下載本文檔
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、姓名:徐靜 科目:細(xì)胞實驗山東大學(xué)實驗報告班級:10級生命基地學(xué)號:201000140121題目:葉綠體的分離與熒光觀察同組者:張姍田娜王安琪.實驗?zāi)康?、通過植物細(xì)胞葉綠體的分離,了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法。2、觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光,并熟悉熒光顯微鏡的使用方法。實驗原理葉綠體是植物細(xì)胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器,光合作用就是在葉綠體中 進(jìn)行的。由于具有這一重要功能,所以它一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生 物學(xué)的重要研究對象。葉綠體是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器,利用低速離心 即可分離集中進(jìn)行各種研究。葉肉細(xì)胞中的葉綠體內(nèi)含葉綠素,使植物呈現(xiàn)綠色。葉綠體是細(xì)胞內(nèi)扁 平的橢球形或球形的三
2、個雙層膜細(xì)胞器之一,葉綠體內(nèi)基粒是光合作用的場 所。高等植物(如葫蘆蘚)的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體 可以運(yùn)動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強(qiáng)光灼 傷。在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源;在強(qiáng)光下,葉綠體以其橢 球體的側(cè)面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,觀察到其小葉 內(nèi)葉綠體的形狀不完全一樣。將組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心,是分離細(xì)胞器的常用方 法。一個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度,也同離 心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。在一給定的離心場中,同一時間內(nèi),密度和大 小不同的顆粒其沉降速率不同。依次增加離心力
3、和離心時間,就能夠使非均一 懸浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部,分批收集即可獲 得各種亞細(xì)胞組分。沉降順序為:細(xì)胞核一線粒體 *溶酶體與過氧化 氫酶體 *內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體 *核蛋白體。葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液(0.35 mol / L氯化鈉或0.4 mol / L蔗糖溶液) 中進(jìn)行.以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。將勻漿液在1000 r/min的條 件下離心2min,以去除其中的組織殘渣和一些未被破碎的完整細(xì)胞。然后, 在3000 r/min的條件下離心5min,即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。 分離過程最好在05C的條件下進(jìn)行;如果在室溫下,要迅速分離和觀察。熒光
4、顯微術(shù)是利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行觀測的一種技術(shù)。 某些物質(zhì)在一定短波長的光(如紫外光)的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài),從激發(fā) 態(tài)回到基態(tài)時,就能在極短的時間內(nèi)放射出比照射光波長更長的光(如可見 光),這種光就稱為熒光。若停止供能熒光現(xiàn)象立即停止。有些生物體內(nèi)的物 質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出熒光,稱為自發(fā)熒光(或直接熒光),如葉綠素的 火紅色熒光和木質(zhì)素的黃色熒光等。有的生物材料本身不發(fā)熒光,但它吸收熒 光染料后同樣也能發(fā)出熒光.這種熒光稱為次生熒光(或間接熒光),如葉綠體 吸附吖啶橙后可發(fā)桔紅色熒光。利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行檢測時,將受到許多因素的影 響,如溫度、光、淬滅劑等。
5、因此在熒光觀察時應(yīng)抓緊時間.有必要時立即拍 照。另外,在制作熒光顯微標(biāo)本時最好使用無熒光載片、蓋片和無熒光油。實驗儀器1、器材:(1)主要設(shè)備:普通離心機(jī)、組織搗碎機(jī)、粗天平、熒光顯微鏡。(2)小型器材:燒杯,量筒,滴管,刻度離心管,紗布, 無熒光載片和蓋片2、材料:新鮮菠菜。3、試劑:0.35 mol / L 氯化鈉溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)。實驗方法選取新鮮的嫩菠菜葉,洗凈擦十后去除葉梗及粗脈,稱30g于150ml 0.35mol / L NaCI溶液中,裝入組織搗碎機(jī)。利用組織搗碎機(jī)低速(5 000 r / min)勻漿35min。將勻漿用6層紗布過濾于50
6、0ml燒杯中。取濾液4ml在1000 r / min下離心2 min。棄去沉淀。將上清液在3000 r / min下離心5min,棄去上清液,沉淀即為葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。將沉淀用0.35 mol / L NaCl溶液懸浮。取葉綠體懸液一滴滴于載片上,加蓋片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下 觀察:在普通光鏡下觀察;在熒光顯微鏡下觀察;取葉綠體懸液 一滴滴在無熒光載片上,再滴加一滴0. 01 %吖啶橙熒光染料,加無熒光 蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。實驗結(jié)果1、實驗結(jié)果記錄普通光鏡下,可看到葉綠體為綠色橄欖形,在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部 含有較深的綠色小顆粒,即基粒。以O(shè)lympus熒光顯微鏡
7、為例,在選用B(blue)激發(fā)濾片、B雙色鏡和0ss。(orange)阻斷濾片的條件下,葉綠體發(fā)出火紅色熒光(圖三)。加入吖啶橙染色后,葉綠體可發(fā)出桔紅色熒光(圖四),而其中混有的細(xì)胞 核則發(fā)綠色熒光。2、實驗結(jié)果圖圖一普通顯微鏡中菠菜葉的葉綠體(10 x40)圖二 普通顯微鏡中菠菜葉的葉綠體(10 x40)圖三 熒光顯微鏡菠菜葉綠體(未染色)(10 x40) 圖四熒光顯微鏡中菠菜葉綠體(染色)(10 x40)實驗分析差速離心時要控制號速度和時間,否則會影響最后的葉綠體的觀察,甚至可能無法分離出葉綠體;差速離心只能得到80%純度的葉綠體,要想獲得更純的葉綠體,可以用密度 梯度離心法;差速離心分
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024年鋅錠現(xiàn)貨交收與庫存管理服務(wù)合同3篇
- 2025版大型公共建筑換熱站節(jié)能減排合同3篇
- 生物醫(yī)藥招投標(biāo)操作指南
- 陶瓷業(yè)收款管理規(guī)范
- 2024年航空航天設(shè)備采購服務(wù)協(xié)議3篇
- 保險業(yè)數(shù)據(jù)中心:機(jī)房施工合同
- 建筑物給排水設(shè)備租賃合同
- 體育行業(yè)教練隊伍管理辦法
- 娛樂服務(wù)質(zhì)量管理辦法
- 2025版特色民宿項目經(jīng)營管理承包合同3篇
- 穴位貼敷護(hù)理培訓(xùn)
- 腰椎間盤突出癥護(hù)理查房課件
- JJF(陜) 085-2022 全自動容量稀釋配標(biāo)儀校準(zhǔn)規(guī)范
- DB45T 2866-2024 靈芝菌種制備技術(shù)規(guī)程
- 2024年度區(qū)塊鏈軟件產(chǎn)品知識產(chǎn)權(quán)共享協(xié)議3篇
- 人教版九年級上學(xué)期物理期末復(fù)習(xí)(壓軸60題28大考點(diǎn))
- 粉末銷售合同范例
- 山東省濟(jì)南市2023-2024學(xué)年高一上學(xué)期1月期末考試 物理 含答案
- 科研設(shè)計及研究生論文撰寫智慧樹知到期末考試答案章節(jié)答案2024年浙江中醫(yī)藥大學(xué)
- 2024年江蘇省普通高中學(xué)業(yè)水平測試小高考生物、地理、歷史、政治試卷及答案(綜合版)
- 浙江省杭州市西湖區(qū)2023-2024學(xué)年六年級上學(xué)期期末語文試卷
評論
0/150
提交評論