引起血清AST活性的升高從而使溶血標(biāo)本的結(jié)果明顯高于未溶血標(biāo)本。(2)溶血后血清顏色加深，致使測(cè)得的吸光度值增高。2、谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT） 紅細(xì)胞中ALT活性約是血清中715倍。嚴(yán)重溶血（Hb約）時(shí)，可使血清ALT由20U/L增高到（增加約27%）。因此溶血后ALT含量測(cè)定的增高主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)ALT的大量釋放。 可見與AST相比，ALT受溶血影響輕些。3、乳酸脫氫酶（LDH） 紅細(xì)胞和血小板中含有豐富的LDH，紅細(xì)胞中LDH的含量是血清的160200倍，故受溶血影響最大。在測(cè)定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度

3、的血小板破壞，而影響LDH測(cè)定，使其測(cè)定結(jié)果偏高。4、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT） 由于紅細(xì)胞內(nèi)GGT含量很低，輕微溶血對(duì)其測(cè)定結(jié)果影響不大，但重度溶血?jiǎng)t有影響5、總蛋白（TP） 總蛋白的測(cè)定通常選用雙縮脲法，主波長(zhǎng)540nm,而血紅蛋白在555nm有吸收峰，試驗(yàn)表明如果溶血標(biāo)本中Hb L時(shí)無(wú)干擾；而高Hb，會(huì)使結(jié)果偏高，可以做樣品空白來(lái)消除影響。6、總膽紅素（TBIL） 重氮法測(cè)定TBIL，最后生成紅紫色的偶氮膽紅素，主要在波長(zhǎng)為540nm560nm處有光吸收。而Hb在波長(zhǎng)540nm550nm處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比色波長(zhǎng)相近。因此溶血后細(xì)胞破裂時(shí)大量Hb進(jìn)入血清,勢(shì)必造成TBIL測(cè)定值的升

4、高,是TBIL測(cè)定的正向干擾因素。 此外，由于Hb重氮試劑反應(yīng)形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對(duì)重氮法測(cè)定膽紅素同時(shí)存在負(fù)向干擾，使測(cè)定結(jié)果偏低，但該作用較輕微，因此溶血后由于Hb對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾，TBIL的測(cè)定結(jié)果往往偏高。（二）溶血對(duì)血脂測(cè)定的影響1、總膽固醇（TC） 試驗(yàn)表明如果溶血標(biāo)本中HbL無(wú)干擾；而高濃度時(shí)因Hb的固有顏色干擾，會(huì)使結(jié)果偏高。2、甘油三酯（TG） 除去上述如總膽固醇影響因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶過(guò)氧化物酶法和乙酰丙醇顯色法都以測(cè)量甘油為基礎(chǔ)，而紅細(xì)胞膜磷脂可被磷脂酶作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測(cè)定結(jié)果偏高。3、載脂蛋白A(APOA)及載脂蛋(APOB) 免疫透

5、射比濁法使用最廣泛，以抗原抗體為基礎(chǔ)，血紅蛋白可使測(cè)定結(jié)果升高，故標(biāo)本溶血后測(cè)定結(jié)果偏高。（三）溶血對(duì)腎功能測(cè)定的影響1、尿素（UREA) 無(wú)論是二乙酰肟法還是脲酶法，溶血均可導(dǎo)致光譜藍(lán)色部分吸光度值升高對(duì)結(jié)果都有干擾，導(dǎo)致結(jié)果偏高。2、尿酸(UA) 試驗(yàn)表明如果溶血標(biāo)本中Hb1gL會(huì)干擾；是因?yàn)闇y(cè)定波長(zhǎng)546mm時(shí)因Hb固有顏色潛在影響使測(cè)定結(jié)果偏高(比色法) 。 3、肌酐（Cre） 苦味酸法測(cè)定Cre的特異性較差，易受其它還原性物質(zhì)影響，主要是維生素C、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。假肌酐物質(zhì)亦可與苦味酸形成顏色反應(yīng)，導(dǎo)致測(cè)定值發(fā)生偏差。這種假肌酐物質(zhì)紅細(xì)胞中最多，血清中較少，故溶血后紅細(xì)胞中

6、假肌酐物質(zhì)的釋放是造成測(cè)定值發(fā)生偏差的主要原因。 溶血釋放出的物質(zhì)導(dǎo)致Jaffe反應(yīng) 而致測(cè)定結(jié)果的升高。Jaffe反應(yīng)指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應(yīng)，生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物的反應(yīng)。（四）溶血對(duì)電解質(zhì)測(cè)定的影響1、鉀（K+） 細(xì)胞內(nèi)液的主要陽(yáng)離子，約98的鉀存于細(xì)胞內(nèi)，紅細(xì)胞內(nèi)鉀濃度約為105mmol/L，而血清中僅有3.5mmol/L5.4mmol/L，紅細(xì)胞中鉀的含量比血清中高23倍。因此溶血造成血清鉀明顯升高，增高主要來(lái)源于紅細(xì)胞內(nèi)鉀的大量釋放。 有報(bào)道表明血清游離血紅蛋白在時(shí)血清鉀增高14%16%，血清游離血紅蛋白達(dá)時(shí)血清鉀增高可達(dá)41%，所以應(yīng)在樣品采集后1h內(nèi)應(yīng)將紅細(xì)胞與血

7、清分離。并且在分析血清鉀的結(jié)果時(shí)應(yīng)引起高度注意。2、氯（CL-） 血漿中氯約為103mmol/L，紅細(xì)胞中氯約為4954mmol/L。溶血會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的氯離子轉(zhuǎn)移到血清中，從而引起了血清氯離子測(cè)定值的升高3、磷（P） 實(shí)驗(yàn)表明如果溶血標(biāo)本中Hb1g/L影響很小，而在Hb等于L時(shí)影響較大，所以應(yīng)在采血后30min內(nèi)分離血細(xì)胞，否則會(huì)因磷酸酯從RBC中釋放而會(huì)使結(jié)果偏高。 （五）溶血對(duì)葡萄糖測(cè)定的影響葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶法測(cè)定GLU的特異性較強(qiáng)，干擾物較少，但過(guò)氧化氫酶易受到其它物質(zhì)的影響，如維生素C、谷胱苷肽均因能競(jìng)爭(zhēng)H2O2而導(dǎo)致負(fù)偏差，樣品中某些強(qiáng)的酶會(huì)促使GLU降解而導(dǎo)致測(cè)定值明

8、顯下降的。如果在血清或血漿加入NaF、KF作為酵解抑制劑樣品收集后立即去蛋白時(shí)，溶血樣品也可以用。（六）溶血對(duì)心肌酶譜測(cè)定的影響 由于LDH 、HBDH在紅細(xì)胞內(nèi)的含量皆明顯高于胞外，故溶血后結(jié)果都升高，雖然紅細(xì)胞中不含CK ，但含有大量的腺苷酸激酶(AK)，可干擾測(cè)定CK 的偶聯(lián)法的反應(yīng)體系，人為地引起CK結(jié)果的升高。三、標(biāo)本溶血的原因1、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時(shí)血清不易分離，標(biāo)本需經(jīng)多次離心，離心后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。2、標(biāo)本運(yùn)送過(guò)程中導(dǎo)致碰撞，從而使離心后也會(huì)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。3、采血量不足，相對(duì)低滲抗凝導(dǎo)致溶血。4、特殊人群如肥胖者、小孩等血管不易找到或太細(xì)導(dǎo)致抽血時(shí)多次操作或壓迫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)引起溶血現(xiàn)象。5、針頭過(guò)細(xì)或抽血速度過(guò)快，負(fù)壓太大，紅細(xì)胞通過(guò)針尖時(shí)破壞而溶血。四、溶血標(biāo)本的處理1、主動(dòng)與臨床聯(lián)系，結(jié)合臨床首先排除體內(nèi)溶血的可能，若不是體內(nèi)溶血，建議重新采取標(biāo)本，否則應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告單上注明“標(biāo)本溶血”，以提醒臨床醫(yī)生注意.2、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項(xiàng)目的回歸方程，對(duì)易受溶血影響的AST、CK、CK-MB、LDH, K+的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行部分糾正，尤其對(duì)輕中度溶血效果較好，但對(duì)重度溶血標(biāo)本則應(yīng)重新復(fù)查。3、從方法學(xué)上克服或減少溶血的干擾，如通過(guò)設(shè)置樣品空