中老年結直腸腺瘤癌變細胞免疫組化及增殖活性研究

1、中老年結直腸腺瘤癌變細胞免疫組化及增殖活性研究【摘要】目的討論-atenin、P53和增殖細胞核抗原PNA在結直腸腺瘤癌變中的可能作用。方法以免疫組織化學方法檢測77例結直腸腺瘤RA及癌變組織中-atenin、P53蛋白及PNA的表達情況。結果RA隨上皮異型增生程度的進步及癌變的出現(xiàn)，-atenin異常表達逐漸增高P0.01。伴中、重度上皮異型增生的RA和RA癌變組織中，-atenin核表達陽性率明顯高于上皮輕度異型增生的RAP0.01。RA伴輕度異型增生和RA伴中、重度異型增生及RA癌變3組的P53蛋白和PNA表達依次增高，其陽性率分別為10.3%、43.8%、75.0%和17.2%、62.

2、5%、87.5%。在-atenin核表達陽性者中，其PNA的強陽性表達率明顯高于-atenin核表達陰性者69.7%和36.4%，P0.05；在P53蛋白表達陽性者中，其PNA的強陽性表達率明顯高于P53表達陰性者72.4%和37.5%，P0.05。在RA癌變組中，有50%可見-atenin和P53同時表達。結論-atenin、P53和PNA在RA癌變轉(zhuǎn)化過程中可能發(fā)揮了重要作用?！娟P鍵詞】結直腸腫瘤P53蛋白-atenin增殖細胞核抗原免疫組織化學【Keyrds】lretalneplass;P53prtEin;-atenin;prliferatingellnulearantigen;iunh

3、istheisty.結直腸腺瘤AR是一種具有癌變潛能的良性病變1。Zhang等2用流式細胞術，定量研究了RA癌變過程中rasP21、P53表達情況，發(fā)現(xiàn)RA由上皮不典型增生到癌變過程中，rasP21和P53蛋白表達量均呈明顯遞增趨勢。為進一步討論RA癌變機理，我們采用病理形態(tài)學與免疫組織化學相結合的方法，檢測了77例管狀、絨毛狀RA及其癌變組織中-atenin、P53和PNA表達情況。1材料與方法1.1標本來源搜集我院和樂清第三人民醫(yī)院1995年1月2022年1月間中、老年人結直腺瘤癌變的活檢和手術標本77例，按照?全國大腸癌病理研究統(tǒng)一標準?3之標準進展腺瘤分類、異型增生分級和腺瘤癌變的診斷

4、。77例結直腸腺瘤癌變病例中男42例，女35例，年齡4588歲，平均58.9歲。病變發(fā)生在結腸32例，直腸45例。腫瘤直徑1者37例，12者22例，2者18例。病史在12個月內(nèi)62例，12個月以上15例。管狀腺瘤26例，絨毛狀腺瘤24例，管狀絨毛狀腺瘤22例；所有腺瘤癌變標本均伴有輕、中、重度異型增生，本組將異型增生分為兩類：重度級和輕度級或級異型增生。另選10例正常結直腸黏膜組織作為對照組。1.2方法所有標本均經(jīng)中性甲醛液固定，石蠟包埋后行4連續(xù)切片，除常規(guī)HE染色外均同時采用Envsin法免疫組織化學染色標記，觀察-atenin、P53、PNA的表達情況。所有單抗與多抗免疫組化試劑盒均購自

5、福州邁新生物技術開發(fā)公司。實驗步驟按試劑盒說明書進展，3種一抗稀釋度均為1：100。采用Envsin法對全部病例及對照組正常黏膜進展免疫組化染色，染色前用微波爐進展抗原修復。以乳腺癌組織切片作陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。1.3結果斷定1-atenin陽性反響限于細胞膜，而胞漿和胞核無著色者視為陰性；假設細胞核或細胞漿出現(xiàn)棕黃色著色那么視為-atenin陽性。2P53蛋白及PNA均為細胞核表達，呈棕黃色顆粒狀，無陽性反響細胞為-；陽性細胞數(shù)占1%25%者為+；陽性細胞數(shù)占26.5%50%者為+；陽性細胞占51%75%為+；陽性細胞75%為強陽性。1.4統(tǒng)計學處理將實驗數(shù)據(jù)輸入計算機，

6、以PS統(tǒng)計軟件作統(tǒng)計學處理。2結果2.1-atenin的表達10例正常大腸黏膜均可見細胞膜呈棕黃色染色，但細胞核及細胞漿未見著色。29例RA伴輕度不典型增生組中，11例細胞漿陽性，3例細胞核陽性，3例細胞漿及細胞核共同表達；32例RA伴中、重度上皮不典型增生組織中，25例細胞漿陽性，20例細胞核陽性，15例細胞漿及細胞核共同表達；16例RA癌變組中，細胞漿均為陽性表達，10例細胞漿及細胞核共同表達。在RA及其癌變中，部分病例出現(xiàn)細胞漿和細胞核陽性著色，細胞漿和細胞核共同著色者，細胞膜著色減輕。RA腺上皮從不典型增生到癌變過程中，-atenin在細胞漿表達陽性率以及在細胞漿和細胞核共同表達的陽性

7、率逐漸遞增2=14.73,P0.01。中、重度不典型增生組和RA癌變組中-atenin核表達陽性率均明顯高于上皮輕度不典型增生組2=20.08,P0.01。2.2P53的表達10例正常大腸黏膜上皮細胞均未見P53陽性表達。16例RA癌變組織中，有12例75.0%呈陽性表達，其中8例50.0%為強陽性表達圖1；32例RA伴中、重度異型增生的組織中，14例呈陽性表達，占43.8%，僅2例6.3%呈陽性表達；39例上皮輕度異型增生的RA中，僅3例呈弱陽性表達，且僅限于極個別腺體，占10.3%。結果顯示，RA隨上皮異型增生程度的加重到癌變的出現(xiàn)，P53表達明顯遞增2=19.22,P0.05。2.3PN

8、A的表達10例正常結直腸黏膜上皮出現(xiàn)弱陽性表達，陽性細胞位于黏膜腺體基底部，外表分化成熟上皮無陽性表達。隨RA上皮異型增生程度的遞增直至癌變，PNA表達強度也隨著明顯遞增(圖2)2=23.44,P0.01。2.4-atenin表達與P53和PNA表達的關系RA伴輕度異型增生組未見-atenin和P53同時表達，而RA伴中重度異型增生組二者同時表達者占28.1%9/32，RA癌變組那么到達50.0%8/16；2=16.15,P0.05。在-atenin核表達陽性組織中，有69.7%PNA呈強陽性表達圖2，明顯高于-atenin表達陰性者2=8.60,P0.05,提示-atenin在細胞核的積聚中

9、多出如今一些增殖活性高的細胞。在P53蛋白表達陽性者中，PNA均為陽性表達，而且其強陽性者明顯高于P53蛋白陰性者2=23.44,P0.05。此外，-atenin、P53蛋白及PNA表達與患者性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位、大小以及病史無關。3討論-atenin作為細胞間粘連的重要組成成分，在正常細胞質(zhì)游離程度較低。它的主要作用adherin,形成E-adherin-atenin功能復合體，調(diào)節(jié)細胞粘附系統(tǒng)，影響細胞粘附性、運動性，進而影響組織構造和形態(tài)變化。同時，-atenin也參與細胞信號傳導途徑4。RA基因AP是腫瘤抑癌基因，它的突變是大腸腺瘤腺癌序列中較為普遍的基因差異，常發(fā)生在癌變早期階段

10、5。最近研究發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)-atenin程度受AP蛋白調(diào)節(jié)，AP上基因突變可導致-atenin聚集并異位于核上，-atenin分布的檢測可作為評價大腸腫瘤早期開展階段臨床-病理特征潛在惡性的標準6。除AP基因突變，-atenin基因本身突變也可以導致-atenin聚集。有學者認為，-atenin基因突變可能是大腸腫瘤形成的早期事件7。本研究結果顯示，RA隨腺上皮異型增生程度的加重和癌變的出現(xiàn)，-atenin細胞質(zhì)陽性表達率和細胞質(zhì)、細胞核同時表達的比率依次升高，而細胞核的陽性率在RA中、重度異型增生和癌變兩組間未見明顯差異。提示在RA癌變過程中，首先出現(xiàn)-atenin在細胞質(zhì)的異位積聚，而后才出

11、如今細胞核的異位積聚。-atenin異位積聚在RA癌變過程中發(fā)揮著重要作用，其在細胞核和細胞質(zhì)的異位聚集可能反映了RA癌變過程中AP突變或-atenin基因的突變。抑癌基因P53失活表現(xiàn)為突變型P53蛋白的過度表達。本研究發(fā)現(xiàn)，RA由上皮輕度異型增生中、重度異型增生癌變，P53蛋白表達陽性率也隨著遞增，分別為10.3%、43.8%和75.0%，說明P53蛋白過度表達與RA惡性傾向親密相關，提示P53的突變在RA癌變過程中可能發(fā)揮了一定作用。Daalas等8研究了在大腸癌形成過程中-atenin過度表達對P53的影響，發(fā)現(xiàn)-atenin過度表達通過干擾P53降解而導致其聚集。但也有學者提出了不同觀點，認為-atenin與P53在大腸腫瘤中表達無明顯相關性。本研究結果顯示，雖然RA伴輕度異型增生組部分病例可見-atenin異位核表達或P53蛋白的表達，但未見二者同時呈陽性的情況，而RA伴中、重度異型增生組二者同時表達者28.1%，RA癌變組那么到達50.0%。說明-atenin和P53共同表達在RA癌變中可能發(fā)揮著重要作用。PNA是真核細胞DNA聚合酶8的輔助蛋白，在DNA復制中起重