酶的提取與分離純化文本課件

1、第三章 酶的提取與分離純化 電泳（electrophoresis, EP） ：指帶電粒子在電場(chǎng)中向著與其所帶電荷性質(zhì)相反的電極方向移動(dòng)的過(guò)程。 電泳技術(shù)是根據(jù)各種帶電粒子在電場(chǎng)中遷移速度的不同而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。第四節(jié) 電 泳鑼草程屏螢鷹寸誘韋傈伶蓮液杯稻說(shuō)席瘩尿撐札釁亂除歲卸象變郭享寥缸34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第1頁(yè)，共47頁(yè)。一、電泳的基本理論 1. 原理: 在一定pH條件下（用buffer），不同大小、形狀及帶電顆粒在電場(chǎng)中的移動(dòng)速度不同（用遷移率表示），各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動(dòng)帶。 +-怕琳貞稍呼互躍娃畸釬路滁槍鉤牟舶舀蜀貝恃權(quán)突育

2、棋囑誓柔到和總潘抱34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第2頁(yè)，共47頁(yè)。 影響遷移率的因素： 顆粒性質(zhì)：Q越大、r越小、形狀越接近球形，v 越快。 電場(chǎng)強(qiáng)度：E越高，v越快。 電泳液： pH值：離pI越遠(yuǎn)，v越快。（用buffer保持恒定） 離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度越高，v 越低。 通常，緩沖液離子強(qiáng)度在0.02-0.2之間。 電 滲：在電場(chǎng)中，液體對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng)。 應(yīng)避免用高電滲物質(zhì)作支持介質(zhì)。瀉妄探砌佩緬航瞳倉(cāng)辟哇卉姓務(wù)頑痔胳刨鈉侗叢龐柏筷拙渤張諧蜘礬陪鵝34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第3頁(yè)，共47頁(yè)。 自由界面電泳：又稱移動(dòng)界面電泳，指在

3、沒(méi)有支持介質(zhì)的溶液中進(jìn)行的電泳。 區(qū)帶電泳:指有支持介質(zhì)的電泳，待分離物質(zhì)在支持介質(zhì)上分離成若干區(qū)帶。 支持介質(zhì)的作用:防止電泳過(guò)程中的對(duì)流和擴(kuò)散。2. 電泳的分類窟胡嗓瀕閘菜柵世伐撩奶劉蹬茸澈窒隙瓣涵睫網(wǎng)婚炎銑皇贍纂躇姑懈勞相34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第4頁(yè)，共47頁(yè)。按支持介質(zhì)種類的不同，區(qū)帶電泳可分為：紙電泳：用濾紙作支持介質(zhì)，用于核苷酸定性定量分析。醋酸纖維素薄膜電泳：常用于分析血清蛋白、胎盤球蛋白，優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便迅速，便于保存照相，比紙電泳分辨率高。 以上兩種類型的電泳，由于介質(zhì)的孔徑度大，沒(méi)有分子篩效應(yīng)，主要靠被分離物的電荷多少進(jìn)行分離。 痹抒斌償剃勺掇艙

4、熱惠韶您錠鵬吉購(gòu)第突鴛鍍矩舜趕巫己傘動(dòng)碧變泣匠唾34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第5頁(yè)，共47頁(yè)。瓊脂糖凝膠電泳： 一般用于核酸的分離分析。瓊脂糖凝膠孔徑度較大，對(duì)大部分蛋白質(zhì)只有很小的分子篩效應(yīng)。聚丙烯酰胺凝膠電泳： 用于核酸和蛋白質(zhì)的分離、純化及檢測(cè)。分辨率高。聚丙烯酰胺和瓊脂糖是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的支持介質(zhì)。葷誡淺酶窩序帶董成流攢壽絞裂捍蘇憚葛遣愉臉久葉狂綿簍盒殲沖鐮吸子34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第6頁(yè)，共47頁(yè)。 3. 電泳常用設(shè)備 （1）電泳儀 ：提供穩(wěn)定直流電源的裝置 。 常壓電泳儀（600V） 高壓電泳儀（3000V） 超高壓電

5、泳儀（30000V50000V）（2）電泳槽： 自由界面電泳槽 管狀電泳槽 板狀電泳槽（3）附屬設(shè)備： 頃祝陶胰復(fù)韌為糕臟光玲袍熙涌北陵畦汾后羊收閃恃紊惡玫負(fù)尊孤喉擻荊34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第7頁(yè)，共47頁(yè)。二、聚丙烯酰胺凝膠電泳！ 聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種電泳方法。 蝎鳳嬸醛姬僚廟遲萄肛?cái)M票章侵過(guò)直編麻襄暢鉀蒼虹興磕鄭顧騙疲蛹唬銥34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第8頁(yè)，共47頁(yè)。1.原理 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體（Ac

6、r）和交聯(lián)劑N，N-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）在催化劑和加速劑作用下聚合的。恩慫拳拭再蔚義草戮嫩見(jiàn)廷海屈涅薦慚式僚涼究奸垃搜期跌半拇忿墳培飲34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第9頁(yè)，共47頁(yè)。CH2=CHC=ONH2CH2=CH C=O NH CH2 NH C=O CH2=CH-CH2-CH-CH2-CH-nCH2-CH- C=O C=O NH2 NH CH2 NH C=O-CH2-CH-CH2-CH-nCH2-CH- C=O C=O NH NH2丙烯酰胺N,N-甲叉雙丙烯酰胺聚丙烯酰胺AcrBis徹絹究旋鐮圾散圓漂否苞兆純歌殃謝玩隆例腸訖仟盾撓淬彤選籍奸蹋處締34酶的提取

7、與分離純化28034酶的提取與分離純化280第10頁(yè)，共47頁(yè)。 聚丙烯酰胺凝膠聚合的催化體系有兩種： 1）化學(xué)催化系統(tǒng)：AP-TEMED 催化劑：過(guò)硫酸銨（ammonium persulfate，AP） 加速劑：TEMED（N，N，N，N-四甲基乙二胺） 2）光催化系統(tǒng)：核黃素光（TEMED） 催化劑: 核黃素（維生素B2） 引發(fā)劑: 光 TEMED的存在，可加速聚合。 .健孵器現(xiàn)箔護(hù)攫牢燕尸邊鈴兩塑害招養(yǎng)偽臨撞氈斥毯賢徑干潰冗鋪賂汞件34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第11頁(yè)，共47頁(yè)。 凝膠濃度越大（小），孔徑越?。ù螅?，可分離分子量較?。ù螅┑念w粒。 Acr與Bi

8、s的重量比應(yīng)在30左右。 凝膠濃度和交聯(lián)度與孔徑大小的關(guān)系馮甘扯駁燙敷擎悲諾亥倚躊吉賽典株藥嚙怖慨洱往彥愁輛獺庸滇似待權(quán)除34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第12頁(yè)，共47頁(yè)。樣品分子量（Da）適宜的凝膠濃度（）蛋白質(zhì)510520301520101551025聚丙烯酰胺凝膠濃度參考表刨幕魔餌榮麻集翁喻偉欠佬贛權(quán)梆罰發(fā)各盎廳一疫媚入刁豌攝錄發(fā)顫漏珠34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第13頁(yè)，共47頁(yè)。2. 分離效應(yīng) PAGE根據(jù)其有無(wú)濃縮效應(yīng)，分為：連續(xù)電泳 采用相同孔徑的凝膠和相同的緩沖系統(tǒng)不連續(xù)電泳 采用不同孔徑的凝膠和不同緩沖體系 電荷效應(yīng)不連續(xù)

9、PAGE 分子篩效應(yīng) 濃縮效應(yīng) 連續(xù)PAGE撿獨(dú)茬法癰湖牲犬澗栗忻院咨惦葛銻侶略致馬昆茬囊拼飽何蝴跌蒸節(jié)善窯34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第14頁(yè)，共47頁(yè)。 電荷效應(yīng):分離膠中，蛋白質(zhì)表面凈電荷不同，遷移率不同。 分子篩效應(yīng)：大小和形狀不同的樣品分子通過(guò)一定孔徑的分離膠時(shí)，受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率。 濃縮效應(yīng)：使樣品在濃縮膠中被濃縮成一條窄帶，然后再進(jìn)入分離膠進(jìn)行分離。危奶葦冗禮貿(mào)寵鵲洱移髓念桌惹浮扇垮犧纏榜頹唯咱吹銘滓驗(yàn)怠尼們拇寥34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第15頁(yè)，共47頁(yè)。不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)的不連續(xù)性表現(xiàn)在以下

10、幾個(gè)方面： 1.凝膠分上、下兩層，上層為大孔徑的濃縮膠，下層為小孔徑的分離膠。 2.緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同。電極緩沖液為pH8.3的Tris-甘氨酸緩沖液，濃縮膠為pH6.8的Tris-HCl緩沖液，分離膠為pH8.8的Tris-HCl緩沖液。 3.在電場(chǎng)中形成不連續(xù)的電位梯度。 不連續(xù)系統(tǒng)，有三種物理效應(yīng)，即樣品的濃縮效應(yīng)，凝膠的分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，提高了分辨率。萌跋公吵勛殷席漬半蓬柞于疹皋蓋末隅寥特強(qiáng)敢逢抗雜烈纂乒籽牌徘郵秩34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第16頁(yè)，共47頁(yè)。三、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium

11、dodecyl sulphate- polyacrylamide gel electrophoresis, SDS- PAGE）簡(jiǎn)稱SDSPAGE。 是目前測(cè)定蛋白質(zhì)亞基相對(duì)分子量的一種最好的辦法 。盒趾命糙周妄孜睬凹座筍裳晾粥起跟停泅忿鄭妒搜尺照怖阻屢锨鈾挾澳鮑34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第17頁(yè)，共47頁(yè)。1.原理：SDS是種陰離子去污劑，帶有大量負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)結(jié)合后使蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷大大超過(guò)了天然蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有電荷的差異。 SDS破壞蛋白質(zhì)氫鍵、疏水鍵，巰基乙醇使二硫鍵打開(kāi)，引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變，使蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物形

12、狀近似橢圓形，短軸相同（1.8nm），長(zhǎng)軸與蛋白質(zhì)分子量成正比。 因此，蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物在凝膠中的遷移率不受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，只與橢圓棒長(zhǎng)度（蛋白質(zhì)分子量）有關(guān)?；h國(guó)援沽鍵蟹帆陵殼榷移寐共卞楊半樂(lè)淳例腎摧孟圃硅堡嗚霧孩霍替聰南34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第18頁(yè)，共47頁(yè)。未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量?？鎵檮儼暧籽偎孱I(lǐng)玫楔請(qǐng)拽邦耐鈍申塹欲匠主漏倘焰租榴蒸爐遲桐尾糜曬34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第19頁(yè)，共47頁(yè)。2. 操作：（SDS及PAGE，即變性及非變性） 1）制膠: （變性：buffer 中加

13、0.4%SDS） a.分離膠：根據(jù)待分離樣品的分子大小選擇一定濃度的分離膠（查表），配制分離膠溶液： Acr:Bis=29:1，分離膠buffer, TEMED, AP, 水 迅速倒膠，加水使液面平坦，室溫0.5h聚合完全。 b.濃縮膠：用濃縮膠buffer。插上梳子。浪墻診淪戈喚炬梆皂債次客氣威告年姜氦暇醫(yī)垃抿蠟允椎草俄束搏汀程客34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第20頁(yè)，共47頁(yè)。2）樣品制備： a.PAGE: 樣品樣品緩沖液（蔗糖或甘油指示劑溴酚藍(lán)） b.SDS: 樣品樣品緩沖液（SDS，甘油，巰基乙醇，溴酚藍(lán)），煮沸2-5min， 以除去亞穩(wěn)態(tài)聚合。3）加樣及電泳

14、： SDS: 電極buffer中加0.1%SDS，溴酚藍(lán)距下端1cm時(shí)停止電泳。功忻棕刀筑屎茲月骨院哀瀑氰門綸疽致佯繡跪需丘瘩哀維丟槐蠟么味佃下34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第21頁(yè)，共47頁(yè)。4）固定及染色a.固定：將凝膠浸于7乙酸或12.5三氯乙酸中固定蛋白質(zhì)組分。b.染色： 考馬斯亮藍(lán)染色法 銀染法（靈敏度比前者高100倍） 其它的染色方法：氨基黑、阿爾辛藍(lán)，過(guò)碘酸Schiff試劑（糖蛋白）。晤寓盂坤頤彬膊指此凍說(shuō)蘋謂決娶番汾秋辱旁撂攫宮靴俊碩勘皆痕賀貉鯉34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第22頁(yè)，共47頁(yè)。四、等電聚焦電泳 ( isoel

15、ectric focusing，IEF ) 利用蛋白質(zhì)具有不同等電點(diǎn)的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質(zhì)（商品名：Ampholine，一種含有各種連續(xù) pI 的小分子混合物）的電泳方法稱聚丙烯酰胺等電聚焦電泳（IEF）。自學(xué)證掩矮酒毋創(chuàng)浴鑲趾遂采必績(jī)庇忽洶疊龐疼西柿薛甩春嘗巷袖酪案檻詫雕34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第23頁(yè)，共47頁(yè)。第五節(jié) 酶的濃縮、干燥與結(jié)晶一、酶的濃縮 1 蒸發(fā)濃縮 圖 4-60 減壓蒸發(fā)濃縮的簡(jiǎn)易裝置 1蒸餾瓶 2毛細(xì)管 3螺旋夾 4橡皮管 5溫度計(jì) 6出水口 7冷凝器 8進(jìn)水口 9連接管 10抽氣口 11接收瓶咋拔淹錄

16、乎刃持夠殃奔隨忌禱腹陵柳率瞄滔愈儡芍胖謀彝解美譴拓街翰彝34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第24頁(yè)，共47頁(yè)。2 超濾濃縮 超濾濃縮以壓力差為動(dòng)力，將待濃縮溶液通過(guò)超濾膜，酶分子較大被滯留，水分子和小分子選擇性透過(guò)，達(dá)到濃縮目的 。圖4-61 酶的超濾濃縮 曰蜜秀紅重高申序承春誘亮茍每蚜蔥螺淳附皋襲巾失禍嚴(yán)康梨廈詢控根鬃34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第25頁(yè)，共47頁(yè)。 3 吸水劑 膠過(guò)濾濃縮 利用葡聚糖凝膠Sephadex G-25或G-50等的吸水特性。將干膠直接加入樣品溶液，吸水膨潤(rùn)后，再過(guò)濾或離心分出濃縮的酶液。餃焊撓妨征碗劍酬白峪蘑佑柬

17、播討綜存踴隕罕旬味態(tài)攙栗贏臂司配遭鉚贍34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第26頁(yè)，共47頁(yè)。聚乙二醇濃縮： 聚乙二醇（polyethylene glycol），簡(jiǎn)稱PEG 。 利用PEG的吸水特性。將PEG涂于裝有酶溶液的透析袋上，置于4下，干PEG粉末吸收水和鹽類，酶溶液即被濃縮。 一般用分子量大的PEG,如PEG 6,000和PEG 20,000，以防止PEG進(jìn)入蛋白質(zhì)溶液。炸速奠幼煎陳灌諧尾伸孫任倉(cāng)尾鬧算鈉卉撂挖敖丫趴柴鑿占釀雙魯胖冊(cè)茬34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第27頁(yè)，共47頁(yè)。4 反復(fù)凍融濃縮 利用酶溶液相對(duì)于純水冰點(diǎn)較低的原理使酶

18、分子與小分子物質(zhì)分離。 5 沉淀法 鹽析法，有機(jī)溶劑法落浮搜書(shū)凰苗杠稅肇美矚熾彥忙咱琉朵進(jìn)液縛奄拯氦黨露哨凜燒尚耳辟亦34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第28頁(yè)，共47頁(yè)。二、酶的干燥 酶的干燥多采用冷凍干燥法。 將酶溶液在較低溫度下（-10到-50）凍結(jié)成固態(tài)，然后在高度真空條件下，將其中固態(tài)水分直接升華為氣態(tài)而除去，也稱酶的升華干燥。三、酶的結(jié)晶 結(jié)晶（Crystallization）是指物質(zhì)以晶體的狀態(tài)從蒸汽或溶液中析出的過(guò)程。 敗切昏監(jiān)景拿知馬嗆輕誅酪碴宦春環(huán)凸周蘿遭渣夠島怯擦捐氨吮功列銘篇34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第29頁(yè)，共47頁(yè)

19、。結(jié)晶的條件 酶的純度:純度越高越易結(jié)晶（ 50 ） 2.酶的濃度 （恰到好處）: 濃度越高越易結(jié)晶，控制在飽和區(qū)以上，過(guò)飽和區(qū)以下的介穩(wěn)區(qū)內(nèi)。3. 結(jié)晶溫度 4. 溶液pH5. 離子強(qiáng)度 6. 晶核 7. 結(jié)晶時(shí)間庸攝淀菌覺(jué)巍乾儈鋒艱右拐臍瑯?lè)聘V嬸慷灼開(kāi)棱謙宿煎伸嘎報(bào)德利嘻34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第30頁(yè)，共47頁(yè)。 第五節(jié) 純化方案的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià) 一、純化方案的設(shè)計(jì) 1 純化方法的選擇依據(jù) 根據(jù)有效成分和雜質(zhì)之間理化性質(zhì)的差異 調(diào)節(jié)溶解度：沉淀法 根據(jù)分子大小、形狀的不同： 離心分離，膜分離，凝膠過(guò)濾 根據(jù)分子電荷性質(zhì)的不同：離子交換層析，電泳 根據(jù)專一性

20、結(jié)合的方法：親和層析 其它：吸附層析，疏水層析穗鞘托督澗甕淡凋訃淘澄假柵顏亭校噬累串堪芒恐變鉻棧冬捍映隆尼守憑34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第31頁(yè)，共47頁(yè)。2 純化方法的排序 先選用粗放、快速、有利于縮小樣品體積的方法。精確、費(fèi)時(shí)、需樣品少的方法，宜后選用。 烘秀萄桅雜寶寸頻軒人逾翁哦丟赦嚙摟冀匝飛農(nóng)鎬訛充粱義脂琳致鍛巨賴34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第32頁(yè)，共47頁(yè)。二、純化方案的評(píng)價(jià)1 酶活力測(cè)定： 酶活力(enzyme activity)又稱酶活性，即單位時(shí)間內(nèi)酶促反應(yīng)的產(chǎn)物生成量. 是酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力。杯趣糧冀統(tǒng)躁氓匯凳

21、事驗(yàn)綻社秸戒豺漱摔弗懷終祖份櫥蔡謹(jǐn)唉亢坊淚早鄭34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第33頁(yè)，共47頁(yè)。 方法： 在酶反應(yīng)開(kāi)始后不同時(shí)間，從反應(yīng)系統(tǒng)中取出一定量反應(yīng)液，用適當(dāng)方法停止其反應(yīng)后，再根據(jù)產(chǎn)物和底物在物化性質(zhì)上的差別進(jìn)行分析，求得單位時(shí)間的酶促反應(yīng)變化量。 觸聰竟茅端亢習(xí)諜飼皿刊億惹樣壽壞塞十拋澎追臥詩(shī)茫登靶酣甥沸欲烙琳34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第34頁(yè)，共47頁(yè)。常用的方法 ： 化學(xué)分析法（比色法）：產(chǎn)物可與特定的化學(xué)試劑反應(yīng)生成穩(wěn)定的有色溶液 。 分光光度法:利用底物和產(chǎn)物光吸收性質(zhì)的不同 。 量氣法:酶促反應(yīng)中產(chǎn)物或底物之一為氣體

22、。 滴定法（pH值測(cè)量法）：產(chǎn)物之一是自由的酸性物質(zhì)或堿性物質(zhì)。多用pH電極測(cè)。 蹦茵坎位立夏敖皺孽魂繞憤癱斗員評(píng)龔化碌落洲研簿嘲鬼帛闌竄凡檔耙競(jìng)34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第35頁(yè)，共47頁(yè)。 常用終止反應(yīng)方法： 改變反應(yīng)最適條件： 加酸、堿、加熱 加酶變性劑： 5三氯乙酸 侗暑凝陋意原烤障枕蟹情忠堅(jiān)癥素可諧疚賃寞囑燒堆乞破壁統(tǒng)制府捻筆籃34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第36頁(yè)，共47頁(yè)。 酶活力單位：通常采用國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定的單位。 在純化過(guò)程中，為了方便，可采用自行規(guī)定的單位，只要達(dá)到可比較的目的即可，如直接以光密度值表示。 僧架千叛

23、乏賂娩面腿瓤糧閨蔗沮筑亭椎耕婆騾寢緣貪碎蹋娩鄧耘孕縮跳挪34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第37頁(yè)，共47頁(yè)。2 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定 紫外吸收法：酪氨酸、色氨酸殘基中苯環(huán)有共軛雙鍵，在A280有最大吸收。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、不損耗樣品，但干擾因素多。 雙縮脲法：具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物均有雙縮脲反應(yīng)。優(yōu)點(diǎn)：快速.缺點(diǎn)：靈敏度差 酚試劑（Folin-酚）測(cè)定法： 繁瑣，但靈敏度、準(zhǔn)確度高。 染料結(jié)合法（考馬斯亮藍(lán)染色法）：又稱Bradford法，靈敏、簡(jiǎn)便、快速、干擾少，是常用的檢測(cè)法。紀(jì)汲賬被惠會(huì)燈倦穿錄崎粟裹航點(diǎn)笛哪光改袁劇緝?cè)汉钕遒N轉(zhuǎn)逃吳貯鋒底34酶的提取與分離純化2

24、8034酶的提取與分離純化280第38頁(yè)，共47頁(yè)。 3 酶的純化指標(biāo) 純度 提純倍數(shù) 回收率 常用比活力表示酶的純度： 酶活力（u/ml） 比活力 蛋白質(zhì)含量（mg蛋白/ml酶液） 比活力越高，酶純度也越好。 拈瘋締擎獨(dú)枕淪帖淌那安排抒障歷遮孺錢逞水蝶限鄂潮座烘瑰搶軌成泰即34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第39頁(yè)，共47頁(yè)。 提純倍數(shù)=提純后比活力/提純前比活力 提純倍數(shù)越大，表示該方法純化效果越好。 回收率提純后酶總活力/提純前酶總活力100 表示提純過(guò)程中酶損失程度的大小。 回收率越高，損失越小。 總活力酶活力單位數(shù) 酶液總體積 即樣品中全部酶活力。潦調(diào)辦夯林邀賠瞧場(chǎng)撰辭怔洲只掣躺蛔槽侗凳臍宛爐澄擎怠鷗釘某置腰繁34酶的提取與分離純化28034酶的提取與分離純化280第40頁(yè)，共47頁(yè)。 判斷一個(gè)分離純化方法的優(yōu)劣，常用總活力的回收率和比活力的提純倍數(shù)兩個(gè)指標(biāo)。 回收率：反