降血壓肽ACE抑制活性及降壓功能研究

1、降血壓肽ACE抑制活性及降壓功能研究【摘要】討論了AE血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性的檢測(cè)方法,并以貽貝為原料制取降血壓肽，研究了不同酶解條件對(duì)其AE抑制活性的影響，然后利用SHR飼喂試驗(yàn)檢測(cè)其降血壓活性。結(jié)果說(shuō)明，降血壓肽有較好的AE抑制活性：其AE抑制率可達(dá)88.08%。同時(shí)動(dòng)物試驗(yàn)說(shuō)明其降壓效果明顯,在SHR飼喂后26h之內(nèi)均有顯著降壓效果，平均降低為1628Hg?！娟P(guān)鍵詞】降血壓肽血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性降血壓【Abstrat】ThetestingethdfAEinhibitryativitiesasstudied,andtheantihypertensivepeptideserederiv

2、edfrytilusrusus,thentheAEinhibitryativitieserestudiedndifferentnditins;theantihypertensiveeffetseretestedbySHR-feedingethd.Theresultsereasflls:theantihypertensivepeptidehadstrngAEinhibitryativities,theAEinhibitryratias88.08%,andtheantihypertensiveeffetasbviusin2t6hurs,theaveragereduedbreadthis1628Hg

3、.【Keyrds】antihypertensivepeptide；angitensin-nvertingenzyeAEinhibitryativities；antihypertensiveeffets降血壓肽本質(zhì)是一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽，它通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶AE，阻礙有升高血壓作用的血管緊張素的生成，同時(shí)抑制具有降血壓作用的血管舒緩激肽的分解，從而使血壓下降，此即降血壓肽的作用機(jī)理1。近年來(lái)國(guó)際學(xué)術(shù)界對(duì)降血壓肽的研究較多，已報(bào)道有以牛奶、乳酪、大豆、魚(yú)肉、蔬菜、小麥蛋白等食物為原料，經(jīng)蛋白酶酶解產(chǎn)生了具有較好AE抑制活性的降血壓肽27。Eiji等8水解了12種食物蛋白進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，

4、從魚(yú)肉、蝦、蟹等水產(chǎn)動(dòng)物蛋白中制得的降血壓肽其降壓活性優(yōu)于其他食物性蛋白。我國(guó)在降血壓肽領(lǐng)域的研究起步相對(duì)較晚，現(xiàn)有報(bào)道以大豆、蛇毒、老酒、茶葉為原料，對(duì)降血壓肽的制備工藝和活性基團(tuán)等方面進(jìn)展了一定研究913；對(duì)于最適宜用于降血壓肽制備的水產(chǎn)動(dòng)物蛋白的開(kāi)發(fā)研究，那么鮮有報(bào)道。貽貝，又名海紅、淡菜，近年來(lái)人工養(yǎng)殖獲得重大成功，在我國(guó)東南沿海產(chǎn)量豐富。但由于加工手段和技術(shù)的落后，在收獲季節(jié)產(chǎn)出的大量貽貝因得不到及時(shí)處理而造成極大浪費(fèi)14。本研究以貽貝為原料，經(jīng)酶解、活性修飾等方法制取降血壓肽，然后利用SHR飼喂試驗(yàn)檢測(cè)其降血壓活性，并分析了其相對(duì)分子質(zhì)量分布和氨基酸組成，以期為貽貝酶解降血壓肽的開(kāi)

5、發(fā)提供理論探究。1材料與方法1.1材料與設(shè)備貽貝：市售。AE標(biāo)準(zhǔn)樣品：Siga試劑。復(fù)合生物酶P1本工程組自行配制，其組分均購(gòu)自上海生物化學(xué)試劑公司。降血壓肽制備所需其他試劑，均為生化純，上海生物化學(xué)試劑公司提供。降壓功能試驗(yàn)用動(dòng)物：SHR自發(fā)性高血壓大鼠，上海高血壓研究所提供。儀器設(shè)備：HPLaters600高效液相色譜儀，大鼠血壓儀RBP-1B及常用試驗(yàn)儀器假設(shè)干。1.2實(shí)驗(yàn)步驟按上面實(shí)驗(yàn)所確定的酶解條件，取新穎貽貝去殼，搗碎，酶解，純化，然后參加活性修飾劑A1,提取，冷凍枯燥，制備降血壓肽，以備分析檢測(cè)之用。將制備的降血壓肽樣品利用SHR飼喂試驗(yàn)來(lái)分析其降壓活性。1.3實(shí)驗(yàn)方法將各酶解液

6、反響值與空白樣品對(duì)照，分析所得酶解降壓肽的AE抑制率P。計(jì)算公式為：P=AAntrlA%測(cè)量方法：尾動(dòng)脈法測(cè)量收縮壓SBP。2結(jié)果2.1AE抑制活性檢測(cè)方法的研究不同濃度HippuriAid吸光值結(jié)果見(jiàn)表1、表2及圖1、圖2。表1不同濃度HippuriAid吸光值0.010.05表2不同濃度HippuriAid吸光值0.100.502.2酶解條件對(duì)降血壓肽AE抑制率的影響將在不同的酶解條件下處理所得降血壓肽樣品按前述方法進(jìn)展AE抑制活性的檢測(cè),分析其AE活性抑制率,研究不同酶解條件對(duì)降血壓肽AE抑制率的影響,結(jié)果見(jiàn)表3。2.3降血壓肽的降壓效果降血壓肽樣品動(dòng)物試驗(yàn)，將樣品以3.0g/kg體重的

7、樣品劑量進(jìn)展灌喂。灌喂前和灌喂之后第2、4、6、8、10h分別檢測(cè)收縮壓一次，記錄各血壓值。結(jié)果見(jiàn)表4。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用各組別服用降血壓肽前后收縮壓的變化情況來(lái)反映降壓效果，數(shù)據(jù)以xs表示，采用SPSS11.0frinds系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)，并進(jìn)展單因素方差分析，各組間進(jìn)展Dunnettt多重比較。分析結(jié)果見(jiàn)表5。表3不同酶解條件對(duì)AE抑制效果影響表4降血壓肽樣品對(duì)收縮壓降壓效果注：0.050.013結(jié)論3.2P1酶最正確酶解條件對(duì)于AE抑制結(jié)果進(jìn)展回歸分析，所得回歸方程為:Y=70.464-1.195X1+15.299X2+11.971X3-4.310X22+0.194X1X2-0.141X3

8、X4根據(jù)方程分析最正確的AE抑制活性為90.23%。但由實(shí)驗(yàn)結(jié)果在此條件下的實(shí)際AE抑制率為86.55%,所以N1為最正確條件。其AE抑制率為88.08%，對(duì)應(yīng)的最正確酶解條件為：酶量25IU/l；酶解時(shí)間2h；pH7.0；酶解溫度60。詳細(xì)分析P1的酶解情況，酶量從25IU/l到175IU/l，酶解時(shí)間27h,隨著酶量的增加和酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，其酶解程度增加，但所得降血壓肽的AE抑制率下降。這是因?yàn)殡S著酶解的進(jìn)展,蛋白質(zhì)逐漸被水解成不同長(zhǎng)度的肽斷，其中部分因構(gòu)造上的某些活性基團(tuán)而具有降血壓活性；但隨著酶解程度進(jìn)步，部分具有AE抑制活性的短肽被酶解成氨基酸或其活性基團(tuán)被破壞，從而導(dǎo)致其AE抑制活

9、性下降。這一點(diǎn)與Ki等18通過(guò)牛皮膠制備酶解降血壓肽的研究得到的結(jié)論相吻合，在酶解過(guò)程中控制酶解程度非常重要，既要使蛋白質(zhì)得到充分的酶解，使更多的活性肽斷被水解出來(lái)，但同時(shí)又要適當(dāng)控制酶解程度，即并非酶解程度最大時(shí)其降壓活性最好。3.3降血壓肽的降壓效果由方差分析結(jié)果，查表得F0.052,94.26，可知對(duì)于處理4h和6h血壓變化的F值F0.052,9，說(shuō)明服用降血壓肽4h和6h效果差異有顯著性0.05。同時(shí)，由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，降血壓肽在26h之內(nèi)均有顯著降壓效果0.05，平均降低為1628Hg。在6h處降壓效果到達(dá)最大值為28Hg，且效果極為顯著0.01。根據(jù)國(guó)內(nèi)外大量隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)結(jié)果，收縮壓降低1014Hg和舒張壓降低56Hg，冠心病減少1/6，總的主要心血管事件減少1/319，從這個(gè)意義上講，貽貝酶解降壓肽的降壓效果非常顯著，隨著今后進(jìn)一步研究，其有望作為一種高