8011戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程03

1、*制藥有限公司第2頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程文件編碼戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程頒發(fā)部門S0P-ZL-8011-03GMP辦公室復印：1份修訂者審核者質(zhì)量部審核修訂日期審核日期審核日期批準者分發(fā)部門質(zhì)量部生效日期批準日期目的：建立戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程，確保儀器使用的規(guī)范化、標準化。范圍：適用于戴安U3000高效液相色譜儀的操作。責任：QC主管、儀器操作員對本規(guī)程的實施負責。內(nèi)容：內(nèi)容：1、流動相的配制首先配制常用流動相以及泵后密封圈清洗液小瓶（5%-10%甲醇溶液）如下圖（圖1）。配制過程中有機相必

2、須用有機系0.45pm的濾膜過濾,水相或緩沖鹽用水系0.45pm的濾膜過濾。然后超聲20分鐘，超聲時應避免超聲溫度過高以使有機相揮發(fā)。一般流動相可以保存3天,含緩沖鹽的流動相必須臨用新配,注意水相、5%甲醇或10%甲醇溶液（清洗液）2、開機、儀器方法設置。2.1穩(wěn)壓電源打開JJW-3KVA穩(wěn)壓器“ON”位置，等2-3分鐘穩(wěn)定后，按下ON-LINE1KVA蓄電池電源前面板的“ON”等2-3分鐘。2.2打開泵(Pump)、自動進樣器(Sampler)及所需檢測器后面板電源線下方的電源開關(guān)，儀器將開機自動進行自檢。各部分自檢成功后，方可進行以下各部操作。打開電腦，等5-7分鐘，電腦穩(wěn)定。打開軟件，連

3、接儀器。打開變色龍軟件控制面板雙擊電腦桌面的“變色龍Chromeleon7”圖標。出現(xiàn)如下對話框點擊“確定”后出現(xiàn)進樣器界面(圖2)：3*StAChromeleon用戶容和密碼Chromeleon7ChromeleonConsole角色(R)：三級操作權(quán)限取消幫助IC圖2)更改儀器0返回Q創(chuàng)薙(C)文件(F)編輯(E)視圖(V)工具(T)幫助(H)主頁（H）.FumpModiiileSampler複快狀態(tài)Disconnected|傳泵繼續(xù)E馬達5沖洗：OffUVji_nnnn諦選VO啟動eWorkflow智能啟動/關(guān)機臺為U300O-01,根據(jù)需要選擇操作的儀iUV.Connected=Dis

4、connectedTHERMO-PC_U3000S_U3000_01召圖3）在主頁項中連接“泵”，“Sampler(自動進樣器)”，及所需檢測器，UV是紫外檢測器,FLD是熒光檢測器，A2D是蒸發(fā)光和示差折光檢測器(圖4)。*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程0啟動巳Wcrkflow倉智能宕動/關(guān)機+超釋放控制國監(jiān)視基裁+祎材目竝主頁QD1FlJJTlpA2DSamplerUVFLD審計啟動g)從列U3000進樣：楊健序列：采流速On)D.30ml/min23S3psi%A:2D.jC:0.0%

5、D:0.0進樣亙樣品環(huán):Inject-2QQ-200-0-40Q-3210站:hI1-01-琶360nm|450nm.tT模式:StandardVWEJ-3100啟怏nm235曰期時間保f42017/12/242017/12/242017/12/242017/12/2415:14:42+08:0015:13:46+08:0015:12:40+08:0015:12:35+08:0062017/12/2415:10:52+08:0072017/12/2415:10:51+08:002017/12/2415:10:52+08:00HllHJ0啟動eWorkflow+每智能啟動/關(guān)機+輕釋故控I凹監(jiān)視

6、基戔+總祎材*|田目竝成=+斗致畀+主頁迪FwnpA2DSamplerUVFLD審計啟動（1）從列述流速伍力壓力1000-1psiD.6DDml/min：2fl61psi50D命令D-5QQ-(圖5)-1000I111I111I0.Q1.02.0儀._U3000沖詵沖洗流速：時間：通討進樣器:后瓷封圈猜洗混合腔32SulAnal)1:icalXA限直規(guī)液位:XB限值:如液位：軌限値:就液位：號D限値：利D液位：廢液限值:廢液液位:特機打開W*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程將“通過進樣器”后“

7、Yes”改為“NO”。關(guān)閉泵-更多選項界面，當電腦關(guān)閉或泵斷開連接時，需執(zhí)行此步驟。（圖5-6）沖洗泵單擊（圖5）對話框的“繼續(xù)”按鈕，等一分鐘左右出現(xiàn)連接按鈕變綠，首先將B通道流動相調(diào)節(jié)100%，單擊“沖洗”按鈕，出現(xiàn)如下對話框（圖6）：圖7)排氣閥”擰3圈左右，點擊“忽略警告執(zhí)行”按鈕。依次按照BCDA順序進行沖洗，結(jié)束后順時針輕輕擰緊螺母，注意沖洗過程中流速必須為零。注意沖洗通道的比例必須是100%，當其他通道為比例0%時，A通道為100%。流速的調(diào)節(jié)一般選用90%甲醇或90%乙腈沖洗色譜柱，調(diào)節(jié)流速時需等如0.2ml/min的步進速度（每個平衡點保持0.5分鐘以上時）進行流速的升降，當

8、達到0.6ml/min時，在此流速平衡20-30min后，進行等度流動相比列或梯度流動相初始平衡比例調(diào)整；在此流動相平衡20-30分鐘后，調(diào)整到方法要求的流動相，并等待壓力穩(wěn)定后方可進行樣品分析。當比例調(diào)整幅度大于40%的變化時，應進行過渡（選擇兩步或兩步以上調(diào)整后達到所需要比例），通常先調(diào)節(jié)待加入流動相比例為5%-10%，平衡約5分鐘以上，再調(diào)節(jié)比例到要求的濃度；梯度泵開機時通常選擇有機相調(diào)節(jié)平衡流速，再逐步加入水相；含鹽流動相系統(tǒng)應以調(diào)節(jié)有機相比例5-10%平衡約30分鐘以上，再逐步轉(zhuǎn)換到鹽通道。注意當達到0.5ml/min及以上才能打開柱溫箱、連接自動進樣器以及紫外燈等。柱溫箱的設置根據(jù)

9、實驗要求，設置合理的溫度，選擇合適的色譜柱，試驗沒有要求時，默認柱溫箱溫度為30.002,注意柱溫箱在待機狀態(tài)時，流速最低為0.5ml/min,色譜柱不能用100%的純水沖，最低為5%的甲醇或乙腈。自動進樣器的使用進樣針的清洗單擊“進樣器(Sampler)出現(xiàn)如下界面(圖8)：在啟動項下點擊“灌注注射器”，執(zhí)行清洗，當模塊狀態(tài)項下綠色的“Ready”方可進行下一步，依次按照“灌注注射器一清洗緩沖環(huán)一外部洗針洗緩沖環(huán)”頁序清洗3遍。*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 #頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程鹽樣品瓶（9）樣品瓶托盤（圖

10、10）點擊“樣品盤控制”命令項下的紅區(qū)扇區(qū)位置“移動盤到前部”，當儀器面板出現(xiàn)“SamplePosition及InjectVolume”方可放置樣品；蓋上托蓋。注意：當批處理正在運行時，不能打開自動進樣器的樣品盤放置樣品，必須等當前批處理中斷或停止，進樣針清洗結(jié)束后，進樣閥在“Inject”位置時，點擊“盤控制”命令項下的紅區(qū)扇區(qū)位置“移動盤到前部”，當儀器面板出現(xiàn)“SamplePosition及InjectVolume”方可放置樣品；樣品瓶位置必須與設置樣品序列的位置一致。樣品分析結(jié)束后及時取出樣品瓶防止腐蝕。2.9紫外檢測器單擊“UV”出現(xiàn)如下界面（圖11）；等10-20分鐘，流速達到0.

11、5ml/min穩(wěn)定時點擊命令項“模塊連接”按鈕。*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁智能蒯卻超釋姙制盲胃融I西代上廊=斗險心、EJTiplerA2Din/FLD審計啟動E)盹列W溢謹伍力mL/min范IS40DDFI-屈0-2C-AiribiEt_Temp壓力Emissiun_lFLD_FlowCell76.0075.00-psimVcounts=C養(yǎng)動相XA-1C-C-肌-60-仝XC-1C-C-觀-閃-仝200OO.L：iiTiphi：iUEe_TempPuuTip_PrezEm-e0UVVIS_1戴安U30OO高效液相色譜儀標準操作規(guī)程圖12)*制藥有限公司第 頁共2

12、3頁*制藥有限公司第 頁共23頁根據(jù)需要選擇監(jiān)視的通道，紫外選擇UV-VIS-1,蒸發(fā)光檢測器選擇A2D-Analog，示差選擇A2D-Analog2,熒光選擇的是Emission-1和FLD-FlowCell兩個同時選中，然后點擊確定開始基線監(jiān)測（如圖12）。2.10衍生化泵的連接需要連接衍生化泵時，將色譜柱流出端接到衍生化泵的紅色螺母處。2.10.2將衍生化泵的Det端口出來的管路接至FLD檢測器入口端。2.10.3熒光檢測器的設置圖15）當連接FLD時，點擊FLD出現(xiàn)如下界面（圖16）：*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U

13、3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程圖17)等20分鐘左右，點擊監(jiān)視基線，做黃曲霉毒素時激發(fā)波長360nm；發(fā)射波長450nm；儀器校驗時激發(fā)波長290nm；發(fā)射波長330nm,其他參數(shù)不變。2.11蒸發(fā)光散射檢測器設置2.11.1用蒸發(fā)光散射檢測器檢測時，首先確認XWK-m全自動空氣發(fā)生器干燥管內(nèi)變色硅膠未變色（做1-2次樣需更換變色硅膠），打開XWK-m全自動空氣發(fā)生器開關(guān)，等壓力穩(wěn)定在0.44-0.48MPa之間時，打開蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD-UM3000）右下角電源開關(guān);出現(xiàn)如下圖所示界面（圖17）：調(diào)節(jié)溫度2.11.3按面板上“MENU”出現(xiàn)如圖18所示界面，通過A、V、VI、A（

14、Te）至75oC，按面板上的“ENTER”鍵確定，如下圖（圖18）：上海通微分析技術(shù)有限公pJShanghaiInimicroIcellnologivsI.tl圖18)2.11.4然后如下圖所示界面，通過、V、調(diào)節(jié)流速F至2.50L/M，按面板上的“ENTER”鍵確定，如下圖（圖19）：上海通微分析技術(shù)有限公司ShanghniI111microIcchsnI*（圖19）2.11.5按面板上的“RUN”鍵，再按面板上“VALVE”鍵，POWER、RUN、VALVE三燈全亮出現(xiàn)如下圖20：圖20）2.11.6當T=075、F=2.50P=3.10左右，再調(diào)節(jié)試驗所需流動相。關(guān)閉蒸發(fā)光檢測器時先停止

15、流動相，繼續(xù)用空氣吹30min左右，再按面板上的“VALVE”鍵，再按面板上的“MENU”鍵，再關(guān)黑色開關(guān)。再間斷地按XWK-皿全自動空氣發(fā)生器紅色放液按鈕，直至壓力表上的壓力為“0”，然后關(guān)機。蒸發(fā)光界面一般打開軟件自動連接。模塊狀態(tài)顯示連接（綠色）才可做樣。如下圖（圖21）；圖21）2.12示差檢測器設置2.12.1將色譜柱流出端接到檢測器“IN”端口，檢測器“OUT”端口是廢液流出端。按下左下角的電源開關(guān)，檢測器顯示如下（圖22）：（圖22）2.12.2設置操作參數(shù)。用左右方向鍵切換到參數(shù)設置界面。如下（圖23）*制藥有限公司第14頁共2頁*制藥有限公司第14頁共2頁戴安U3000高效液

16、相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程圖23)通過按上下方向鍵，切換當前顯示的參數(shù)界面。順序如下圖所示(圖24)。圖24)*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程參數(shù)設置說明（圖25）No參數(shù)設置值單位初始值1記錄儀范IflREC.RANGE（U5.05L,214.&鬣64,128,256,512（12階）uRIU/lOmV5122積分儀范圍1NTEG.RANGE128.512iiRIU/1024mV5123溫

17、度TEMPERATUREOFF,30-50（步進1）r40斗時間常數(shù)TIMECONSTANT0.25+0.5,h152+芥6棉階sec1.55極性POLARITY-卡6基線位移BASELINESHJFT0-200（步進50nRIU）07漏液傳感器LEAKSENSORON.OFFONS鋌盤鎖閉KEYLOCKYES,NONO9初始化救值DEFAULFDATAYES,NONO請按照下列步驟更改參數(shù)設置：切換當前顯示的參數(shù)界面至需要更改的參數(shù)；2.12.2.2按下確認鍵（ENTER）,參數(shù)部分的光標開始閃爍；2.12.2.3通過上下方向鍵來更改具體參數(shù)數(shù)值；2.12.2.4按確認鍵（ENTER）使新設

18、置的參數(shù)生效；2.12.2.5按ESC鍵返回監(jiān)控界面；2.12.3將流動相的流速定為1ml/min通過參比池（沖洗）。2.12.4間隔十秒鐘按下沖洗鍵（PURGE），以打開/關(guān)閉沖洗閥（當打開時，LED燈亮，流路通過參比池，再按一次就關(guān)閉），持續(xù)幾分鐘。2.12.5從上述步驟2.12.3開始讓洗脫液流經(jīng)參比池，保持約20分鐘。2.12.6按下沖洗鍵（PURGE）關(guān)閉沖洗閥，流動相流入樣品池。2.12.7等待基線穩(wěn)定。2.12.8按歸零鍵（Zero）自動調(diào)節(jié)零點。開始進樣操作。2.13建立程序文件選擇所要使用的儀器（圖26）2.13.2點擊文件菜單，再點擊創(chuàng)建選擇“序列”出現(xiàn)下（圖27）色譜囹名

19、稱類型級別位置進樣里21儀器方法無RA1-1未知FLA110000無-RA1-2未知RM10000無RA2-1未知RA210000無RA2-2未知RA210000圖26）LU新建序列向?qū)未知迸樣生成類型為“未知”的進樣11器進萍名稱的格式遼1:IZI#p-#r樣品數(shù)（V）進樣次數(shù)（?）:進樣里（0）:2:2:RA1:1.1611.999RAI.B510.0000.001.100.000ri7（圖27）1、選擇樣品瓶數(shù)2、進樣次數(shù)3、起始位置4、進樣量選擇好之后點擊下一步出現(xiàn)下（圖28）新建序列向?qū)Х竭_和報告指定方法和報告蚤數(shù)萬法迓樣儀器方法（I）:處理方法（F）:默訓宜報告模板（R）:視囹設

20、量（V）:僅保存與所選抿告欖板的鋌接町瀏覽.-F僅保存與所選視圖設置的鋌接通道(H):W_VIS_1合=返回下一步聞|取消F=圖28）點擊“瀏覽”選擇儀器方法出現(xiàn)下（圖29）、圖29）點擊黑色圈標注的圖標選擇U3000/U3000-01儀器方法出現(xiàn)下圖一般常用的儀器方法有UV（紫外）、ELSD蒸發(fā)光檢測器/示差檢測器、FLD（熒光）檢測器，根據(jù)樣品檢測要求選擇所需要的檢測器（圖30）。2017/12/1516:23:35+08:002018/2/917:24:43+08:002018/1/189:07:42+08:002018/1/516:36:00+08:002017/12/2921:17:

21、55+08:002018/2/2818:42:44+08:00修改曰期注釋容稱夾夾夾夾夾夾件件件件件件文文文文文文一IEUI蒸發(fā)光檢測器FLD方法一IUV沖洗方法一I反向沖洗色譜柱方法關(guān)機方法IT圖30）儀器方法選定之后回到一下界面（圖31）：5新崖序列向?qū)Х椒ê兔蚋嬷付ǚ椒ê兔蚋鎴笀巳f法迓?lián)駡蟾婺０澹╔）：儀器方法co：處理方法（T）：chrom:/thermopc/U3000/告模板/QC扌艮告.report瀏覽僅保存與所選抿告檯板的鋌接佃）視圏設蠱（V）:僅保存與所選視圏設置的鋌接怕通1(H)：UVVIS1返回CB）下一步（X）圖31)點擊“下一步”完成新建序列完成接下來選擇保存序列界面

22、（圖32）：查棧：aU3000名稱盤一I抿告模板一I處理方法關(guān)機一I檢測柱效一I審計追蹤一I儀器方法一I原料制制夾夾夾夾夾夾夾夾夾件件件件件件件件件文文文文文文文文文修改曰期連釋2017/12/1314:34:52+08:002017/12/1511:44:26+08:002017/12/1314:57:50+08:002018/4/2114:07:49+08:002018/6/2914:10:10+08:002017/12/1314:45:57+08:002017/12/1315:14:23+08:002018/7/2516:35:22+08:002018/4/129:52:57+08:00

23、對象容稱通道:對象類型取消圖32）選擇需要保存路徑，完成即可。所有檢測器使用之前都應提前打開預熱半個小時，波長調(diào)到所需波長，流動相調(diào)到做樣需要的比例即可開始基線測試如（圖33）腿序列*制藥有限公司第 頁共23頁*制藥有限公司第 #頁共23頁4.：-0.0圖36)戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程4.：-0.0圖36)戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程3、運行批處理程序如（圖34）20180116-06|R開始Fl溜目釵列+電童找下一1b處理方法無易RA1T未知FLA15.000前列舒樂片虹通道）走里空閑無11HA1-2未知RA15.000前列舒樂片肛通道）定里空閑無n昵-1未知RA

24、25.000前列舒樂片嗣通道1定里空閑無JLA2-2未知RA25.000前列舒樂片何通道）定里空閑費F甬T未知眈；5.000前列舒樂片（期通道）定里空閑無另JLA3-2未知RA35.000前列舒樂片肛通直走里空閑無JJk-4-l未知RA45.000前列舒樂片虹通道）定里空閑無|fA4-2未知RA45000前列舒樂片（角通道）定里空閑進樣里収儀器方法狀態(tài)圖34)新建序列的命名以前列舒樂為例如下（圖35）圖35)各品種對應各自的對照品及樣品，修改完之后點擊上方的“開始”即可做樣。4、數(shù)據(jù)處理批處理完成后雙擊打開需要處理的色譜圖進行積分處理如下（圖36）：耒琳-2G1監(jiān)亞匚總混:序列一匚hDE金on

25、Cl主頁aAaA預置mAU進樣C0-C0-C0-C0-8.0C0-C0-C0-C0-C0-VC0-ca-處理布局篩選V-i仁湮121935數(shù)據(jù)處理3I允過I魚厘峰導航數(shù)據(jù)處理14.：-112.0-10.0-6.0-2.：-+201808M總混#5匕校正圉曲交結(jié)更圍IS性世交互圏表K等直罔/3D圉陲l-t囹囤UV-Vis光譜囹遛進樣架ts蠢饒腔嚴盤1窗格剪貼板n空白RA1-11淫羊產(chǎn)苗對照品RMT|淫羊產(chǎn)苗對照品RAT4期淫羊產(chǎn)苗對照品RA2T5期淫羊產(chǎn)苗對照品RA2-2E鹵前列舒樂片KA3-1T色前列舒樂片RA3-28色前列舒樂片觸4-19色前列舒樂片RA4-2昌+篩選KV_VIS_1Pujt

26、idPressureSTE和處妙法aAaA結(jié)果*制藥有限公司第 #頁共23頁*制藥有限公司第 頁共23頁4.5Cobra向?qū)瓿珊笤谏V圖下方“組分表”項目中設置組分名稱（圖39）。戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程4.5Cobra向?qū)瓿珊笤谏V圖下方“組分表”項目中設置組分名稱（圖39）。戴安U3000高效液相色譜儀標準操作規(guī)程raAaA4.2先點擊結(jié)果aAaA二CT：】-TL嚴FL*再點擊矯正處理-14.00.0租分區(qū)誡基線噪聲范亀Cobra平滔寬度最小ill面積通道和進樣類型VoidPeak=天團變止二打卄禁止=關(guān)詡|mAU10.0-min4.0匕0.010.015.020.025.0乂取消縮鎖4.3再點擊色譜峰下面檢測項目中的“運行Cobra向?qū)А比缦拢▓D37）檢測組分克|校正未識別im且克|色譜圏扣除高綢檢咂置算法靈）:Cobra運行Ccibria向?qū)А?4.4出現(xiàn)Cobra向?qū)Ш?，選擇積分區(qū)域（圖38）飪Cobra