不同金屬離子對(duì)酶活性的影響

1、金屬離子對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解金屬離子對(duì)酶活性的影響；2、掌握不同金屬離子對(duì)酶活性作用結(jié)果的測(cè)量方法實(shí)驗(yàn)原理：酸性磷酸酯酶廣泛分布于動(dòng)物和植物中，植物的種子、霉菌、肝臟和人體的前列腺中。它對(duì)生物體核苷酸、磷蛋白和磷脂的代謝，骨的生成和磷酸的利用，都起著重要作用。磷酸酶是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化的酶，通過(guò)水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基。磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP,將磷酸基團(tuán)加到對(duì)應(yīng)底物分子上。本實(shí)驗(yàn)選用綠豆芽作材料，從中提取酸性磷酸酯酶。以人工合成的對(duì)硝基苯磷酸酯（NPP）作底物，水解產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚

2、和磷酸。在堿性溶液中，對(duì)硝基酚鹽離子在405nm處光吸收強(qiáng)烈，而底物沒(méi)有這種特性。凡是能提高酶活性的物質(zhì)統(tǒng)稱(chēng)為酶的激活劑。無(wú)機(jī)離子和一些金屬離子對(duì)酶有激活作用，可以作為酶的激活劑。其中鉀離子是酸性磷酸酯酶的一種激活劑，它在酶與底物之間起了橋梁作用，形成了酶金屬離子底物三元復(fù)合物，從而更有利于底物與酶的活性中心部位的結(jié)合。而氯離子和鈉離子對(duì)酸性磷酸酯酶的活性沒(méi)有什么影響.一些重金屬離子如銅離子，對(duì)酶活性具有抑制作用。實(shí)驗(yàn)用品：1、儀器：恒溫水浴箱、試管架、試管、分光光度計(jì)、比色皿、吸頭、滴管、移液槍、移液管2、試劑：LNPP100ml、LNaOH250ml、酸性磷酸酯酶、的檸檬酸緩沖液1000m

3、l、2mmol/LFeSO4、2mmol/LCuSO4、MnCl22mmol/L、MgSO42mmol/L、KCl2mmol/LEDTA、MnCl23MgSO44EDTA5KCl6空白對(duì)照7實(shí)驗(yàn)步驟：FeSO41CuSO42調(diào)零0NPP(ml)11111111酶液(ml)11111111金屬離子（ml）11111111NaOH(ml)33333333注：反應(yīng)均在37度水浴箱中進(jìn)行，0號(hào)管先加入后保溫15分鐘，然后加入NaOH3ml,混勻后再加酶液1ml,在波長(zhǎng)405nm處觀察0D值，以0號(hào)管調(diào)零實(shí)驗(yàn)結(jié)果FeSOCuSOMnClMgS空白調(diào)零442O4EDTAKCl對(duì)照試管號(hào)01234567OD(abs)0由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到的圖標(biāo)如下：系列1不同的金屬離子實(shí)驗(yàn)作業(yè)：以各金屬離子為橫坐標(biāo)，A405縱坐標(biāo)，繪制不同金屬離子與酶活力曲線(xiàn)，觀察金屬離子與酶活力的關(guān)系，分析哪些是酶活性激活劑，哪些是酶活性抑制劑。結(jié)果分析：通過(guò)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的OD值對(duì)比可知，保證在適宜的溫度、pH等外界條件下，再加入1ml2mmol/L濃度的各種金屬離子溶液，對(duì)酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。它們對(duì)酸性磷酸酯酶激活作用的強(qiáng)度由