流感亞單位疫苗的制備流程

1、流感亞單位疫苗的制備流程摘要：流感疫苗用于預(yù)防流行性感冒。目前，世界上公認(rèn)的最成熟、最安全的生產(chǎn)方法：雞胚培養(yǎng)法。傳統(tǒng)的雞胚流感疫苗生產(chǎn)大致分為6個(gè)步驟，包括病毒培養(yǎng)、收獲、純化、裂解、滅活和終過(guò)濾，成為單價(jià)流感疫苗原液，這些步驟因不同廠家的工藝不同可有所不同。本文就流感疫苗進(jìn)行大膽設(shè)計(jì)，采用亞單位疫苗的生產(chǎn)工藝流程來(lái)設(shè)計(jì)流感疫苗的生產(chǎn)制備流程。此類疫苗具有很好的安全性。關(guān)鍵詞：流感疫苗；亞單位疫苗；制備過(guò)程流感疫苗用于預(yù)防流行性感冒。適用于任何可能感染流感病毒的健康人，每年在流行季節(jié)前接種一次，免疫力可持續(xù)一年。流感疫苗是預(yù)防和控制流感的主要措施之一。可以減少接種者感染流感的機(jī)會(huì)或者減輕流感

2、癥狀。我國(guó)目前使用三種 HYPERLINK /s?wd=%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%96%AB%E8%8B%97&tn=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLPycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUBtkn10znjm1n6 t /_blank 流感疫苗：全病毒 HYPERLINK /s?wd=%E7%81%AD%E6%B4%BB%E7%96%AB%E8%8B%97&t

3、n=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLPycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUBtkn10znjm1n6 t /_blank 滅活疫苗、裂解疫苗和 HYPERLINK /s?wd=%E4%BA%9A%E5%8D%95%E4%BD%8D%E7%96%AB%E8%8B%97&tn=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLP

4、ycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUBtkn10znjm1n6 t /_blank 亞單位疫苗。每種疫苗均含有甲1亞型、甲3亞型和乙型3種流感滅活病毒或抗原組份。這三種疫苗各有特點(diǎn)：全病毒 HYPERLINK /s?wd=%E7%81%AD%E6%B4%BB%E7%96%AB%E8%8B%97&tn=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLPycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP

5、8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUBtkn10znjm1n6 t /_blank 滅活疫苗免疫原性不錯(cuò)但副作用較大； HYPERLINK /s?wd=%E4%BA%9A%E5%8D%95%E4%BD%8D%E7%96%AB%E8%8B%97&tn=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLPycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF

6、9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUBtkn10znjm1n6 t /_blank 亞單位疫苗副作用較小但免疫原性一般；裂解疫苗免疫原性和副作用比較理想，也是目前世界及中國(guó)使用最為普遍的 HYPERLINK /s?wd=%E6%B5%81%E6%84%9F%E7%96%AB%E8%8B%97&tn=44039180_cpr&fenlei=mv6quAkxTZn0IZRqIHckPjm4nH00T1YLPycLmyn4uWT3uH9bnWf10AP8IA3qPjfsn1bkrjKxmLKz0ZNzUjdCIZwsrBtEXh9GuA7EQhF9pywdQhPEUiqkIyN1IA-EUB

7、tkn10znjm1n6 t /_blank 流感疫苗。裂解疫苗常用雞胚作為病毒生長(zhǎng)介質(zhì)作為培養(yǎng)基質(zhì)來(lái)生產(chǎn)流感疫苗。它首先將不同型別的流感病毒毒株分別接種于雞胚,經(jīng)培養(yǎng)后,收獲其尿囊液,制備主代和工作種子批。將工作種子批接種來(lái)源于封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群雞胚進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng),收獲病毒液,然后經(jīng)超濾濃縮、純化、裂解、滅活、二次純化等步驟,獲得三個(gè)型別的單價(jià)病毒液。本文，主要從亞單位疫苗方面著手設(shè)計(jì)流感病毒的制備原理和制備過(guò)程。一、流感亞單位疫苗制備的原理 通過(guò) HYPERLINK /subview/11756744/12124691.htm t /_blank 化學(xué)分解或有控制性的蛋白質(zhì)水解方法

8、，提取細(xì)菌、病毒的特殊 HYPERLINK /subview/380971/380971.htm t /_blank 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，篩選出的具有 HYPERLINK /subview/11755696/12123639.htm t /_blank 免疫活性的片段制成的疫苗，稱為亞單位疫苗。流感疫苗亞單位疫苗通過(guò)選擇合適的裂解劑和裂解條件，將流感病毒膜蛋白HA和NA裂解下來(lái)，選用適當(dāng)?shù)募兓椒ǖ玫郊兓腍A和NA蛋白。純化的HA和NA蛋白就是流感疫苗亞單位疫苗。二、流感亞單位疫苗制備的過(guò)程（一）流感病毒種子批的制備 （1）流感病毒主代種子批的建立：選取雞胚注入原始流感病毒株。（2）流感病毒工作種子

9、批的建立：從主種子批中選擇血凝效價(jià)高的毒種作為工作種子批的建立毒種。（3）病毒種子批的檢定：鑒別試驗(yàn),病毒血凝效價(jià),病毒感染性滴度等。（二）流感病毒的培養(yǎng)和收獲 分別取各型的工作種子批中的一支,按照前摸索的各型別最佳稀釋度進(jìn)行稀釋,接種于11日齡的封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群雞胚經(jīng)33培養(yǎng)一定時(shí)間后,放入4冷胚過(guò)夜,次日分型分批收獲其尿囊液,在收獲雞胚尿囊液時(shí),溶血、尿酸鹽沉淀、死胚等情況的尿囊液應(yīng)注意不被收入。分別對(duì)不同型別、不同批次的尿囊液進(jìn)行檢測(cè),紀(jì)錄血凝效價(jià),將總收獲的各單型澄清雞胚尿囊液進(jìn)行超濾濃縮。 （三）流感病毒液澄清和超濾濃縮 將各批單型別的病毒原液分別用蓋有120目濾網(wǎng)合并過(guò)濾

10、,將無(wú)菌試驗(yàn)和滅活試驗(yàn)合格的尿囊液進(jìn)行澄清過(guò)濾,即經(jīng)1um濾膜粗濾后,再經(jīng)兩次0.45um濾膜過(guò)濾,最后用相對(duì)分子質(zhì)量1000K的膜包進(jìn)行超濾濃縮,用0.01的PBS作最后濃縮,濃縮液中再加入0.25mol/LPB回收病毒液。 （四）流感病毒液區(qū)帶離心純化 用不同蔗糖濃度作為蔗糖密度梯度,以25000rpm的離心速度離心3h。 （五)流感病毒液的裂解 選擇合適的裂解劑和裂解條件，將流感病毒膜蛋白HA和NA裂解下來(lái)。（六）流感病毒液的滅活 （1）單價(jià)裂解病毒液的滅活摸索。（2）滅活效果試驗(yàn)。（3）抗原免疫效果實(shí)驗(yàn) 以血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)。（4）滅活病毒基因完整性檢測(cè) （5）單向免疫擴(kuò)散法檢測(cè)血凝素含量。 （七） 裂解滅活病毒液二次區(qū)帶離心純化 將裂解滅活后的單型病毒原液超濾,去除蔗糖和大部分裂解滅活劑，進(jìn)行蔗糖密度梯度離心來(lái)純化并收集各區(qū)段病毒液