北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素的分離和提取

1、北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素的分離和提取生工082 楊林林導(dǎo)師： 孫思清1北冬蟲(chóng)夏草又稱蛹蟲(chóng)草，與我國(guó)名貴中藥材冬蟲(chóng)夏草為同屬異種，屬于真菌界子囊菌門(mén)麥角菌科蟲(chóng)草屬。其藥理功能主要表現(xiàn)為對(duì)哮喘和支氣管炎具有很好的療效，而且具有增強(qiáng)腎功能等的作用。作為冬蟲(chóng)夏草的替代品之一，北冬蟲(chóng)夏草具有與冬蟲(chóng)夏草相似的活性成分和醫(yī)療保健功效，大量研究表明，其主要活性成分蟲(chóng)草素的含量是野生冬蟲(chóng)夏草的數(shù)十倍，腺苷含量也高出冬蟲(chóng)夏草數(shù)倍。2北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體色素采用固體發(fā)酵人工培養(yǎng)的北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體具有金黃的色澤，是其重要的生理功效成分之一對(duì)其色素成分的研究?jī)H見(jiàn)報(bào)道蛹蟲(chóng)草中含有類胡蘿卜素（付鳴佳 2005，張志軍等 2007）

2、，但未進(jìn)行純化和結(jié)構(gòu)鑒定。對(duì)人工培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草中天然色素進(jìn)行研究將有可能從蟲(chóng)草屬真菌中尋找到功能天然色素，為蟲(chóng)草更多方面的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。3色素的提取蟲(chóng)草色素不溶于乙醚、乙酸乙酯等非極性溶劑,易溶于甲醇、乙醇、水等極性溶劑。稱取0.5 g 粉碎的北冬蟲(chóng)夏草干粉,分別置于250mL具塞錐形瓶中，加入50 mL 不同極性的溶劑中（水、30 乙醇、50 乙醇、80 %乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯）,于室溫下超聲振蕩提取40 min,觀察提取液顏色，在波長(zhǎng)448 nm 處測(cè)定吸光度。根據(jù)結(jié)果選用80%乙醇作為提取劑4子實(shí)體蟲(chóng)草素的檢測(cè)高效液相色譜法（HPLC）、毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE) 毛細(xì)管電泳技術(shù)

3、（CE ）、 液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LCESI-MS）。本次實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法。通過(guò)對(duì)比提取溶劑、料液比、溫度、pH 值及時(shí)間對(duì)提取蛹蟲(chóng)草中色素的影響，以確定色素提取最佳工藝參數(shù)。確定對(duì)色素提取率影響較大的3個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，最終確定最佳條件。5單因素實(shí)驗(yàn)提取溶劑篩選擇：分別稱取約1 g 蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10 份，分別置于50mL 具塞容量瓶，平行兩份中分別加入蒸餾水和30%、50%、70%、90%乙醇40 mL，搖勻后密封于70水浴加熱3 h，冷卻后用蒸餾水定容至50 mL，搖勻過(guò)0.45 m 微濾膜后上 機(jī)，測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量。每個(gè)溶劑梯度兩個(gè)平行樣結(jié)果取均值。提取料液比篩選：分

4、別稱取約1 g 蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10 份，分別按1 10、1 30、1 50、1 70料液比平行兩份加入相應(yīng)體積蒸餾水，搖勻后密封于70 水浴加熱提取3h，冷卻后用蒸餾水定容至50 mL，搖勻過(guò)0 45 m 微濾膜后上機(jī)，測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量。6提取溫度篩選分別稱取約1 g 蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10 份，分別置于50mL 具塞容量瓶，分別加入40mL 蒸餾水搖勻，密封后分別置于50、60、70、80、90加熱提取3h，冷卻后用蒸餾水定容至50mL，搖勻過(guò)0 45 m 微濾膜后上機(jī)，測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量。浸提時(shí)間篩選：分別稱取約1 g 蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干粉10 份，分別置于50mL 具塞容量瓶，加入40 mL 蒸餾水搖勻，密封后置于70水浴，平行兩份分別浸提1、2、3、4 h，冷卻后用蒸餾水定容至50 mL，搖勻過(guò)0 45 m 微濾后上機(jī)，測(cè)定蛹蟲(chóng)草色素的含量。提取pH 值篩選：分別稱取約1 g 蛹蟲(chóng)草子實(shí)體 干粉10 份，分別置50 mL 具塞容量瓶，加入40 mL 蒸餾水，平行兩份分別調(diào)pH 值為3、5、7、9、11，搖勻后密封，于70水浴加熱浸提3 h。冷卻后用蒸餾水定容至50mL，搖勻后過(guò)0 45 m 微濾上機(jī)，測(cè)定蛹蟲(chóng)草中色素含量。7響應(yīng)