動物細(xì)胞融合和單克隆抗體課件-2

1、動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有： 動物細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞核移植 動物細(xì)胞融合 生產(chǎn)單克隆抗體第1頁，共30頁。2.2.2（1）動物細(xì)胞融合第2頁，共30頁。動物細(xì)胞融合 熒光標(biāo)記的鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合示意圖 第3頁，共30頁。雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去 壁去 壁人工誘導(dǎo)方法？促進(jìn)融合的方法？融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交第4頁，共30頁。動物細(xì)胞融合 動物融合的過程請同學(xué)們閱讀課本P52動物融合第5頁，共30頁。用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核第6頁，共30頁。不同DN

2、A的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂1、動物細(xì)胞融合過程第7頁，共30頁。1、植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？酶解法，如纖維素酶或果膠酶2、動物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因?yàn)閯游锛?xì)胞無細(xì)胞壁3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法問題討論動物細(xì)胞融合第8頁，共30頁。4、動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5、植物體細(xì)胞雜交過程應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的個(gè)體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個(gè)體嗎？不能問題討論動物細(xì)胞融合第9頁，共30

3、頁。問題討論動物細(xì)胞融合7、你能歸納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？6、為什么要用滅活的病毒？病毒一般對生物體是有傷害的。仙臺病毒紫外線喪失感染活性保留融合活性第10頁，共30頁。 動物細(xì)胞融合的概念 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞的過程動物細(xì)胞融合融合后形成的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞第11頁，共30頁。有何同？不同？動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合第12頁，共30頁。主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性用途誘導(dǎo)方法

4、細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動物細(xì)胞融合的比較動物細(xì)胞融合第13頁，共30頁。8、你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？ 利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞9、在生產(chǎn)實(shí)際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？ 生產(chǎn)單克隆抗體動物細(xì)胞融合問題討論第14頁，共30頁。2.2.2（2）單克隆抗體第15頁，共30頁。單克隆抗體 什么是單克隆抗體單：克隆：抗體：單個(gè)細(xì)胞？無性繁殖抗原 抗體特異性結(jié)合第16頁，共30頁。 抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2 . 抗體是如何產(chǎn)生的？單克隆抗體第17頁，共30頁。抗原 動物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞 抗體抗體不純篩選單一漿細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗

5、體產(chǎn)量少、純度低、特異性差單克隆抗體3、傳統(tǒng)制備抗體的缺點(diǎn)是？3、傳統(tǒng)制備抗體的方法是？第18頁，共30頁。如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？單克隆抗體問題討論提示：1 . 什么樣的細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體？2 . 什么樣的細(xì)胞可以無限增殖？瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？共同點(diǎn)：兩者都有無限增殖的能力不同點(diǎn)：瘤細(xì)胞不能轉(zhuǎn)移第19頁，共30頁。 設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜種細(xì)胞單克隆抗體第20頁，共30頁。單克隆抗體制備過程 注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗

6、體（選擇性培養(yǎng)基）選擇性培養(yǎng)基：使親本細(xì)胞不能存活而雜種細(xì)胞可存活單克隆抗體誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？第21頁，共30頁。單克隆抗體制備過程單克隆抗體第22頁，共30頁。B BB B瘤 瘤瘤 瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞單克隆抗體思考：（選擇性培養(yǎng)基）第23頁，共30頁。單克隆抗體思考：1. 小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？2. 制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第24頁，共30頁。單克隆抗體 在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。 生物導(dǎo)彈（作為載體，運(yùn)載

7、抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤） 單克隆抗體的應(yīng)用第25頁，共30頁。小結(jié)兩個(gè)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢單克隆抗體第26頁，共30頁。 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC第27頁，共30頁。1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A動物細(xì)胞融合B胚胎移植C動物細(xì)胞培養(yǎng)D核移植第28頁，共30頁。在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A結(jié)果是相同的B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C操作過程中酶的作用相同D誘導(dǎo)融合的手段相同第29頁，共30頁。. 單克隆