實驗一abo正反定型及rh定型唾液血型物質(zhì)檢測

1、ABO血型鑒定、Rh血型鑒定唾液中HAB血型物質(zhì)測定 1實驗一 ABO、Rh血型鑒定目的：掌握ABO正反定型的原理、方法及Rh血型鑒定原理：通常利用紅細胞凝集試驗，通過正定型和反定型鑒定ABO血型。正定型是用已知血型特異性抗體（抗-A、抗-B、抗-D等分型血清）來測定紅細胞上有無相應(yīng)的抗原；反定型是用已知血型試劑紅細胞測定血清中有無相應(yīng)的抗體。23器材:小試管、滴管、試管架、離心機、鑒定紙板、載玻片、記號筆、顯微鏡。試劑:1. ABO血型抗體：抗A、抗B；Rh血型抗體： 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。235A型、B型及O型試劑紅細胞。 3. 生理鹽水。標(biāo)本:抗凝靜脈血 4操作（試管法）(1)標(biāo)

2、記試管：正定型：取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明A、B；反定型：取3支小試管分別標(biāo)記Ac、Bc、Oc。(2)配5%懸浮紅細胞：取靜脈血2滴于小試管中，加2ml生理鹽水，混勻，2500r/min離心3分鐘，棄上清；重復(fù)3次。取管底1滴壓積加19滴生理鹽水，即為5%懸紅。(3)加樣：正定型管中分別加入1滴試劑和1滴懸紅，反定型管中分別加入2滴血清和1滴試劑紅細胞。（4）離心：3000rmin離心15秒（1000g）。 (5)結(jié)果：輕搖試管,觀察有無凝集或溶血現(xiàn)象。5操作：玻片法(鑒定紙板) (1)潔凈玻片(鑒定紙板)一張。標(biāo)A、B，分別用滴管滴加A、B試劑1滴，再加受檢者35紅細胞懸液l滴，混勻。 (2

3、)另取潔凈玻片(或鑒定紙板)一張。標(biāo)Ac、Bc、Oc，各加受檢血清2滴，再分別滴加Ac、Bc、Oc懸紅1滴。 (3)室溫輕轉(zhuǎn)動玻片(或鑒定紙板) ，使血清與細胞充分混勻連續(xù)約2min，肉眼觀察凝集(溶血)反應(yīng)。玻片試驗時可用低倍鏡觀察結(jié)果。 6表l ABO血型正反定型結(jié)果試劑血清+受檢紅細胞 受檢血清+試劑紅細胞 （正定型） （反定型） -A -B 受檢血型 Ac Bc Oc A B O AB 78注意事項1.試劑 2.懸紅 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗體 6.老年、兒童 7.污染作業(yè)簡述ABO血型鑒定正反不一致的原因9 4+ 紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3+ 紅細胞凝集成大小塊，血清

4、清晰。 2+ 紅細胞凝塊分散成許多小塊，血清清晰。 l+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞。 鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。mf 混合凝集外觀（mixed field）指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。紅細胞凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)10目的 掌握Rh血型鑒定的原理、方法。原理 Rh血型系統(tǒng)，包括四十幾個抗原，通常使用相應(yīng)的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五種Rh分型血清來檢查紅細胞抗原。在臨床輸血中一般只做D抗原的鑒定，被檢紅細胞和抗D血清凝集者為Rh陽性，不凝集者為Rh陰性。二 、 Rh血型鑒定11器材 小試管、滴

5、管、試管架、記號筆、載玻片、顯微鏡、離心機。試劑1.Rh抗血清：常用的為IgM抗D。2.己知Rh陽性和陰性的5紅細胞懸液各1份3.鹽水溶液。標(biāo)本 靜脈血。12操作(鹽水試管測試法)1.取單克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e試劑各1滴到5支試管中。2.每管各加1滴35待檢紅細胞懸液。3.充分混勻，以1000 g離心15秒。4.觀察結(jié)果：輕搖散開試管底部的細胞扣，用肉眼觀看凝集。5.判定結(jié)果13注意事項1如臨床上只檢查是否為Rh陽性，只需用抗D血清進行鑒別，如結(jié)果為陰性，應(yīng)進一步檢查排除Du型。2因抗e血清難以得到，故臨床上常用四種Rh抗血清來定型。3Rh血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時間，因R

6、h抗原、抗體凝集反應(yīng)塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時，應(yīng)輕輕搖動試管，不可用力振搖。4如鑒定結(jié)果只與抗D血清起反應(yīng)，而與抗C、-c、-E、-e都不凝集，則受檢者為Rh缺失型，以-D-表示。14唾液中HAB血型物質(zhì)測定 【目的】了解唾液HAB血型物質(zhì)測定的原理、方法?！驹怼?HAB血型物質(zhì)也存在于某些人的分泌液中。唾液中HAB血型物質(zhì)為半抗原，能特異性地與相應(yīng)抗體結(jié)合，從而抑制抗體與相應(yīng)紅細胞發(fā)生凝集。所以利用凝集抑制試驗，可測定唾液中HAB血型物質(zhì)，它有助于ABO亞型的分類及其特殊情況下血型的鑒定15【器材】小試管、滴管、試管架、記號筆、離心機【試劑】1. A、B和O型紅細胞鹽水懸液。 2. 最適

7、稀釋度抗血清的制備（標(biāo)化血清） 【標(biāo)本】受檢者唾液161.被檢者漱口后留取自然流出的唾液2ml，將留取的唾液1000g離心，取上清液置于大試管中，煮沸10min，再離心10min，留取上清液備用。 2.排列試管3支，分別標(biāo)明-A、-B、-H，3管各加唾液1滴，每管加相應(yīng)標(biāo)化血清1滴。3.混勻，置室溫，中和10min。4.每管加相應(yīng)懸紅1滴.5. 混勻，離心15秒，觀察結(jié)果.17標(biāo)化血清1.標(biāo)記試管：3排18支，分別抗A、抗B及抗H。每排再標(biāo)2、4、8、16.稀釋：每管加鹽水50l。每排第1管對應(yīng)加抗A抗B及抗H血清50l，倍量稀釋成2、4、8、16稀釋液。.加3懸紅：每排各管對應(yīng)加懸紅50l，振搖混勻，1000g，離心15秒。.結(jié)果：以+為標(biāo)化血清的最適稀釋度。18操作步驟19結(jié)果判定206.取試管兩支分別作陽性及陰性對照管，各加分泌型和非分泌型唾液l滴再加抗H最適稀釋度血清l 滴，以30型紅細胞作指示，同時進行試驗，陽性對照應(yīng)不凝集，陰性對照應(yīng)凝集。21【注意事項】1如果加熱前不離心并除去沉淀，任何可能存在的細胞可釋放H物質(zhì)，使非分泌導(dǎo)致假陽性。2欲得到清晰的不含粘液的液體，最好的辦法是將唾液冰凍