艾滋病實驗室危害評估

1、艾滋病實驗室危害評估 貴州省艾滋病確認中心實驗室1一、 危險程度分類（一）分類 危險度分級 傳染病管理（二）實驗室操作與生物安全防護實驗室級別要求2二、背景資料：（一）一般生物學特性 1.病原學特性 2.培養(yǎng)特性（二）艾滋病毒對外界環(huán)境的穩(wěn)定性1.自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對溫度的敏感性 2.化學因子的敏感性 3.對紫外線等的敏感性3二、背景資料（三）HIV的致病性 （四）HIV的傳播途徑（五）艾滋病的預防、診斷和治療 1.預防 2.診斷 3.治療4三、擬從事實驗活動的危險性分析及相應的預防措施四、工作人員的預防接種和工作人員素質五、評估結論（一）實驗活動的防護措施（二）感染的控制和健康監(jiān)護 5一、

2、危害程度分類（一）分類 危險度分級 傳染病管理 根據2006年中華人民共和國衛(wèi)生部制定的 人間傳染的病原微生物名錄 實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004） WHO實驗室生物安全手冊（第三版.2004） ，Human immunodeficiency virus（HIV） typy1 and 2 virus人類獲得性免疫缺陷病毒（艾滋病毒I型和II型）屬于危害程度第二類的病原微生物,其危險度級。 根據2006年中華人民共和國傳染病防治法，艾滋病屬于乙類傳染病。 6微生物危害程度分級等級危害 （低個體危害，低群體危害） ：不會導致健康工作者和動物致病、的) ：能引起人或動物發(fā)病，但一般

3、情況下對健康工作者、細菌真菌、病毒和寄生蟲等生物因子 危害等級 (中等個體危害，有限群體危害群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險感染有限 7微生物危害程度分級危害等級 （高個體危害，低群體危害）：能引起人類或動物嚴重疾病，或成嚴造重經濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體 危害等級 (高個體危害，高群體危害)：能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體8運輸包裝分類A UN2814（僅病毒培養(yǎng)物為A類

4、）B UN3373（診斷標本、臨床標本、生命物質）9（二）實驗室操作與生物安全防護實驗室級別要求1.病毒培養(yǎng)BSL-32.動物感染實驗ABSL-33.未經培養(yǎng)的感染材料的操作BSL-24.滅活材料及無感染性材料的操作BSL-1。10二、背景資料 （一）一般生物學特性1病原學特性 人免疫缺陷病毒分兩型，即HIV-1和HIV-2。兩者均能引起艾滋病，均為單鏈RNA病毒，分類上屬于逆轉錄病毒科(Retroviridae)，慢病毒亞科 (Lentivirus)。本病毒為圓形或橢圓形，直徑約90140nm，外層為類脂包膜，表面有鋸齒樣突起，內有圓柱狀核心，由RNA逆轉錄酶、DNA多聚酶和結構蛋白等組成。

5、病毒的包膜是糖蛋白gp 120及gp 41。gpl20為外膜蛋白，gp 41為透膜蛋白(transmem brane protein)，起協(xié)助HIV進入宿主細胞的作用。結構蛋白包括p24核心蛋白和p18基質蛋白。11 HIV有9個基因，其中3個基因編碼結構蛋白，即群抗原基因(group specific anti-gen，gag)編碼核心蛋白p24，多聚酶基因(polymerase，pol)編碼多聚酶，包膜蛋白基因 (envelope，env)編碼包膜蛋白gpl20和gp41。尚有3個調節(jié)基因，即反式激活因子 (transactivator，tat)對HIV基因起正調控作用，病毒蛋白表達調節(jié)因

6、子(regulator of expression of virion proteins，rev)能增加gag和env基因對結構蛋白的表達，和負因子 (negative factor，nef)具有抑制HIV增殖作用。另外還有四個基因即病毒感染因子 (virion infectivity factor，vif)，其作用是在一些細胞因子協(xié)同下促進HIV在細胞內復制，R蛋白(viral protein，R.vpr)，能使HIV在巨噬細胞中增殖；U蛋白(viral protein， U.vpu)僅存在于HIV-1中，它能促進HIV-1從細胞膜上釋放。HIV-2核苷酸序列中近40一50與HIV-1相同，

7、在基因組中，不存在vpu基因而有X蛋白(viral protein， Xvpx)，這是HIV-2在淋巴細胞和巨噬細胞增殖時所必需，且能促進病毒粒子的形成。 HIV-2毒力較弱，臨床上潛伏期較長，進展為AIDS所需時間亦較久。12根據env基因V3段堿基排列的不同，HIV-1可分為9個亞型即A、B、C、D、E、F、G和O亞型。HIV既有嗜淋巴細胞性又有嗜神經性，主要感染CD4+T淋巴細胞，也能感染單核巨噬細胞、B細胞和小神經膠質細胞、骨髓干細胞等。 HIV侵入人體后雖然能刺激機體產生抗體，但中和抗體很少，且作用極弱。在血清中同時有抗體和病毒存在的情況下，此血清仍有傳染性。13二、背景資料 2.培

8、養(yǎng)特性人的外周或骨髓中淋巴細胞經PHA刺激4872小時作體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2）12周后，病毒增殖可釋放至細胞外，并使細胞融合成多核巨細胞，最后細胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細胞系如HT-H9、Molt-4細胞作分離及傳代。14二、背景資料HIV動物感染范圍窄，僅黑猩猩和長劈猿，一般多用黑猩猩做實驗。用感染HIV細胞或無細胞的HIV濾液感染黑猩猩，或將感染HIV黑猩猩血液輸給正常黑猩猩都感染成功，但無論黑猩猩或長臂猿感染后都不發(fā)生疾病。15二、背景資料（二）艾滋病毒對外界環(huán)境的穩(wěn)定性1.自然環(huán)境中的穩(wěn)定性與對溫度的敏感性 HIV對熱敏感。5630分失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。不加

9、穩(wěn)定劑病毒-70冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70冰凍3個月仍保持活性。 2.化學因子的敏感性 對消毒劑和去污劑亦敏感，0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來蘇爾處理5能滅活病毒，1%NP-40和0.5%triton-X-100能滅活病毒而保留抗原性。 3.對紫外線等的敏感性HIV0.1甲醛溶液、紫外線和射線不敏 16二、背景資料（三）HIV的致病性HIV感染人體后直接和間接作用于CD4+T淋巴細胞，細胞功能受損和大量破壞，導致細胞免疫缺陷，免疫系統(tǒng)功能嚴重缺損因而促使并發(fā)各種嚴重的機會性感染和腫瘤的發(fā)生。發(fā)展到最后，

10、導致艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合征)常合并嚴重的機會感染，常見的有細胞（鳥分枝桿菌）、原蟲（卡氏肺囊蟲、弓形體）、真菌（白色念珠菌、新型隱球菌）、病毒（巨細胞病毒、單純皰疹病毒，乙型肝炎病毒），Kaposis肉瘤或惡性淋巴瘤。最后死亡。 17二、背景資料（四）HIV的傳播途徑HIV感染者和AIDS病人是傳染源傳播途徑有：1性傳播：通過男性同性戀之間及異性間的性接觸感染。2血液傳播：通過輸血、血液制品或靜脈嗜毒者共用不經消毒的注射器和針頭3母嬰傳播：包括經胎盤、產道和哺乳方式傳播。18二、背景資料（五）艾滋病的預防、診斷和治療1.預防 人類研究艾滋病疫苗已有20余年了，現國際上已進行了120多個艾

11、滋病疫苗的臨床測試，測試疫苗包括重組病毒載體疫苗、DNA疫苗、蛋白/多肽疫苗以及不同疫苗的組合。無論是艾滋病抗體疫苗還是細胞免疫疫苗均尚處于早期階段，所研制的疫苗在理論上均難以克服艾滋病毒所帶來的挑戰(zhàn)。因為艾滋病毒I型至少包括9個亞型和眾多的重組型。而且，病毒可不斷通過遺傳變異，逃逸免疫系統(tǒng)的識別與控制。至今還沒有研制出有效預防艾滋病的疫苗。 19二、背景資料 2.診斷 1）抗體檢測篩查：主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）確證：抗體篩查陽性者可做Western blot （WB，蛋白印跡法）進一步確證。2)抗原檢測用ELISA檢測P24抗原,在HIV感染早期尚未出現抗體時,血中就有該抗原存在

12、.由于P24量太少,陽性率通常較低?，F有用解離免疫復合物法或濃縮P24抗原，來提高敏感性。20二、背景資料 3）核酸檢測用PCR法檢測HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點，目前該法已被應用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。4）病毒分離常用方法為共培養(yǎng)法，即用正常人外周血液分離單個核細胞，加PHA刺激并培養(yǎng)后，加入病人單個核細胞診斷及艾滋病的研究。 21二、背景資料3.治療已有的抗病毒藥物和治療方法，雖不能治愈艾滋病，但實施規(guī)范的抗病毒治療可有效抑制病毒復制，降低傳播危險，延緩發(fā)病，延長生命，提高生活質量。 22三、擬從事實驗活動的危險性分析及相應的預防措施實驗室檢測：要求在生物安全

13、二級防護實驗室進行血清學檢測，操作者應著防護裝備，戴手套。實驗室的污染廢棄物均須無害化處理后方能移出實驗室并交特種垃圾場處置。發(fā)生感染性材料的溢出/灑漏，必須使用吸水材料覆蓋，使用0.5%的次氯酸鈉或其他有效的消毒劑由外向中心噴灑，作用30min后移出。23四、工作人員的預防接種和工作人員素質根據中華人民共和國傳染病防治法全國艾滋病檢測工作管理辦法全國艾滋病檢測技術規(guī)范WHO實驗室生物安全手冊等制定艾滋病檢測實驗室人員健康管理規(guī)定。1.經過規(guī)范的生物安全和艾滋病檢測技術培訓，并經過嚴格考核合格者方能進入其相關實驗操作區(qū)2.實驗室人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進入實驗室工作，皮膚破損者應有

14、嚴格的保護措施或暫時停止工作。3.建立健康監(jiān)護檔案，每年進行HIV抗體檢測。由于人源物質存在其他潛在的感染因子，應盡可能提供有效的預防接種，如乙型肝炎疫苗的接種等。4.貴州省CDC艾滋病確證中心實驗室共有技術人員8名,其中申請進入BSL-2的人員8名,所有技術人員均參加過生物安全培訓,經檢測HIV抗體陰性,健康狀態(tài)良好.24五、評估結論 （一）實驗活動的防護措施 凡是涉及HIV檢測的操作,均可能發(fā)生通過破損的皮膚和黏膜接觸、銳器刺傷等實驗室意外感染，因此涉及HIV陽性樣本的操作應在A2型生物安全柜中進行。上崗前必須接受嚴格的生物安全及艾滋病檢測技術培訓，按照BSL-2實驗室級別進行個人防護。實驗完畢后能高壓的廢棄物在實驗室內121高壓處理20min后才允許運出實驗室，不能高壓的物品用0.5%有效氯的次氯酸鈉浸泡30min以上。25五、評估結論（二）感染的控制和健康監(jiān)護從事HIV研究的實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進入BSL-2實驗室工作，出現下列情況不能進入：孕婦和免疫力低下者，手部、顏面部皮膚破損且不易防護者，已經在BSL-2實驗室控制區(qū)域內連續(xù)工作8小時或由于其他原因造成的處于疲勞狀態(tài)者都不宜從事HIV的檢測操作。26五、評估結論（二）感染的控制和健康監(jiān)護 從事HIV研究的實驗室工作人員在進入實驗室