固相萃取高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定土壤中氟喹諾酮、四環(huán)

1、固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定泥土中氟喹諾酮、四環(huán)【摘要】創(chuàng)立了固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測泥土中氟喹諾酮類、四環(huán)素類和磺胺類18種抗生素的闡發(fā)要領。土樣經(jīng)含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)提取后，以sax-hlb串聯(lián)小柱凈化富集，在hpl/s/s多反響監(jiān)測形式下舉行定性及定量闡發(fā)。添加濃度為200和50g/kg時，泥土中氟喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類的加標接納率別離為67.2%89.0%，62.2%85.4%和55.8%97.4%；其相對尺度缺點為1.1%17.2%。以3倍信噪比估算出氟喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類的檢出限別離為3.48.9g/kg，0.560.91

2、g/kg和0.071.85g/kg。應用此要領檢測6種差異范例泥土樣品，結(jié)果表白，污灌區(qū)泥土中檢出有抗生素，濃度為1.72119.6g/kg?！娟P(guān)鍵詞】氟喹諾酮；四環(huán)素；磺胺；固相萃??；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；泥土keyrdsflurquinlnes；tetraylines；sulfnaides；slidphaseextratin；highperfraneliquidhratgraphy-tandeassspetretry；sil1弁言抗生素普及應用于人類及動物疾病的防治。據(jù)報道，進入動物體內(nèi)的抗生素有相稱一部門隨糞、尿等分泌物排擠1，而糞便、尿液又作為有機胖大量施用于農(nóng)田，造成抗生素在泥土中不

3、竭累積。部門進入污水處置懲罰廠的抗生素并不克不及完全被去除25，它們又隨著終水排放進入情況中。當受污染的水體用于澆灌時，抗生素又從水相轉(zhuǎn)移到泥土相。如今，有關(guān)情況中抗生素的闡發(fā)檢測要領的報道較多68，但同步提娶同時檢測泥土基質(zhì)中多類目的抗生素的高通量快速闡發(fā)要領尚不美滿912。本實行通過優(yōu)化前處置懲罰及檢測條件，創(chuàng)立了同步提娶同時測定泥土中氟喹諾酮、磺胺和四環(huán)素類18種抗生素藥物的高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜闡發(fā)要領，在30in內(nèi)完成了18種抗生素的快速分散檢測。2實行部門2.1儀器與試劑aters2695液相色譜儀、quattrirtapi質(zhì)譜聯(lián)用儀器、asslynx4.0事情站(美國aters公

4、司)；十二孔固相萃取裝置(美國supel公司)；氮吹儀(rganatinassiate)；強陰離子互換柱(sax)sep-pakqp(3l/500g，aters公司)；asishlb固相萃取柱(6l/500g，aters公司)；hypersepretainpep固相萃取柱(6l/500g，ther公司)；hypersep18固相萃取柱(6l/500g，ther公司)；prelut18固相萃取柱(6l/500g，dika公司)。甲醇和乙腈(色譜純，dika公司)；超純水(電阻率18.2)；氧氟沙星(dr.ehrenstrfergbh公司)；諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、四環(huán)素、金霉素、土霉素、磺

5、胺醋酰、磺胺氯噠嗪、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異唑、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺吡啶、磺胺二甲基異唑(siga公司)。別的試劑均為闡發(fā)純。2.2尺度溶液及緩沖液的配制稱取適量四環(huán)素類與磺胺類尺度品，用甲醇配制成1000g/l的尺度儲藏液，稱取適量氟喹諾酮類尺度品，用甲醇配制成100g/l的尺度儲藏液，保存在-20冰箱中。利用時，以甲醇稀釋至所需濃度。配制edta-ilvaine緩沖液ph=4及磷酸鹽緩沖液ph=3。2.3樣品前處置懲罰土樣采自天津市飲用水源地周邊林地020的表層泥土(經(jīng)檢測未含目的物)。天然風干后，過孔徑篩，稱取2g放入錐形瓶中，參加適

6、量混淆尺度溶液后，于室溫下暗處安排24h。取2g土樣，加0.4g乙二胺四乙酸二鈉及v(磷酸鹽緩沖液)v(乙腈)=11(ph=3)的混淆液10l，振蕩20in，超聲提取10in，離心并網(wǎng)絡上層提取液。重復提取3次后，歸并提取液并稀釋至400l。spe固相萃取柱(sax-hlb串聯(lián))預先接納6l甲醇、6l超純水、6l緩沖液依次淋洗活化。開啟真空泵，操縱流速約為35l/in將提取液上柱。過柱完成后，用6l超純水沖洗串聯(lián)柱，繼承抽真空10in以撤除柱中殘留水分，拆下sax小柱，將hlb柱于n2庇護下枯燥10in。末了，以6l甲醇淋洗，網(wǎng)絡洗脫液并在室溫下用n2吹掃至近干，用甲醇定容至1l，待測。2.4

7、色譜-質(zhì)譜條件krasil18色譜柱(2504.6，5)；活動相為乙腈(a)和0.1%甲酸溶液(b)，柱溫25，流速0.4l/in；梯度洗脫步伐：010in，15%30%a；1016in，30%50%a；1622in，50%55%a；2229in，55%a；2930in，55%15%a；3032in，15%a。進樣量20l。電噴霧離子源；正離子掃描；霧化氣、脫溶劑氣、錐孔氣為氮氣，碰撞氣為氬氣；源溫度和脫溶劑氣溫度別離為90和350；脫溶劑流速和錐孔氣流速別離為500和70l/h；毛細管電壓為4kv。檢測方法為r形式。錐孔電壓、碰撞能及18種抗生素別的質(zhì)譜條件見表1。3結(jié)果與討論3.1質(zhì)譜條件

8、的優(yōu)化質(zhì)譜的錐孔電壓、碰撞能對18種抗生素裂解有緊張影響。接納活動注射闡發(fā)法(fia)對目的物單獨進樣，毛細管電壓恒定4kv，調(diào)解錐孔電壓，將18種抗生素尺度溶液舉行全掃描得到最大相應值的母離子，在s/s形式下，調(diào)解碰撞能尋到該母離子對應的子離子，以r形式舉行闡發(fā)表1。表1多反響監(jiān)測形式下18種抗生素的質(zhì)譜闡發(fā)參數(shù)略table1sparaetersfr18antibitisanalysisinrtransitin3.2固相萃取柱的選擇與串聯(lián)泥土中大量天然有機質(zhì)對hpl檢測影響很大。在反相萃取柱前，串聯(lián)sax柱去除酸性提取液中以陰離子情勢存在的腐殖酸類有機質(zhì)。本實行比力了4種反相萃取柱prelu

9、t18，hypersep18，hyperseppep，asishlb對18種抗生素的提取服從。取1g/l混淆尺度溶液400l，以400l超純水稀釋，作為待測物。由圖1可見，prelut18柱能富集提取出氟喹諾酮類物質(zhì)，但對磺胺類物質(zhì)的接納率極低；hypersep18對磺胺類物質(zhì)的接納率高于prelut18，卻不克不及富集提取出氟喹諾酮類物質(zhì)。同是硅膠鍵合18柱，差異消費商的柱子的接納率存在差異。hyperseppep的吸附劑是一種苯乙烯二乙烯基聚合物，顛末鍵合碳酰胺使它對極性和非極性闡發(fā)物均有保存，落服了傳統(tǒng)的硅膠柱輕易干柱的缺點。asishlb的吸附劑是由親脂性二乙烯苯和親水性n-乙烯基吡咯

10、烷酮兩種單體按必然比例聚合成的大孔共聚物，具有較高的吸附容量。與硅膠比擬，asis吸附劑的外貌積增大23倍，容量因子進步?？傮w上，以聚合物為填料的柱子接納率高于硅膠鍵合18柱。對付氟喹諾酮類和四環(huán)素類物質(zhì)asishlb接納率顯著好于hyperseppep柱，同時提取三類抗生素時asishlb的結(jié)果更好。圖14種固相萃取柱的提取服從略fig.1extratineffiienyf4kindsfspelunsnantibitisprelut18；hypersep18；hyperseppep；asishlb.3.3樣品提取液的選擇綜合思量所檢測的18種抗生素的pka10，參考美國epa保舉要領及相干文

11、獻1317，以edta-ilvaine(ph=4)、含50%甲醇的edta-ilvaine(ph=4)、參加na2edta的含2%甲酸-乙腈(ph=2.5)、參加na2edta的含50%乙腈的磷酸緩沖液(ph=3)為提取液，提取200g/kg的加標土樣，含甲醇、乙腈的提取液用超純水稀釋至400l后過柱。如圖2所示，以edta-ilvaine(ph=4)提取時，除土霉素外，各物質(zhì)接納率都小于50%。提取液中參加有機溶劑后提取服從顯著改進，利用含50%甲醇的edta-ilvaine(ph=4)溶液提取時，磺胺類和四環(huán)素類的接納率大于50%，多數(shù)在70%90%之間，但是對氟喹諾酮類的提取服從非常低。

12、含2%甲酸的乙腈溶液對三類抗生素的提取接納率在060%之間，且不克不及有用提取氟喹諾酮類物質(zhì)。含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)溶液可以實現(xiàn)3類抗生素物質(zhì)的同時提取，18種抗生素中接納率在56%89%之間。圖2差異提取液對泥土中抗生素的提取結(jié)果略fig.2effiienyfdifferentextratinsnantibitisinsiledta-ilvaine(ph=4)；含甲醇的edta-ilvaine(ilvainebufferitheh，11，v/v，ph=4)；含甲酸的乙腈(friaidinan，150，v/v，ph=2.5)；50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ptassiuphspha

13、tebufferithithan，11，v/v，ph=3)。3.4稀釋條件對接納率的影響提取液中含有大量極性有機溶劑，直接舉行spe凈化，目的抗生素大概會被有機溶劑帶出而無法保存在spe柱上，可通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或用相對弱極性溶劑稀釋后低落有機溶劑的濃度進步接納率。文獻17指出，含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)用量為15l時，稀釋至50和100l目的物的流失仍舊很大。本實行將30l含50%乙腈的磷酸鹽緩沖液(ph=3)的泥土提取液用超純水稀釋至400l后過spe柱，由圖3可見，稀釋后的接納率顯著進步。圖3稀釋條件對泥土中抗生素提取影響略fig.3effiienyfdilutinnantibit

14、isinsil稀釋(diluted)；不稀釋(undiluted).3.5線性范疇和檢出限空缺土樣根據(jù)2.3節(jié)要領處置懲罰后，取適量混淆尺度溶液定容至1l，別離配制成相稱于原空缺土樣中含5，50，100，200，500和1000g/kg目的物質(zhì)的系列混淆尺度溶液，18種抗生素濃度和峰面積的線性干系很好，相干系數(shù)r0.99。3.6要領的接納率接納飲用水源地周邊不含目的抗生素的土樣添加混淆尺度溶液，在添加程度為200和50g/kg時舉行接納率實行，結(jié)果表白，兩個濃度下的均勻接納率(n=3)為55.8%97.4%表2。表2泥土中18種抗生素的檢出限及接納率(n=3)略table2detetinlii

15、tsandrevery(n=3)f18antibitisinsil3.7泥土情況樣品的測定實行結(jié)果表白，本要領敏捷度高、檢出限低且不變性好，可以應用于泥土中抗生素含量的闡發(fā)檢測?！緟⒖嘉墨I】3xei-hai(徐維海)，zgan(張干)，zshi-hun(鄒世春)，lxiang-dng(李向東)，lping(李平)，hzha-hui(胡朝暉)，ljun(李軍).envirnentalsiene(情況科學)，2022，28(8)：177917834karthikeyankg，eyert.sienefthettalenvirnent，2022，361(1-)：1962075battal，brueib，agads.envirnentalpllutin，2022，142：2953026