分子遺傳學復制

1、關于分子遺傳學復制第一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 滾環(huán)復制的電鏡照片第三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 哪些DNA進行滾環(huán)復制?真核rDNA的擴增,F因子DNA的轉(zhuǎn)移,裂解途經(jīng)的復制, X174,M13.G4等單鏈環(huán)狀DNA噬 菌體 第二階段復制都是進 行滾環(huán)復制的.第四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二.DNA末端起始復制線性雙鏈DNA的復制有的是從一端開始的: 腺病毒（A

2、denovirus） 29 DNAs 脊髓灰質(zhì)病毒（poliovirus)腺病毒DNA全長35937 bp,線性雙鏈，兩端各有反向重復順序103162 bp，兩末端各有50 bp為復制起點。其復制是以單鏈置換（strand displacement）形成一個大的莖環(huán)或叫平鍋形結(jié)構(gòu)來進行的。第八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三.復制的終止1.E.coli的復制終止現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有兩個終止區(qū)域（terE,D,A和ter C,B），位于相遇點的另一側(cè)100Kb處。每一終止順序?qū)δ骋环较蛞苿拥膹椭撇鎭碚f是

3、特異的。ter順序有一個23bp的區(qū)域，在體外可導致復制的終止，但其功能顯示了一定的方向性。終止需要tus(terminus utilization substance)基因的產(chǎn)物Tus(36kD)， Tus能識別ter保守順序，并阻止復制叉繼續(xù)前進。ter-Tus復合物可能通過抑制螺旋酶來實行終止第十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第六節(jié) 復制的過程一.半不連續(xù)復制第十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月E.colidUTPase，它能使dUTP變成dUMP，dUMP是不能作為

4、DNA合成的底物，這樣它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切斷混合尿苷的糖苷鍵，形成無Pu和Py位點（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP內(nèi)切酶在AP位點切出一個缺口，進一步進行切除修復。第十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月以下實驗證實了這個解釋：(1)在dut -突變體（dUTPase缺失）中岡崎片段比在dut +中為短。這是因為U摻入機會增加；(2)在ung- （尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突變體中，新合成的DNA約有一半由片段組成。(3)因為尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不會切除U的糖苷鏈，也就不會出現(xiàn)

5、AP位點，所以堿沉淀時不易斷裂，從而保持了半不連續(xù)的原貌。在dut-, ung-雙突變體中，結(jié)果和實驗（2）相同，更進一步證實了此推測。第十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月酵母的自主復制區(qū)ARS(

6、autonomously replicationg sequence)發(fā)揮復制起點的功能，但是過量的。酵母染色體的著絲粒附近為ARS1序列ARS1分為A,B,C三個功能區(qū), A,B起主要作用,C起次要作用。A區(qū)為15bp,其中11個保守，稱ACS (ARS consensus sequence)。有復制起始子的功能B區(qū)約為80bp,含B1,B2,B3三個功能區(qū)。B3是ABF1（ARS-binding factor 1）結(jié)合區(qū)，第二十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月酵母的復制第二十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月ORC：由6個亞基組成相當于Dna A和 的O蛋白，與 A/

7、B1結(jié)合，結(jié)合于游離的DNA Cdc6:相當于DnaC,及的P蛋白，使Mcm蛋白結(jié)合到復合體上。此對在Origin上起始復制是必須的。 Mcm: DnaB 螺旋酶。即 licensing factorABF1（轉(zhuǎn)錄因子）結(jié)合于B3第二十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 原核和真核生物復制體系的比較E.coli SV40/人 酵母 功能 DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白 DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶 DnaC P ? Cdc6 裝配因子 DnaG DnaG Pol-引發(fā)酶 Pol-引發(fā)酶 引發(fā)酶 Pol的 亞基 P

8、ol Pol,Pol 聚合酶 Pol的亞基 Pol Pol,Pol 校正 Pol的亞基 PCNA PCNA 滑動鉗 復合體 RF-C RF-C 滑動鉗裝配器 SSB RF-A RF-A 單鏈結(jié)合蛋白第二十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 Pvu Bg1 Bam H1 Bam pBR322 TEL TEL 四膜蟲rDNA ARS Pvu Bg1 Bam H 連接 Pvu 轉(zhuǎn)化酵母 Pvu 傳幾代酵母DNA Pvu Pvu 連接 轉(zhuǎn)化酵母 傳幾代 圖 11-56 四膜蟲與酵母TEL的拼接以及酵母細胞將其特有的TEL加到四膜蟲 的TEL上(參考Shampg,J and Blackburn et al: Nature1984,310:154-157) 第三十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十五張，