試驗(yàn)七霉菌的培養(yǎng)和觀察

1、實(shí)驗(yàn)七 霉菌的培養(yǎng)和觀察摘要 通過(guò)在一定固定環(huán)境下培養(yǎng)根霉，毛霉，曲霉，青霉四種霉菌，先通 過(guò)菌種的外形對(duì)其有一個(gè)“宏觀”的認(rèn)識(shí)，然后再在顯微鏡低倍或高 倍鏡下分別觀察四種菌的形態(tài)，抱子囊及抱子形態(tài)，菌絲形態(tài)等方面。 發(fā)現(xiàn)根霉，曲霉和青霉菌絲均有橫隔；青霉的分生抱子小梗呈掃帚狀 等現(xiàn)象。關(guān)鍵詞土豆培養(yǎng)基(PDA 分生抱子梗(Conidiophore ) 載片培養(yǎng)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。(2) 了解四類(lèi)霉菌(根霉、毛霉、黑曲霉、青霉)的基本形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)原理霉菌菌絲體由基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和繁殖菌絲組成，其菌絲比 細(xì)菌及放線菌粗幾倍到幾十倍。可以采取直接制片和透明膠帶

2、法觀 察，也可以采取載玻片培養(yǎng)觀察法，通過(guò)無(wú)菌操作將薄層培養(yǎng)基瓊 脂置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，使菌絲體在蓋玻片和載 玻片之間的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，將培養(yǎng)物直接置于顯微鏡下可觀察到霉 菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)并可連續(xù)觀察不同發(fā)育期的菌體結(jié)構(gòu)特征變化。對(duì)霉菌可利用乳酸石炭酸棉藍(lán)染液進(jìn)行染色，蓋上蓋玻片后制成霉菌 制片鏡檢。石炭酸可以殺死菌體及抱子并可防腐， 乳酸可保持菌體 不變形，棉藍(lán)使菌體著色。同時(shí)，這種霉菌制片不易干燥，能防止抱子飛散，用樹(shù)膠封固后可制成永久標(biāo)本長(zhǎng)期保存。三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種根霉(Rhizopus),毛霉(Mucor),黑曲霉(Aspergillus niger ),青霉(Penic

3、illium )2、試劑馬鈴薯20g,蔗糖2g,瓊脂2g,水100mL 20%T油等。3、儀器分析天平，玻璃棒，三角瓶，小燒杯，加熱器，漏斗，紗布，培養(yǎng)皿, 載玻片，蓋玻片，U型玻棒，解剖刀，鐐子，接種環(huán)，移液管，酒精 燈，顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)配制馬鈴薯培養(yǎng)基配制200ml馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA,其成分配比及配制方法見(jiàn)附錄。滅 菌后無(wú)菌操作，取培養(yǎng)基分別倒少量于滅菌培養(yǎng)皿中，使之凝固成薄 層。再將這一層培養(yǎng)基用解剖刀切割為若干 1cm2左右的瓊脂塊。(2)制作小室及接種培養(yǎng)制作：在平皿底部鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，在其上放一U型玻棒。在玻棒上放上一塊載玻片。取方形瓊脂塊，將其移至載 玻

4、片上，載玻片兩端各放置一塊。小室培養(yǎng)法，圖： 接種：用接種環(huán)挑取很少量的菌落接種于瓊脂塊的邊緣上，用無(wú) 菌鐐子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。(同一塊載玻片上的兩塊培養(yǎng)基上 接種不同菌種)培養(yǎng)：無(wú)菌操作，在培養(yǎng)小室中濾紙片上滴加 23ml滅菌甘油, 蓋上皿蓋，于27 c恒溫箱中正置培養(yǎng)一個(gè)星期。(3)鏡檢觀察從培養(yǎng)箱中取出載玻片在低倍鏡下觀察并記錄四種霉菌菌絲體及抱子的形態(tài)特征，必要時(shí)可換高倍鏡觀察。(3)注意事項(xiàng)菌時(shí)蓋玻片最好分開(kāi)包，載玻片、蓋玻片不要和平皿接觸，防止粘在一起。倒薄片時(shí)培養(yǎng)基倒入占平皿底部一薄層即可，然后搖動(dòng)平皿即可使培養(yǎng)基鋪滿(mǎn)底部。接種時(shí)盡可能將菌種接在瓊脂塊邊緣，避免培養(yǎng)后菌絲過(guò)

5、于密集影響觀察。 接種時(shí)確認(rèn)有菌接上即可，接 菌量不宜過(guò)多，會(huì)導(dǎo)致菌絲過(guò)密難以觀察。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果菌種根霉毛霉黑曲霉青霉菌落形態(tài)菌落疏松或稠密， 最初呈白色，后變白色疏松絮狀黑色疏松外圈白色，內(nèi)部綠色為灰褐色或黑褐 色。有無(wú)假根有假根、匍匐菌絲無(wú)無(wú)假根，有足細(xì)胞無(wú)菌絲形態(tài)透明無(wú)隔較細(xì)無(wú)隔透明有隔透明有隔抱子梗形態(tài)直立著生于假根上，頂端膨大為圓形的抱子囊由菌絲生出，頂 端為球形抱子由氣生菌絲分化，頂端為球狀頂囊分生抱子梗頂端不膨大，無(wú)頂囊，多次分生形成小 梗，形如掃帚抱子特征抱子囊位于 囊軸上，抱子 位于抱子囊 中，抱子囊呈 圓形，表面光 滑球形、橢圓形、壁薄、光滑的抱囊抱子抱子梗是輻

6、射狀排列，呈冠狀，分生抱子黑 色不透明，表面 粗糙小梗頂端有分節(jié)橢圓狀抱子畫(huà)圖:照片（資料）圖表2-1根霉圖表2-2根霉假根圖表2-5青霉 曲霉2、 思考題12、黑曲霉和黑根霉在形態(tài)特征上有何區(qū)別？菌絲：根霉無(wú)隔有假根，曲霉無(wú)隔有足細(xì)胞。抱子梗：根霉位于假根上，曲霉由氣生菌絲分化而來(lái)。抱子囊形態(tài)：根霉抱子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮狀。13、如果要求對(duì)某放線菌或霉菌不同發(fā)育時(shí)期 （基內(nèi)菌絲-氣生菌絲一抱子絲或繁殖菌絲）進(jìn)行連續(xù)觀察，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)方案。選取對(duì)數(shù)期菌落進(jìn)行同步培養(yǎng)，分化出處于同一生長(zhǎng)階段的菌。接種，若放線菌則在平皿上插上至少7個(gè)載玻片，霉菌則至少接五個(gè)小室。養(yǎng)觀察：在適宜條件下培養(yǎng)，每隔一天在相同時(shí)間內(nèi)取出一個(gè)蓋玻片進(jìn)行觀察記錄。六、實(shí)驗(yàn)小結(jié)本次試驗(yàn)的成功需要注意幾個(gè)方面的問(wèn)題。 首先，在接種的時(shí)候 不應(yīng)該在固體培養(yǎng)基上接種太多太厚的抱子， 并且接種需要接在固體 培養(yǎng)基小塊兒的邊緣，以便于霉菌的生長(zhǎng)。其次，無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行各 種操作也是非常重要的，這樣可以保證菌種不被污染。再者，本次實(shí) 驗(yàn)在觀察霉菌的形態(tài)的時(shí)候，有特別的關(guān)注不同霉菌的細(xì)節(jié)及不同之 處。比如菌絲是否有隔，抱子囊形態(tài)等特征。通過(guò)細(xì)心比較各種霉菌 細(xì)節(jié)狀態(tài)的不同，我們就可以用來(lái)分別鑒定一些霉