CD-1700血常規(guī)操作規(guī)程

1、長海醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科Department of Diagnosis Changhai Hospital程序文件文件編號：MJZ01第 PAGE 頁共 NUMPAGES 11 頁第 2 版第2次修改主題：血常規(guī)頒布日期：2003年06月01日主任：沈 茜質(zhì)控負(fù)責(zé)人：馬金龍血常規(guī)檢驗(yàn)一、【檢驗(yàn)方法】： CD1700 血細(xì)胞分析儀二、【原理及意義】：（一）Hb1、原理：紅細(xì)胞被溶血素溶解，釋放出血紅蛋白，血紅蛋白被SLS的親水性的烷基部分所改變，由亞鐵血紅蛋白形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白形態(tài)，形成SLS-Hb的正鐵血紅蛋白化合物，在555nm處有吸收峰，通過儀器內(nèi)部的比色系統(tǒng)比色，可以測定Hb的濃度。該方法

2、利用了氧化血紅蛋白法和氰化血紅蛋白法的優(yōu)點(diǎn)。一方面，SLS-Hb法具有和氧化血紅蛋白法一樣的檢測快速、無毒性成分的優(yōu)點(diǎn)；另一方面也具有氰化血紅蛋白法檢測結(jié)果精確、重復(fù)性好的特點(diǎn)。（二）RBC、MCV、MCH、MCHC、HCT、RDW-CV、RDW-SD1、原理：血液被稀釋液稀釋后，細(xì)胞一個一個通過狹縫，狹縫內(nèi)外是有直流電的電解質(zhì)環(huán)境，當(dāng)細(xì)胞通過時會引起瞬時的電位變化，形成電脈沖，電脈沖的個數(shù)反應(yīng)細(xì)胞的個數(shù)，大小反應(yīng)細(xì)胞的大小。細(xì)胞體積在一定范圍內(nèi)劃為紅細(xì)胞；在某個范圍劃為血小板。同時通過儀器內(nèi)部的數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)換算出MCV、MCH、MCHC、Hct 和統(tǒng)計學(xué)處理得出RDW-CV、RDW-SD分析

3、數(shù)據(jù)。 （三）WBC計數(shù)、及其分類1、原理（電阻檢測法）：儀器吸取樣本，用一定量的試劑和稀釋液稀釋后，讓白細(xì)胞一個個依次通過計數(shù)池的微孔，利用細(xì)胞通過微孔時瞬間的電阻變化產(chǎn)生脈沖電流而計數(shù)。脈沖信號經(jīng)放大、甄別后，微機(jī)處理數(shù)據(jù)得到其體積分布直方圖。淋巴細(xì)胞群為：35-90fl中間細(xì)胞群為：90-160fl粒細(xì)胞 群 為：160-300fl三、【試劑品牌】：稀釋液：Sandem 氯化鈉6.38g/L 硼酸1.0g/L四硼酸鈉0.2g/LEDTA-2K 0.2g/LHb溶血素：SULFOLYSER (SLS-200A) 月桂洗硫酸鈉 1.7g/L清洗液：SANDEM CELLCLEANSTACCL

4、EANER-SYS 次氯酸鹽 5%4、抗凝劑： KEDTA2HO（1.5-2.2mg每毫升血液）四、【儀器】：CD1700 血細(xì)胞分析儀五、【操作步驟】：開機(jī)：插上電源，打開CD1700 血細(xì)胞分析儀電源開關(guān)儀器進(jìn)入自動檢測系統(tǒng)，自動檢測各系統(tǒng)參數(shù)，同時測定本底參數(shù)。當(dāng)儀器顯示窗口出現(xiàn)“Run Ready，說明儀器處于待測標(biāo)本狀態(tài)，進(jìn)行血液質(zhì)控品測試,通過后可以正常測定血常規(guī)標(biāo)本。打開中文報告處理電腦和打印機(jī)，進(jìn)行中文處理系統(tǒng),登錄.關(guān)機(jī)：儀器使用完畢，依次按”main”,”special protocol”more”進(jìn)入”start clean”將清洗液置于針下,按鍵開始吸樣,約十分分后清洗

5、完畢,再按“Shut Down”鍵。自動血細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)入自動沖洗狀態(tài)，當(dāng)自動血細(xì)胞儀顯示窗口出現(xiàn)“stand by”時可以安全關(guān)機(jī)，關(guān)閉儀器開關(guān)，關(guān)閉電腦。血細(xì)胞分析儀的保養(yǎng)（每周一次）按“main”鍵,選擇drain bath項，按鍵進(jìn)入,然后再按一次充滿,。選擇“start clean”項，按鍵。,在 “RBC”和“WBC”計數(shù)池中各加1毫升專用清潔液，浸泡十分鐘按“main”鍵,選擇drain bath項,再按一次,再按”clear orifice”,儀器自動清潔保養(yǎng)。儀器表面需經(jīng)常擦洗，保持儀器整體清潔。 每日質(zhì)控在每天樣本檢測前，取專用血液質(zhì)控品做質(zhì)控，并做好登記。若檢測結(jié)果均在范圍

6、內(nèi)，則可進(jìn)行樣本檢測，若有失控出現(xiàn)，則需重新定標(biāo)。六、【參考范圍】：(1)白細(xì)胞(WBC)計數(shù)： 成人(4 10)109/L 兒童(5 -12) 109/L 新生兒(15-20) 109/L (2)白細(xì)胞分類(成人)：中性粒細(xì)胞 50-70% 淋巴細(xì)胞 20-40% 嗜酸性粒細(xì)胞 0.5-5% 嗜堿性粒細(xì)胞 0-1% 單核細(xì)胞 3-8%2 紅細(xì)胞(RBC)：男(4-5.5) 1012/L 女(3.5-5) 1012/L 新生兒(6-7) 1012/L血紅蛋白(HGB)：男120-160g/L女110-150g/L新生兒170-200g/L4血小板(PLT)：(100-300) 109/L5血球

7、壓積(HCT)：男0.42-0.49 L/L女0.37-0.43 L/L6平均紅細(xì)胞體積(MCV)：82-95flMCV（fl）=每升血液中血細(xì)胞比容（L/L）1015每升血液中紅細(xì)胞總數(shù)7平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)：27-31pgMCH （g/L）=每升血液中血紅蛋白濃度（g/L）每升血液中紅細(xì)胞總數(shù)平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)：320-360g/L MCHC （g/L）=每升血液中血紅蛋白濃度（g/L）升血液中血細(xì)胞比容（L/L） 9RDW-CV、RDW-SD： RDW-CV：11.6%-14.0%；RDW-SD：。10PDW（15.05-18.1）%MPV(9.4-12.5)

8、fl； P-LCR(13-43)。 七、【臨床意義】：1白細(xì)胞（1） 白細(xì)胞計數(shù)生理性增加 新生兒、運(yùn)動、飯后、冷水浴后、疼痛、月經(jīng)期、受寒、妊娠、分娩、陣發(fā)性心動過速、陽光或紫外光照射、抽搐、惡心、嘔吐、麻醉等。病理性增加 類白血病、白血病、急性化膿性細(xì)菌感染、急性溶血、急性失血、單核細(xì)胞增多癥、淋巴細(xì)胞增多癥、真性紅細(xì)胞增多癥、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、組織壞死、手術(shù)后、腫瘤轉(zhuǎn)移、藥物中毒、代謝性酸中毒、過敏等。減少 傷寒、副傷寒、斑疹傷寒、兔熱病、布魯桿菌熱、流感、麻疹、風(fēng)疹、革登熱、傳染性肝炎（亦可增多）、瘧疾、過敏性休克、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、粟粒性結(jié)核、敗血癥、重癥細(xì)菌感染、惡液質(zhì)、放

9、射治療、腫瘤化療。惡性貧血、非白細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血、脾功能亢進(jìn)、戈謝病、Felty綜合癥、Chediak-Higashi綜合癥、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥等。（2） 白細(xì)胞分類計數(shù)：見下表各種白細(xì)胞增多、減少的臨床意義細(xì)胞類別增多減少中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞類白血病、白血病、化膿性細(xì)胞感染、溶血性貧血、急性出血、急性溶血、手術(shù)后、惡性腫瘤、組織損傷、皮膚病、真性紅細(xì)胞增多癥、脾切除術(shù)后。參見嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)慢粒、何杰金病、癌轉(zhuǎn)移、鉛和鉍中毒等。百日咳、傳染性單核細(xì)胞增多癥、淋巴細(xì)胞性白血病、傳染淋巴細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、弓形蟲病單核細(xì)胞性白血病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡

10、、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、活動性結(jié)核、急性感染恢復(fù)期、原蟲感染傷寒、副傷寒、流感、麻疹、再生障礙性貧血、黑熱病、病毒感染、原蟲感染、病毒性肝炎、脾功能亢進(jìn)、貧血、原發(fā)性中性粒細(xì)胞減少癥、肝硬化急性感染、粟粒性結(jié)核、晚期腫瘤、艾滋病、伴T淋巴細(xì)胞減少的免性缺陷使用皮質(zhì)類固醇激素、再生障礙性 貧血、多毛細(xì)胞白血病.2 紅細(xì)胞(RBC)：生理性減少 見于妊娠中后期、6個月至2歲的嬰兒等。病理性減少 造血原料不足、造血功能障礙、紅細(xì)胞破壞過多或失血所引起的各種貧血。相對性增多 主要因血漿容量減少所致，見于脫水、嘔吐、腹瀉、多尿、多汗、大面積燒傷、吸煙、高血壓、肥胖等。代償性增多 主要見于缺氧、新生兒、高

11、原環(huán)境、CO中毒、嚴(yán)重肺氣腫、肺源性心臟病、先天性心臟病、心衰等。絕對性增多 克隆性真性紅細(xì)胞增多；非隆性紅細(xì)胞增多，與促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生過多有關(guān)，見于腎癌、肝細(xì)胞癌、雄激素分泌細(xì)胞腫瘤、腎囊腫、腎盂積水、腎移植、小腦血管瘤、子宮肌瘤。3、血紅蛋白(Hb)：生理性增加：新生兒、高原居住者。病理性增加：真性紅細(xì)胞增多癥、代償性紅細(xì)胞增多癥（如先天性青紫性心臟病、慢性肺性疾病、脫水）。減少：各種貧血、白血病、產(chǎn)后、手術(shù)后、大量失血。紅細(xì)胞比積(HCT) ：與紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定的意義類同。血小板(PLT)：（1） 生理性 正常人血小板在一天內(nèi)可有6%-10%變化；表現(xiàn)為早晨低，午后較高；春季低

12、，冬季略高；平原較低，高原較高；靜脈血比毛細(xì)血管血高10%；月經(jīng)前低，后升高；妊娠中晚期升高，分娩后減低；運(yùn)動后升高，休息后恢復(fù)。（2） 病理性 減少：除創(chuàng)傷之外，血小板減少是引起出血的常見原因。常見疾病有：、血小板生成障礙，如急性白血病、再生障礙性貧血；、血小板破壞過多，如ITP、脾功能亢進(jìn)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡；、血小板消耗過多，如DIC、血栓性血小板減少性紫癜。增多（血小板大于400109/L）：、骨髓增生性疾?。郝粤＜?xì)胞白血病，真性紅細(xì)胞增多癥；、原發(fā)性血小板增多癥；、急性大出血，急性溶血，急性化膿性感染；、脾切除手術(shù)后。6MCV、MCH、MCHC 主要用于貧血的形態(tài)學(xué)分類，見下表:貧血的

13、形態(tài)學(xué)分類MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）大紅細(xì)胞性貧血正紅細(xì)胞性貧血單純小細(xì)胞性貧血小細(xì)胞低色素性貧血100-16080-10072-8050-8035-5027-3521-2612-30310-370310-370300-370240-3007RDW-CV、RDW-SD：(1)用于缺鐵性貧血的診斷和療效觀察，缺鐵性貧血時RDW增大，經(jīng)治療后可恢復(fù)正常。(2)用于小細(xì)胞低色素性貧血的鑒別，缺鐵性貧血時RDW增大，而輕型珠蛋白生 成障礙性貧血時RDW正常。(3)RDW與MCV結(jié)合可將貧血分為6種。小細(xì)胞均一性：MCV下降，RDW正常，如輕型珠蛋白生成障礙性貧血。 小細(xì)胞不均一性：

14、MCV下降，RDW增大，如缺鐵性貧血。正常細(xì)胞均一性：MCV、RDW均正常，如某些慢性疾病。 正常細(xì)胞不均一性：MCV正常，RDW增大，如早期缺鐵性貧血。大細(xì)胞均一性：MCV增大，RDW正常，如再生障礙性貧血。大細(xì)胞不均一性：MCV、RDW均增大，如巨幼細(xì)胞性貧血。8MPV、PDW、P-LCR：MPV 其臨床意義要結(jié)合PLT的變化才有價值。、鑒別血小板減少的原因：當(dāng)骨髓造血功能損傷致血小板減少時，MPV減少；當(dāng)血小板在周圍血液中破壞增多時，導(dǎo)致血小板減少，MPV增大；血小板分布異常致血小板減少時，MPC正常。、MPV增大可作為骨髓造血功能恢復(fù)的較早期指征：骨髓造血功能衰竭時，MPV與PLT同時

15、持續(xù)下降；造血功能抑制越嚴(yán)重，MPV越??；當(dāng)造血功能恢復(fù)時，MPV增大常先于PLT升高。、其它：MPV增大見于骨髓纖維化、ITP、血栓性疾病及血栓前狀態(tài)、脾切除、慢粒、巨大血小板綜合癥、鐮刀細(xì)胞性貧血；MPV減小見于脾亢、化療后、AA、巨幼細(xì)胞性貧血等。PDW 是反映血小板體積大小的異質(zhì)性參數(shù)，增大見于急淋化療后、巨幼細(xì)胞性貧血、脾切除、慢粒、巨大血小板綜合癥、血栓性疾病等；可用于鑒別原發(fā)性血小板增多癥和反應(yīng)性血小板增多癥，前者PDW增加，后者PDW正常。P-LCR 代表血小板計數(shù)中體積 12fL的血小板的比值或數(shù)量，有助于識別堆集血小板、大血小板和細(xì)胞碎片，并可監(jiān)測骨髓的造血功能。八、【標(biāo)本

16、采集】：隨機(jī)采取病人靜脈血，用40g/L EDTA-K2 抗凝(50ul抗凝1ml血，相當(dāng)于2mgEDTAK2/1ml血)。九、【注意事項】：1、血細(xì)胞計數(shù)應(yīng)用EDTA-K2為抗凝劑，用量為EDTA-K2*2H2O1.52.0mg可抗凝1ml血，不能用肝素或枸櫞酸鈉等抗凝劑。2、采集后在室溫中貯存不應(yīng)超出6h；如需制用血涂片應(yīng)在2h內(nèi)完成。3、測定前抗凝血應(yīng)充混勻，任何小凝塊或血小板聚集均會影響血細(xì)胞計數(shù)。4、注意病理因素對血液分析儀使用的影響，特別是各系統(tǒng)的報警提示。如是否有大血小板對血小板計數(shù)的影響；有無有核紅細(xì)胞對白細(xì)胞計數(shù)的影響等等。5、如有冷凝集現(xiàn)象，將血置37水浴箱10min后立即

17、測試。十、【質(zhì)量控制】： 每日工作開始應(yīng)先做全血質(zhì)控品，。出現(xiàn)失控，應(yīng)校正后并重做質(zhì)控，直至符合質(zhì)控要求。按要求做好儀器校正和儀器對比工作。做好質(zhì)控、失控和校正登記。十一、【報告復(fù)查】：對以下情況的樣本進(jìn)行復(fù)查(儀器及手工)；(1) 白細(xì)胞低于3.0109/L； (2) 紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白明顯不符；(3) 血小板低于50109/L；(4) 白細(xì)胞分類時，中間細(xì)胞15%，以及機(jī)器未能分出的樣本需手工分類。白細(xì)胞計數(shù):原理：血液經(jīng)稀酸溶液稀釋后，紅細(xì)胞被破壞，放入血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)，置顯微鏡下計數(shù)，求得每微升中的白細(xì)胞數(shù)。試劑：冰醋酸 10ml蒸餾水 加至500ml10g/L美藍(lán) 3滴器材：20微升吸

18、管，血細(xì)胞計數(shù)板，顯微鏡。操作：加計數(shù)試劑0.38ml于小試管內(nèi)，取血20微升吹入試劑，混勻。靜置1-2分鐘。低倍計數(shù)，計數(shù)4角得4大方格，計數(shù)總數(shù)乘以50即為白細(xì)胞/微升。血小板計數(shù):原理： 血液用血小板計數(shù)試劑稀釋后，在顯微鏡下計數(shù)。試劑草酸銨稀釋液 草酸銨1.0g，乙二胺四乙酸二鈉0.014g,40%甲醛溶液0.1ml加水至100ml，加亞甲藍(lán)少許，過濾后置冰箱備用。許汝和稀釋液 尿素9g，乙二胺四乙酸二鈉0.5g，巴比妥鈉0.3g，加蒸餾水水至100ml，過濾后置冰箱備用。Barr稀釋液 白皂素0.25g，枸櫞酸鈉3.5g，煌焦油藍(lán)0.1g，40%甲醛溶液1.0ml，加水至100ml，過濾后置冰箱備用。操作選上述任一試劑（本科室用2液），每管加0.38ml，加入全血20微升，充分混勻。用改良牛鮑計數(shù)板，將血液稀釋液充池后，置