儀器分析實(shí)驗(yàn)高效液相色譜法課件

1、儀器分析實(shí)驗(yàn)高效液相色譜法High Performance Liquid ChromatographyFor Short：HPLC廈門大學(xué)精品課程儀器分析(含實(shí)驗(yàn))實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私釮PLC儀器基本結(jié)構(gòu),掌握實(shí)驗(yàn)儀器的一般使用方法； 加深對(duì)色譜分離原理的理解，掌握主要實(shí)驗(yàn)條件的選擇； 掌握液相色譜定性定量分析技術(shù)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容反相高效液相色譜法分離測(cè)定烷基苯系物 實(shí)驗(yàn)講解要點(diǎn) 一、色譜分離原理 二、色譜分析技術(shù) 三、 HPLC儀器和使用方法 四、 HPLC和GC的比較 五、 RP-HPLC測(cè)定烷基苯化合物原理 建議在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)比前面的氣相色譜實(shí)驗(yàn)技術(shù)，進(jìn)一步鞏固和提高所學(xué)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能。 一、色譜分

2、離原理色譜法是一類高效分離方法。 色譜分離原理是什么？ HPLC和GC儀器的分離部件是什么？它們有什么不同？ HPLC和GC的主要差別？二、色譜分析技術(shù) 色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其特點(diǎn)是分離能力強(qiáng)、定量準(zhǔn)確，適合于復(fù)雜樣品或多組分樣品分析。 常見(jiàn)的色譜定性方法？ 色譜定量分析的依據(jù)？ 氣相色譜實(shí)驗(yàn)采用那種定量分析方法？有何特點(diǎn)？ HPLC和GC的應(yīng)用特點(diǎn) 三、 HPLC儀器和實(shí)驗(yàn)技術(shù) HPLC儀器的基本組分？ 主要部件的工作原理？ HPLC和GC儀器的比較 HPLC和GC實(shí)驗(yàn)技術(shù)的比較 有人認(rèn)為色譜分析實(shí)驗(yàn)很簡(jiǎn)單，就是打一針樣品而已，你是怎么認(rèn)為的？你是否給病人打過(guò)針？為什么沒(méi)有？四

3、、高效液相色譜儀的基本組成分幾個(gè)系統(tǒng)？和GC有何不同？高壓泵工作原理？GC是如何進(jìn)樣的？記錄系統(tǒng)和GC一樣嗎？高壓泵工作原理（單向閥） 高壓液體有危險(xiǎn)嗎？ 高壓泵如何改變流速？高壓泵工作原理（單向閥） HPLC進(jìn)樣針與GC有何不同？ 為什么HPLC與GC進(jìn)樣要求不同？六通閥工作原理（流路切換）五、 RP-HPLC測(cè)定烷基苯化合物原理 什么是正相色譜？什么是反相色譜？ 什么是鍵合固定相？ 預(yù)測(cè)一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留順序？ 什么是反相色譜疏水機(jī)理？ 本實(shí)驗(yàn)的主要色譜分析條件有那些？ 流動(dòng)相組成對(duì)保留時(shí)間有何影響？舉例說(shuō)明？ 改變檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)色譜圖有何影響？HPLC的溶劑選擇 本實(shí)驗(yàn)采用什

4、么流動(dòng)相？ 什么是HPLC級(jí)甲醇、乙腈溶劑？ 如何獲得超純水？ 本實(shí)驗(yàn)所用的流動(dòng)相如何配制？ 流動(dòng)相為什么要除氣？如何除氣？六、實(shí)驗(yàn)部分 一、溶液配制1 配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 三組分混標(biāo)液：每mL溶液分別含1.00mg苯、甲苯和乙苯。 分別準(zhǔn)確移取0.40、0.80、1.20、1.60和2.00mL三組分混標(biāo)液于10mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶劑定容。2 流動(dòng)相的配制、過(guò)濾和除氣。 五組分混標(biāo)液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 標(biāo)準(zhǔn)苯測(cè)試液。 未知樣品1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)。 二、色譜實(shí)驗(yàn)條件 A組：Waters HPLC儀色譜柱：Nova Pak C18 (3.9150mm, 4m)流動(dòng)相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)流速：0.8 mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm進(jìn)樣體積：20LB組：TSP HPLC儀色譜柱：Hypersil BDS C18 (4.0200mm, 5m)流動(dòng)相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)流速：0.8 mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm進(jìn)樣體積：20L 三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與主要步驟1 更換流動(dòng)相。2 開(kāi)動(dòng)儀器，讓色譜柱平衡。3 設(shè)置色譜工作站參數(shù)。4 進(jìn)