輔酶Q對SHR大鼠的降血壓效應觀察的論文

1、.：.；輔酶Q對SHR大鼠的降血壓效應的察看徐呈 蘭曉曦 龐文璟 解軼聲 林盟菲 孟晉 方原 吳貽明級法文班指點教師：李稻摘要 目的：探求、比較單用輔酶Q以及輔酶Q與拉貝洛爾結協(xié)作用對SHR大鼠的血壓升高的抑制或降壓的作用，并對輔酶Q的降血壓機制進展初步討論。 方法：實驗組：SHR大鼠只，每天灌輔酶Q mg/day；對照組：SHR大鼠只，每天灌等劑量生理鹽水。喂藥前，測血壓并采血一次，喂藥開場后每間隔五天測一次血壓、心率，喂藥后十五天剪尾采血。第十六天先測定血壓，然后注射拉貝洛爾，min后再測血壓。動物麻醉處死，心臟采血，并取心臟稱重。血清學檢測目的：超氧化物歧化酶SOD，丙二醛MDA。 結果

2、：實驗組動物在輔酶Q 灌胃十五天后，血壓與對照組比較有顯著的下降p.。注射劑量為正常最小劑量的四分之一拉貝洛爾后，實驗組動物血壓降低效應比對照組更明顯。但血清學目的SOD、MDA均無明顯改動。 結論：輔酶Q有明顯的降血壓作用，但其降血壓機制能夠與抗脂質過氧化作用無關。另外，長時間服用輔酶Q能減少普通抗高血壓藥物的運用劑量而到達降壓效果。關鍵詞 高血壓 ；輔酶Q ；拉貝洛爾 ；脂質過氧化Abstract Objective: to compare the hypotensive effect (inhibition of the development of blood pressure) of

3、 Coenzyme Q (CoQ) and CoQ+ Labetalol on spontaneous hypertension rats (SHR). Method: SHR were divided into two groups. We collected blood samples from each of rat . Study group: administration of CoQ (mg/day); control group: placebo (physiological saline), for days. We measured Bp and Hr every days.

4、 th day: collection of the second blood sample. th day: measurement of Bp and injection of Labetalol and minutes later, we measure Bp. We anesthetized the rats, collected the third blood sample from heart and weigh rats hearts. Serumal items: SOD and MDA. Results: after days administration, Bp of th

5、e rats in study group dropped significantly (p.) while that of control group were unchanged. After the injection of one-forth of the minimum dose of labetalol, Bp of the rats in study group dropped more rapidly than that of control group. But the concentration of the items in serum didnt change grea

6、tly. Conclusion: CoQ has a hypotensive effect. It can protect the high risk people and reduce the dose of regular medication (hypotensor). The mechanism of CoQ is independent from its role in anti-lipid peroxydation. Key Word idiopathic hypertension; Coenzyme Q; Labetalol; lipid peroxydation 高血壓是一種常

7、見、多發(fā)病，原發(fā)性高血壓的病因不詳，與遺傳要素和環(huán)境要素親密相關，對高血壓高危人群的防治任務尤為重要。然而傳統(tǒng)的抗高血壓治療主要是控制血壓，不能對因治療，一直不能到達理想效果，也不能起到預防作用，所以需求不斷探求新的維護、降壓的途徑。上世紀年代，人們就曾經發(fā)現了輔酶Q對于高血壓有一定的治療意義。有實驗提示雖然輔酶Q不會大幅度降低血壓，但是可以延伸降壓藥物對血壓控制的時間延伸兩倍，因此提出輔酶Q可以降低其他降壓藥的運用頻率，并具有較好的協(xié)同作用。但是，目前為止，對于輔酶Q的降壓和協(xié)同機制，仍沒有定論。新近發(fā)現脂質過氧化反響能夠參與了高血壓發(fā)生和開展的病理過程。脂質過氧化作用及其產物可以對細胞產生

8、損害，使外周血管阻力升高，誘發(fā)高血壓。同樣有研討闡明，輔酶Q具有較好的抗脂質過氧化的作用。本實驗利用血壓未達平臺期普通在十八周齡的SHR大鼠模擬高血壓高危人群，復制輔酶Q降壓的動物模型，討論其降血壓的能夠機制，以及輔酶Q與腎上腺素、受體阻斷劑拉貝洛爾結協(xié)作用對降低血壓的療效察看，探求協(xié)同用藥的新途徑。資料與方法動物分組與血清制備研討對象 SHR大鼠只，雄性，十六周齡；正常WKY大鼠只，雄性，十六周齡。大鼠均由中國科學院上海動物實驗中心提供且來源于同一窩，體重相近。SHR大鼠初始血壓均接近于高血壓的平臺期，正常WKY大鼠血壓正常。測根底血壓 先將大鼠置于恒溫箱中預熱- min，取出置于大鼠固定網

9、套中，放入已預熱的血壓計固定箱中，由實驗人員經過留出鼠尾測定血壓大鼠血壓計型號：B型RBP大鼠血壓計。在延續(xù)三天測定血壓的根底上，取第二天和第三天的血壓均值作為根底血壓。配對方法 大鼠標號，按其接近血壓平臺期的程度進展配對，再用隨機數法將其分至實驗組和對照組。實驗組：、；對照組：、。血樣采集與血清制備 第一次摘動物眼球取血，采血量約. ml；第二次為剪尾采血，采血量約. ml；第三次在動物麻醉條件下心臟采血，采血量約. ml。采集的血液待凝固后，轉min離心，取上層血清。將制備得到的血清置于eppendorf管中，-保管備用。動物降壓實驗輔酶Q降壓實驗 在測定根底血壓之后，先采集第一次血樣，然

10、后每天中午給大鼠灌胃。實驗組每只大鼠每日灌藥量為mg輔酶Q溶解于ml生理鹽水；對照組灌等量的生理鹽水。延續(xù)灌胃天。其間，一切大鼠每天測定一次血壓、心率在當日灌胃之前。第天，一切大鼠剪尾取血、分別血清。聯(lián)用拉貝洛爾實驗 將實驗組和對照組大鼠分別置于恒溫箱中預熱min后，依次測其血壓。然后肌肉注射拉貝洛爾拉貝洛爾.mg，用生理鹽水稀釋到.ml，注射終了放入恒溫箱，立刻計時。分鐘后，測定其血壓。處死，心臟取血、稱重 大鼠腹腔注射%戊巴比妥鈉. ml麻醉。翻開胸腔，進展心臟采血，分別血清并保管。用鑷子小心提起心包膜，用眼科剪剪開，再用鑷子夾住心尖提起心臟，剪斷相連的動靜脈，取下心臟。沿上下腔靜脈、肺動

11、靜脈、自動脈分別剪開心房、心室，洗凈其中的血液及血凝塊。修剪動靜脈口，使其與心肌壁相平。將心臟放在吸水紙上枯燥min。分析天平稱重。血清學目的檢測 實驗組和對照組三次采集和制備的血清于同一天進展SOD，MDA檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研討所。SOD檢測方法配制試劑試劑一：將A試劑ml加蒸餾水稀釋至ml；試劑二：為B試劑ml；試劑三：為C試劑ml；試劑四：將D試劑.ml用ml 稀釋液:稀釋；試劑五：粉劑A加-熱雙蒸水ml溶解；試劑六：粉劑B加蒸餾水ml溶解；顯色劑配制：按照試劑五: 試劑六:冰乙酸=:的體積比配成避光操作。 測定操作試劑測定管對看管試劑一ml.樣品l蒸餾水l試劑二ml.試劑

12、三ml.試劑四ml.用漩渦混勻器充分混勻，置恒溫水浴分鐘顯色劑ml混勻，室溫放置分鐘，于波長nm處，cm光徑比色杯，蒸餾水調零，比色計算SOD活力U/ml=(對看管吸光度-測定管吸光度)/對看管吸光度%反響體系的稀釋倍數樣本測試前的稀釋倍數MDA檢測方法配制試劑試劑一：將A試劑ml適當水浴加溫至溶解透明；試劑二：將B試劑m加ml雙蒸水混勻；試劑三：將粉劑C參與到-的熱雙蒸水ml中，充分溶解后用雙蒸水補足至ml，再加冰醋酸ml混勻；規(guī)范品：為nmol/ml四乙氧基丙烷ml。測定操作規(guī)范管規(guī)范空白管測定管測定空白管nmol/ml規(guī)范品(l)無水乙醇(l)測試樣品(l)試劑一(l)混勻試劑二(ml)

13、試劑三(ml)%冰醋酸(ml)漩渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小孔，水浴分鐘，取出后流水冷卻，然后-轉/分，離心分鐘。取上清，于波長nm處，cm光徑比色杯，蒸餾水調零，比色計算MDA含量(nmol/ml)=測定管吸光度-測定空白管吸光度/規(guī)范管吸光度-規(guī)范空白管吸光度規(guī)范品濃度樣本測試前稀釋倍數數據統(tǒng)計 運用SPSS .統(tǒng)計軟件進展統(tǒng)計分析，以p.作為有顯著差別，p.作為有非常顯著差別。血壓變化作配對T檢驗。血清學目的進展組間、組內對比，作獨立樣本T檢驗。結 果輔酶Q的降壓效果察看 實驗組動物延續(xù)服用輔酶Q 天，對照組動物服用撫慰劑生理鹽水天內，動物血壓如下圖。經統(tǒng)計處置，顯示

14、實驗組血壓明顯下降(p.)，對照組血壓無明顯變化圖-A。實驗組和對照組動物血壓變化量也具有明顯差別(p.)(圖-B)，闡明輔酶Q對SHR大鼠具有明顯的降血壓作用，并推遲其血壓到達平臺期的時間。A 延續(xù)灌胃天內，大鼠血壓變化量的比較 (n=)。以根底血壓為零，用Bpn-Bp的變化量來表示降壓效果。用配對t檢驗的方法比較兩組之間血壓變化量，p.。B 延續(xù)灌胃天內，大鼠血壓的變化n=。用配對t檢驗的方法分別比較實驗組動物和對照組動物服藥前后的血壓。實驗組：p.，闡明輔酶Q有降血壓作用。 圖 輔酶Q延續(xù)灌胃過程中兩組大鼠血壓的變化比較酶Q對心臟的作用 輔酶Q延續(xù)灌胃天內，實驗組與對照組大鼠心率如表所示

15、，比較兩組心率，沒有明顯差別圖。處死動物后，稱大鼠心重表，兩組比較，差別不明顯圖。延續(xù)灌胃天內，大鼠血壓的變化n=的本身比較。隨著時間變化，實驗組大鼠的血壓隨著輔酶Q的服用，血壓有著明顯的下降趨勢，而對照組的趨勢依然是上升的延續(xù)灌胃天內，大鼠血壓的變化n=的組間比較。隨著時間的變化，在正常對照組血壓不變的情況下，實驗組與對照組相比，血壓有著明顯下降。CD 表服藥天內大鼠心率(次/分)study groupcontrol groupRbRbRbRbRbRb(day )(day )(day )(day )(day )(day )圖延續(xù)灌胃天內，大鼠心率變化次/分n=用配對t檢驗分別比較實驗組大鼠和

16、對照組大鼠服藥前后的心率，p.，闡明輔酶Q對大鼠心率沒有明顯作用。表 服藥天后大鼠心重(g)study groupcontrol group.由于實驗組大鼠死亡只，對照組死亡只，故只能做對配對t檢驗，p.,闡明輔酶Q對心臟負荷也無明顯作用。圖 延續(xù)灌胃天后，兩組大鼠心重比較 (n=). 輔酶Q和拉貝洛爾的結協(xié)作用 確定拉貝洛爾注射劑量實驗。先測定了正常最小劑量.mg對SHR大鼠的時效曲線圖，然后，采用正常最小劑量的四分之一量察看拉貝洛爾min的降壓效應圖，并將注射拉貝洛爾.mg作為與輔酶Q連結合用藥劑量，min后丈量血壓比較兩組的降血壓效果。在輔酶Q延續(xù)灌胃天后，肌肉注射拉貝洛爾.mg，測大鼠

17、血壓變化見表、圖。從圖中可以看出實驗組大鼠血壓下降幅度大于對照組大鼠，這闡明輔酶Q和拉貝洛爾聯(lián)用時，能起到協(xié)同作用(但因動物數量較少，故未作統(tǒng)計學處置，只做景象察看)。圖 /正常最小劑量拉貝洛爾對SHR大鼠的時效曲線。可察看到大鼠血壓較穩(wěn)定地下降，因此決議以/劑量作為正式實驗劑量。表 注射拉貝洛爾后，大鼠血壓變化study groupcontrol groupBpBpBpBp(min )(min )(min )(min )圖 延續(xù)灌胃天內后，肌肉注射拉貝洛爾后，大鼠血壓變化n=因動物數量有限，無法作統(tǒng)計學分析，但從趨勢上分析，運用一樣劑量的拉貝洛爾，實驗組較對照組血壓有更大的下降幅度，因此服用

18、輔酶Q可以降低拉貝洛爾的劑量到達與原先一樣的降壓效果。輔酶Q降壓機制的討論 血清中MDA濃度 服用輔酶Q前后，大鼠血清MDA濃度如表所示，實驗組服用輔酶Q后無下降，對照組卻有所下降，但是無統(tǒng)計學意義，闡明服用輔酶Q 天，并沒起到抗脂質過氧化作用。血清中SOD濃度 服用輔酶Q前后，大鼠血清SOD濃度如表所示，實驗組和對照組十五天后其均值可見明顯變化，但因個體數太少使得變異度相對較大，無統(tǒng)計學意義。闡明服用輔酶Q 天，并沒起到抗脂質過氧化作用。表 大鼠血清MDA變化study groupcontrol groupWKYMDAMDAMDAMDAMDAMDAMDA(day )(day )(day )(

19、day )(day )(day )(day ).表 大鼠血清SOD變化study groupcontrol groupWKYSODSODSODSODSODSODSOD(day )(day )(day )(day )(day )(day )(day ).*血清學分析由于實驗終了時實驗組僅存三只大鼠，因此只作實驗組和對照組各三只大鼠的景象察看。討論輔酶Q (CoQ)，,-二甲氧-甲基-多異戊二烯-苯醌 (,-dimethoxy-methyl -multiprenyl-benzoquinone)，在細胞的生命過程中具有多方面的功能，存在于線粒體，漿膜和微粒體、溶酶體、高爾基體中。輔酶Q有許多亞型，人

20、體中存在的亞型稱為輔酶Q，,-二甲氧-甲基-癸異戊烯-,-苯醌，存在于日常飲食中，并可在人體組織細胞中生物合成，是一種氧化復原酶，在電子轉移和氧化磷酸化耦聯(lián)機制、在呼吸鏈和ATP合成中起了關鍵作用。此外，輔酶Q有抗脂質過氧化的作用，能對細胞產生維護作用。上世紀年代， Yamagami等人就曾經發(fā)現了輔酶Q對于高血壓有一定的治療意義。他們研討了輔酶Q對于經去氧皮質酮deoxycorticosterone或鹽水溶液(saline)誘導的繼發(fā)性高血壓大鼠的作用，發(fā)現經過六周的給藥后，其對于兩者收縮壓均有一定的降低作用。IgarashiT等人察看了輔酶Q對不同高血壓動物模型特別是自發(fā)性高血壓大鼠SHR

21、的作用，實驗發(fā)現：輔酶Q對正常大鼠沒有降壓作用；但在不同的高血壓動物模型中，口服輔酶Q對抑制血壓升高或降低血壓有效。另外，輔酶Q的降壓作用表如今長期反復服藥之后，在急性實驗中即使輔酶Q服用量高達mg/Kg也無效果。同樣，在SHR大鼠模型中，服用mg/Kg輔酶Q對收縮壓mmHg的大鼠無降壓作用，但對血壓更高的大鼠有明顯作用。Yamagami等人以為，不論是對照組還是輔酶Q灌胃實驗組其外周血管阻力均無顯著差別。而Folkers等人經過研討高血壓病人服用輔酶Q后的各項目的變化，提出輔酶Q降低血壓的機制是由于外周阻力的自我調理autoregulation，并以為輔酶Q本身并無直接的降血壓的藥理活性，而

22、是在轉錄程度上增長輔酶Q酶發(fā)揚其降壓作用。由于輔酶Q的降壓作用有限，故有不少學者探求輔酶Q與傳統(tǒng)抗高血壓藥物聯(lián)用效果。Danysz A.等人的實驗先給SHR大鼠喂養(yǎng)一定時間的輔酶Q再注射普通劑量的尼群地平/氨氯地平，分析血壓變化那么提示了輔酶Q不會增大最大降壓幅度，但是可以延伸藥物對血壓控制的時間延伸兩倍，因此提出輔酶Q的運用可以降低其他降壓藥的運用頻率。而Rosenfeldt 也提出將輔酶Q作為一種治療高血壓的輔助藥。在我國，也有人得出了貝那普利血管緊張素轉換酶抑制劑與輔酶Q結合用治療原發(fā)性高血壓比單用貝那普利效果好的結論。氧自在基能攻擊生物膜磷脂中的多不飽和脂肪酸(PUFA)引發(fā)脂質過氧化

23、作用，并構成脂質過氧化物LPO，繼而分解成一系列復雜產物，其中包括丙二醛(MDA)。脂質過氧化作用及其產物可以對細胞產生損害。超氧化物歧化酶SOD是去除自在基的酶。研討闡明，氧自在基損傷血管內皮細胞后，會導致血管內皮細胞功能受損，表現為.血管舒張因子一氧化氮分泌的減少 . 血管內皮細胞反響性降低 。也有證聽闡明超氧陰離子與NO失活有關，即氧化作用加強導致NO損傷，氧自在基是NO損傷的誘導劑，超氧陰離子及氧化型LDL使內源性舒張因子NO失活，而使內皮細胞受損。以上兩者相互作用，使NO含量減少，收縮因子-舒張因子的平衡被突破，血管在收縮因子的作用下發(fā)生收縮，使外周阻力升高，誘發(fā)高血壓。輔酶Q作為一

24、種抗氧化劑，可以對內皮細胞進展維護，他們原先想象其降低血壓的機制能夠就與此有關。其降血壓機制為：()CoQH與ADP-perferryl ion 作用ADP-Fe+O- + CoQH ADP-Fe+ + HO + CoQ( ) CoQH直接去除O- O- + CoQH HO + O + CoQ( ) CoQH脂自在基或脂過氧基反響L + CoQH LH + CoQLOO + CoQH LOOH + CoQ也有證聽闡明超氧陰離子使NO失活有關，即氧化作用加強導致NO損傷，氧自在基是NO損傷的誘導劑，超氧陰離子及氧化型LDL使內源性舒張因子NO失活，而使內皮細胞受損。以上兩者相互作用，使NO含量減

25、少，收縮因子-舒張因子的平衡被突破，血管在收縮因子的作用下發(fā)生收縮，使外周阻力升高，誘發(fā)高血壓。那么,輔酶Q的降血壓作用能否與上述的抗脂質過氧化作用有關呢?經過本實驗研討發(fā)現，實驗組動物的血壓比對照組動物降低p.，而血清SOD的差別也無統(tǒng)計學意義p.。思索到本實驗運用的實驗動物只是十六周齡的大鼠大鼠平均壽命為-年，綜合這幾點推出以下幾種能夠性：輔酶Q的抗高血壓作用并不依賴于其抗脂質過氧化作用。由于MDA是反映脂質過氧化程度的公認目的，所以可以用來衡量血管內皮細胞損傷的程度，而高血壓和脂質過氧化及內皮細胞損傷是互為因果的。在本次實驗中，輔酶Q有明顯的降壓作用，但是大鼠體內的MDA沒有下降。闡明此

26、時輔酶Q的抗脂質過氧化作用還未顯著發(fā)揚，由此，可以以為對十六周齡的SHR大鼠，輔酶Q的降血壓作用并不依賴于其抗脂質過氧化作用。年齡要素對于高血壓的構成機制能夠存在的影響。高血壓的病因多樣，例如遺傳神經-體液要素、胞內鈣離子超載、社會心思要素等等。就人類而言，青年高血壓患者和老年患者其構成、演化機制也不盡一樣。青年患者多為遺傳；而對于老年患者，血管內皮細胞的脂質過氧化就是一個不容忽視的病因。以往的研討大多針對中老年患者，對于青年患者體內能否也存在著抗氧化失衡并到達了直接對血壓產生影響的程度，目前尚未有文獻報導。在本實驗中，他們運用的實驗動物是十六周齡的大鼠大鼠平均壽命為-年。對于比較年輕的大鼠而

27、言，體內脂質過氧化在高血壓構成機制中能夠是非主要要素，故體內MDA濃度和SOD活力與正常大鼠相比并無顯著差別。也就是說，年輕的大鼠體內脂質過氧化還沒有到如上所述的參與高血壓發(fā)病的程度，其高血壓構成能夠主要是由于別的機制。由此，作者提出：青年高血壓患者的血壓構成機制不能單純用脂質過氧化來解釋；脂質過氧化雖然是高血壓進展演化過程中一個不可忽視的要素，但是，單純的脂質過氧化能夠無法引發(fā)高血壓的構成，必需求首先存在一個誘因，使得體內抗氧化機制嚴重失調，從而進一步誘發(fā)大量脂質過氧化物對血管內皮細胞的損害，使血壓的升高變得更加明顯和嚴重。此外，從本實驗可以看出，單純用輔酶Q來治療高血壓達不到理想的效果，必

28、需輔以其他抗高血壓藥物。拉貝洛爾是目前臨床上廣泛運用的一種一線抗高血壓藥物，由于其起效時間短而作用時間長，且可以靜脈注射，因此被用于急診治療高血壓危相。但是，由于它是一種非選擇性的/腎上腺素能受體阻斷劑，因此具有某些副作用如收縮氣管平滑肌，這就限制了其對于某些病人如支氣管炎病人的運用。而假設降低運用劑量，就能減輕其副作用。經過本實驗他們發(fā)現，實驗組的動物由于服用了一段時間的輔酶Q，與未服用輔酶Q的動物相比，只需用小劑量的拉貝洛爾即可到達降壓的效果，由此可以提出一種臨床用藥的新方法。在實驗的第十五天、號大鼠死亡，第十六天號大鼠死亡，由此導致一些數據的不完全。為了找出死因，他們對實驗組號、對照組號

29、大鼠進展了解剖。他們發(fā)現號大鼠死于腦溢血，全身無明顯病變。號大鼠死于肺部感染，肺不張、肺節(jié)段性出血，但腦組織無出血。他們判別對照組的大鼠是由于血壓忽然升高導致血管破裂而死腦卒中，而實驗組大鼠死因和血壓的升高無直接聯(lián)絡。至于輔酶Q維護血管的作用能否參與其中，目前不得而知，有待進一步的研討。綜上所述，他們以為，對于高血壓病人及高血壓高危人群而言，長期服用輔酶Q可以控制血壓，維護機體功能；對于原有支氣管炎等疾病而不適于運用某些抗高血壓藥物的患者而言，在急癥高血壓的治療中也有很大的意義。在本實驗過程中，各教研室教師，特別是病理生理學的張啟良教師，給他們提出許多珍貴的意見和建議，給了他們很大的協(xié)助 。動

30、物房的丁雋教師和嚴國峰教師為他們處理了動物實驗操作中的許多難題，上海市高血壓研討所的強衛(wèi)國所長也抽出時間，處理了許多他們向他咨詢的問題，尤其是他們的導師李稻教師兩個月來放棄大量休憩時間對他們進展協(xié)助 和指點，在此一并表示贊賞。參考文獻：Ernster L.Facts and ideas about the function of coenzyme Q in mitochondria. In:Filkers K,Yamamura Y,eds.Biomedical and Clinical Aspects of Dcoenzyme Q.Voll Elseviet/North-Holland. Amsterdam,Yamagami T. Iwamoto Y. Folkers K. Blomqvist CG. Reduction by coenzyme Q of hypertension induced by deoxycorticosterone and saline in rats. International Journal for Vitamin & Nutrition Research. ():-, .Folkers K. Drzewoski J. Richardson PC. Ellis J. Shi