微生物實驗室生物安全教學(xué)課件

1、微生物實驗室（BSL-2）生物安全趙紅2011.01.18第1頁，共34頁。第一部分：微生物安全的相關(guān)規(guī)定第2頁，共34頁。微生物實驗室相關(guān)規(guī)定實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）病原微生物實驗室生物安全管理條例WHO實驗室生物安全手冊第3頁，共34頁。實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn) 氣溶膠aerosols懸浮于氣體介質(zhì)中的粒徑一般為0.001m100m的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系。 氣鎖 air lock具備機(jī)械送排風(fēng)系統(tǒng)、整體消毒滅菌條件、化學(xué)噴淋（適用時）和壓力可監(jiān)控的氣密室，其門具有互鎖功能，不能同時處于開啟狀

2、態(tài)。生物安全柜biological safety cabinet，BSC具備氣流控制及高效空氣過濾裝置的操作柜，可有效降低實驗過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對操作者和環(huán)境的危害。緩沖間 buffer room設(shè)置在被污染概率不同的實驗室區(qū)域間的密閉室，需要時，設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，其門具有互鎖功能，不能同時處于開啟狀態(tài)第4頁，共34頁。實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn) 。 定向氣流特指從污染概率小區(qū)域流向污染概率大區(qū)域的受控制的氣流。高效空氣過濾器（HEPA過濾器）通常以0.3m 微粒為測試物，在規(guī)定的條件下濾除效率高于99.97%的空氣過濾器。實驗室生物安全

3、實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實驗室生物安全責(zé)任的要求。實驗室防護(hù)區(qū)實驗室的物理分區(qū)，該區(qū)域內(nèi)生物風(fēng)險相對較大，需對實驗室的平面設(shè)計、圍護(hù)結(jié)構(gòu)的密閉性、氣流，以及人員進(jìn)入、個體防護(hù)等進(jìn)行控制的區(qū)域。風(fēng)險評估評估風(fēng)險大小以及確定是否可接受的全過程。第5頁，共34頁。實驗室生物安全防護(hù)水平分級分級依據(jù)：對所操作生物因子采取的防護(hù)措施分為四級：一級防護(hù)水平最低，四級防護(hù)水平最高。生物安全防護(hù)水平為一級的實驗室BSL-1 ：適用于操作在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物；生物安全防護(hù)水平為二級的實驗室B

4、SL-2 ：適用于操作能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物；生物安全防護(hù)水平為三級的實驗室BSL-3 ：適用于操作能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物；生物安全防護(hù)水平為四級的實驗室BSL-4：適用于操作能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。 第6頁，共34頁。第7頁，共34頁。第8頁，共34頁。第二部分：微生物實驗室的安全及風(fēng)險評估第9頁，共34頁。1. 微生物實驗室常見安全事

5、故手套損壞、污染及衣物污染感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜刺傷、切割傷或擦傷潛在危害性氣溶膠的釋放容器破碎及感染性物質(zhì)溢出在臺面、地面和其他表面未裝可封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂在可封閉的離心桶（安全杯）內(nèi)離心管發(fā)生破裂第10頁，共34頁。2. 微生物實驗室風(fēng)險評估當(dāng)實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應(yīng)進(jìn)行危害程度評估。危害程度評估應(yīng)至少包括下列內(nèi)容：生物因子的種類（已知的、未知的、基因修飾的或未知傳染性的生物材料）、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動物實驗數(shù)據(jù)、預(yù)防和治療。微生物實驗室風(fēng)險評估的核心風(fēng)險鑒定與識別制定降低風(fēng)險的方

6、案殘余風(fēng)險鑒定執(zhí)行和再評估第11頁，共34頁。生物實驗室風(fēng)險評估的意義確定生物安全防護(hù)水平（實驗室）；確定保藏、運(yùn)輸、滅活、銷毀的條件；潛在危害分析與意外事故處理程序；個人防護(hù)；制定微生物操作程序；健康保障與監(jiān)督程序。第12頁，共34頁。3. 風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素傳染或疑似傳染媒介的致病性，包括疾病的發(fā)生率和嚴(yán)重性潛在的危害性愈大，風(fēng)險越高staphylococcus aureus： BSL-2Viruses such as Ebola, Marburg, and Lassa fever： BSL-4其它因素的抑制作用(HIV) and hepatitis B virus： 也在BSL-2，H

7、IV因為非空氣傳播Hepatitis B virus: 有疫苗傳播途徑遺傳、空氣、食入：新分離出來的媒介很難確定空氣傳播的：引起最大的實驗室內(nèi)傳染；氣溶性越強(qiáng)，風(fēng)險越大媒介的穩(wěn)定性氣溶傳染性，脫水，陽光/UV，化學(xué)脫水性等第13頁，共34頁。風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素傳染劑量微生物與宿主的交互作用復(fù)雜：1unit-成百上千units工作人員的免疫力直接影響其對工作中接觸的傳染媒介的抵抗力濃度單位體積內(nèi)微生物的數(shù)量含有微生物的環(huán)境（固體組織、粘度等）和操作（媒介擴(kuò)增，超聲或離心等）高擴(kuò)增倍數(shù)的媒介體積越大，風(fēng)險越大起源地理位置（國內(nèi)或國外）宿主起源性質(zhì)（潛在動物源性，伴隨疾病爆發(fā)）第14頁，共34頁。

8、風(fēng)險評估應(yīng)考慮的因素動物實驗數(shù)據(jù)在動物中的致病性，傳染性，傳染途徑有效的治療和干預(yù)措施免疫過的工作人員在BSL-3操作BSL-4 Junin virus 免疫也可能是被動的（暴露HBV時，使用血清免疫球蛋白）免疫，提供除機(jī)械工程控制，正確操作，和使用個人保護(hù)措施外的保護(hù)措施醫(yī)療監(jiān)督風(fēng)險管理的一部分：雇員健康狀況，血清庫，參與暴露后管理受風(fēng)險威脅的人員的經(jīng)驗和技術(shù)水平實驗員，維修工，清潔工，動物飼養(yǎng)人員第15頁，共34頁。其它風(fēng)險因素處理可能被污染的利器：針頭，刀片，碎玻璃，有缺口的金屬手、胳膊或臉上暴露的傷疤、擦傷或刮痕，胳膊或臉可能接觸到、或被噴濺血，血液污染物或病原培養(yǎng)基。第16頁，共34

9、頁。第17頁，共34頁。第三部分：微生物實驗室安全控制第18頁，共34頁。1. 微生物實驗室安全控制措施不得在實驗室吃、喝、吸煙、或使用化妝品不得使用嘴吸式移液管或需用嘴操作的吸式儀器穿實驗服、戴手套、適當(dāng)?shù)难?面部保護(hù)；處理傳染性或污染性材料，使用一次性手套。在使用前檢查所有的個人防護(hù)衣服和設(shè)備，注意更換受損的或有可能無效的。避免手/眼/臉接觸，離開實驗室前徹底洗手使用75%酒精來清理工作臺和手，以減少交叉污染確定動物過敏原接觸人員名單，促使他們參加健康監(jiān)督第19頁，共34頁。微生物實驗室安全控制措施從事轉(zhuǎn)基因工作的人員必須獲得轉(zhuǎn)基因安全委員會的認(rèn)可，轉(zhuǎn)基因項目必須得到類似批準(zhǔn)工作允許的情況

10、下，避免使用活的病原菌，盡量使用危害性最小的成立專門小組，以從事傳染性生物媒介物工作；該小組僅在限制范圍內(nèi)的實驗室內(nèi)工作在訂購任何化學(xué)品之前，確保已經(jīng)建立適當(dāng)?shù)馁A存、使用和應(yīng)急措施在適當(dāng)?shù)奈⑸锇踩珯恢羞M(jìn)行產(chǎn)生氣溶膠的操作盡可能減少使用銳器；迫不得已情況下，必須使用適當(dāng)?shù)目勾┩溉萜鞯?0頁，共34頁。微生物實驗室安全控制措施潔凈操作臺或其它表面可能被污染，在實驗室準(zhǔn)備新配的消毒液備用經(jīng)常清理和換水浴鍋里的水；尤其是在被活微生物或培養(yǎng)基污染的時候?qū)⑺械膫魅镜幕蛭廴镜奈⑸飶U棄物放入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，以備滅菌；或者，浸入消毒溶液中。進(jìn)行焚燒處理的人類或動物廢棄物，必須冷凍貯存在有顏色標(biāo)識的塑料袋中傳

11、染物或污染物，除非是在密封在有標(biāo)識的容器中，否則不得從實驗室運(yùn)到其它區(qū)域免疫性或其它常規(guī)注射應(yīng)當(dāng)提供，以提高接觸病原菌人員的免疫力第21頁，共34頁。2. 實驗室應(yīng)急物資儲備急救箱：包括常用的傷口處理藥品和特殊的解毒劑等工具：錘子、（斧子）、扳手、螺絲刀、（繩梯）等適合實驗室使用的滅火器、（滅火毯）房間消毒設(shè)備，如噴霧器和甲醛熏蒸器劃分危險區(qū)域界限的器材和警告標(biāo)示全套防護(hù)服（*連體防護(hù)服、手套和頭套用于涉及第一類和第二類病原微生物的事故）有效防護(hù)化學(xué)物質(zhì)和顆粒的全面罩式防毒面具第22頁，共34頁。3. 微生物實驗室安全事故應(yīng)急措施3.1 手套損壞、污染1.手套被污染時應(yīng)立即用消毒劑噴灑手套2.

12、脫下手套，放入黃色垃圾袋內(nèi)（待統(tǒng)一滅菌）3.更換新手套繼續(xù)實驗【注意】在操作高致病性病原微生物時應(yīng)該佩戴雙層手套第23頁，共34頁。3.2 衣物污染盡快脫掉最外層防護(hù)服，并注意防止感染性物質(zhì)進(jìn)一步擴(kuò)散將已污染的防護(hù)服放入黃色垃圾袋內(nèi)，待高壓滅菌脫掉手套，到污染區(qū)出口處洗手更換防護(hù)服和手套必要時對發(fā)生污染及脫防護(hù)服的地方進(jìn)行消毒處理第24頁，共34頁。3.3 感染性物質(zhì)濺灑污染皮膚及粘膜感染性液體（血液、尿液標(biāo)本或培養(yǎng)物）外溢到皮膚立即停止工作，脫掉手套用75%的酒精進(jìn)行皮膚消毒再用大量水沖洗感染性液體濺入眼睛立即停止工作，脫掉手套迅速到緩沖區(qū)用洗眼器沖洗再用生理鹽水沖洗（注意動作輕柔，勿損傷眼

13、睛）兩種情況都應(yīng)做適當(dāng)?shù)念A(yù)防治療和醫(yī)學(xué)觀察，并報告實驗室安全員進(jìn)行事故記錄第25頁，共34頁。3.4 刺傷、切割傷或擦傷應(yīng)急處理保持鎮(zhèn)靜，立即停止實驗，脫掉手套。用清水和肥皂水清洗傷口。盡量擠出傷口處的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒精擦洗傷口，適當(dāng)?shù)陌?。及時就醫(yī)，告知醫(yī)生受傷原因及可能的微生物污染，必要時要進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理。向?qū)嶒炇野踩珕T報告，進(jìn)行事故記錄。第26頁，共34頁。3.5 潛在危害性氣溶膠的釋放 (在生物安全柜以外)哪些意外情況下可能發(fā)生危害性氣溶膠的釋放？操作中生物安全柜突然停機(jī)或轉(zhuǎn)為正壓大量感染性物質(zhì)溢出、濺灑非封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)帶有感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂第27頁，共

14、34頁。3.6 潛在危害性氣溶膠釋放的處理 （在生物安全柜以外）所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域報告實驗室安全員在1小時內(nèi)任何人不得進(jìn)入事發(fā)實驗室，以使氣溶膠排出和重粒子沉降；無中央通風(fēng)系統(tǒng)則應(yīng)推遲進(jìn)入（如24小時）貼出標(biāo)識以示禁止入內(nèi)過后由專業(yè)人員指導(dǎo)清除污染，如甲醛蒸汽熏蒸，操作時注意防護(hù)（暴露人員應(yīng)進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，必要時及時就醫(yī)）第28頁，共34頁。3.7 生物安全柜內(nèi)少量溢出處理處理溢灑物時不要將頭伸入安全柜內(nèi)，也不要將臉直接面對前操作口，而應(yīng)處于前視面板的后方。選擇消毒劑時需要考慮消毒劑對生物安全柜的腐蝕性。（使用含氯制劑后再用清水擦拭）如果溢灑的量不足1 mL時，可直接用消毒劑浸濕的紙巾

15、（或其它材料）擦拭。如果溢灑物流入生物安全柜內(nèi)部，則視情況，如需要可對生物安全柜進(jìn)行熏蒸。第29頁，共34頁。3.8 生物安全柜內(nèi)大量溢出處理使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。在溢灑物上覆蓋浸有消毒劑的吸收材料，作用一定時間以發(fā)揮消毒作用。（必要時，用消毒劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽）消毒后脫下手套。如果防護(hù)服已被污染，脫掉污染的防護(hù)服后，洗手。穿好新的防護(hù)裝備，如手套、防護(hù)服、護(hù)目鏡等。小心將吸收了溢灑物的吸收材料和溢灑物收集到專用的收集袋或容器中，并反復(fù)用新的吸收材料將剩余物質(zhì)吸凈。破碎的玻璃或其它銳器要用鑷子或鉗子處理。用消毒劑擦拭或噴灑安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)，作用一定時間后，

16、用潔凈水擦去消毒劑。必要時，使用甲醛熏蒸。第30頁，共34頁。3.9 感染性物質(zhì)溢出在臺面、地面感染性液體溢出的擴(kuò)散途徑大量液體形成不規(guī)則水漬；部分飛濺；小部分形成空氣播散的氣溶膠顆粒處理方式，參見3.63.8第31頁，共34頁。3.10 溢出處理工具對感染性物質(zhì)有效的消毒液，需要按使用要求定期配制（次氯酸鈉溶液的使用濃度為0.51%）。消毒液盛放容器。鑷子或鉗子，耐高壓的掃帚和簸箕，或其他處理銳器的機(jī)械裝置。足量的紙巾或其他適宜的吸附材料。用于盛放感染性溢出物以及清理物品的生物危害袋。橡膠手套。面部防護(hù)裝備，如面罩、護(hù)目鏡、一次性口罩等。溢灑處理警示標(biāo)識，如“禁止進(jìn)入”、“生物危險”等。第32頁，共34頁。3.11 撤離事故區(qū)域發(fā)生生物危險物質(zhì)溢灑時，立即通知房間內(nèi)的無關(guān)人員迅速離開，在撤離房間的過程中注意防護(hù)氣溶膠。