TCT沉降染色實驗記錄電子教案

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。TCT沉降染色實驗記錄-實驗記錄實驗目的熟練掌握TCT機器及手工操作過程。實驗器材、試劑器材：全自動TCT制片儀、震蕩器、旋渦混合器、低速水平式離心機、移液搶、15mL離心管、15mL過濾器、3mL吸管、真空泵、試管架、載玻片、蓋玻片、玻片架、染色槽、記號筆、2B鉛筆、量筒、試劑瓶、恒溫干燥箱、滴定管、TCT專用吸嘴、定時器、吸水紙、光學顯微鏡試劑：梯度離心液、細胞固定保存液、100緩沖液、異丙醇、無水乙醇、二甲苯、84消毒液、純水（蒸餾水）、蘇木素、EA/OG、95%乙醇、75%乙醇配制試劑緩沖液：1

2、00緩沖液用純水1:99稀釋。沖洗液：異丙醇和無水乙醇1:1混合廢液針清洗液：84和純化水1:20混合四、實驗步驟將裝有樣本的細胞固定保存液瓶編號如下：實驗編號12345樣本號4025926073647293736472714025926473647295取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL在離心管上用記號筆寫編號如下：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012.12.25實驗編號12345取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL在筆記本上記錄如下：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012

3、.12.25實驗編號12345樣本號4025926073647293736472714025926473647295操作類型上機上機上機上機手工取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL將標本瓶放在震蕩器上振蕩30秒，使其充分混勻。在離心管中加入4mL梯度離心液，用移液槍通過過濾器，加入對應體積的細胞保存液。取下過濾器丟掉。將離心管放入離心機中，以轉(zhuǎn)速1080轉(zhuǎn)2分鐘，完成后取下離心管，用真空泵洗掉上面的液體，使離心管中剩下4mL液體，再放入離心機中，以轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)十分鐘。取出離心管，倒掉上清液。（1）上機的離心管，直接把底部接觸漩渦混合器，混合30s。（此次未進行操作，此為失誤，導致細胞重疊

4、）（2）手工的5號離心管，在離心管中加入500800L緩沖液。在混合器上震蕩30秒，使底部的細胞呈懸浮狀態(tài)（此次錯加入沖洗液，為失誤，導致染色失?。┰诓Ｆ嫌勉U筆寫上：日期2012.12.252012.12.252012.12.252012.12.252012.12.25實驗編號12345取樣本體積1mL2mL3mL2mL4mL（1）上機操作：放入標本離心管、吸嘴、玻片、染色槽、把TCT儀左側(cè)的H2O（緩沖液）、ALC（沖洗液）、HEMA（蘇木素）、EA/OG管道插入對應的試劑瓶中。（2）手工操作：在離心管取出300500L細胞保存液倒入已放好的染色槽中，沉降十分鐘（1）上機的離心管：開機，開

5、電源機器自檢，進入?yún)?shù)設置界面左右鍵選擇標本數(shù)4按設置建選程序按充管鍵充管完成充管后，按設置鍵返回按運行鍵，自動運行。（2）手工的離心管：沉降完后，倒掉上清液。加入沖洗液兩次（第一次直接倒掉第二次過35s倒掉可1次時間放長些再倒掉）。加蘇木素2分鐘，2次緩沖液，1次沖洗液，沖盡殘液。加EA/OG，2分鐘，兩次沖洗。上機的離心管運行完，按設置返回。然后，上機和手工都是取下染色槽，拿出玻片，用玻片架將玻片放入2缸95%酒精、2缸無水乙醇中，進行震洗。干封：用恒溫干燥箱、烘箱、或吹風機用中性樹膠、蓋玻片封片。濕封：過二甲苯顯微鏡觀察（清晰度、染色深淺、有無雜質(zhì)、粘液，胞漿、胞核區(qū)分清楚，細胞數(shù)量，主要觀察中層細胞,中層細胞是藍色,上層細胞是紅色,腫瘤細胞的胞核比正常細胞的大）。清洗機器：（1）按排管鍵排管（2）按照顯示屏提示，將管道從蘇木素（HEMA）、EA/OG中取出放入對應的清洗液：純水和75%乙醇中，按運行。完成后，取