植生實(shí)驗(yàn)生物091

1、植 物 生 理 學(xué) 實(shí) 驗(yàn)陳 瑛091班1、植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)王學(xué)奎主編，高教出版社，2006年2、 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（第三版）張志良、瞿偉菁主編，高教出版社，2003年。 參考書(shū)第二周 植物組織水勢(shì)的測(cè)定 植物細(xì)胞中滲透勢(shì)的測(cè)定第四周植物中總鐵量的測(cè)定第八周葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的測(cè)定 葉綠素a、b的吸收光譜及含量的測(cè)定 第十二周 淀粉酶活性的測(cè)定 時(shí)間安排一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握滲透勢(shì)和水勢(shì)的測(cè)定方法；理解滲透勢(shì)和水勢(shì)的概念；并掌握用移液管配制蔗糖溶液的技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備及材料天平、顯微鏡、毛細(xì)吸管、試管、鑷子；蔗糖、亞甲基藍(lán)、洋蔥、波菜。實(shí)驗(yàn)一 、植物組織水勢(shì)的測(cè)定實(shí)

2、驗(yàn)二、植物細(xì)胞中滲透勢(shì)的測(cè)定三、實(shí)驗(yàn)原理W=S+P+M +GS= - i c R T小液流法四、實(shí)驗(yàn)步驟1、在干潔的試管中配制下列各種濃度的蔗糖溶液各10ml。 最后濃度(M=mol/L) 1M蔗糖母液(ml) 蒸餾水(ml) 0.05 0.5 9.5 0.10 1.0 9.0 0.20 2.0 8.0 0.30 3.0 7.0 0.40 4.0 6.0 0.50 5.0 5.0 0.60 6.0 4.02、在另7支試管中用移液管分別注入對(duì)應(yīng)濃度糖液各2ml，每管用鑷子放入用剪刀剪取的青菜葉片100片，要浸沒(méi)在糖液內(nèi)。封口，每隔數(shù)分鐘輕搖。3、60分鐘后向裝葉的試管中加入亞甲基藍(lán)粉末少許，搖勻

3、，使成蘭色。用干潔毛細(xì)滴管吸取有色液少許，輕輕伸入同濃度對(duì)應(yīng)管糖液中部，再輕輕擠出一小滴，小心抽出滴管，另?yè)Q一支滴管，按同法，取另一管帶色糖液進(jìn)行測(cè)試，觀察有色小液滴升降情況。4、用鑷子撕下洋蔥鱗片外表皮(單層、有色)，直接放在滴有不同濃度糖液的載玻片上，使其展開(kāi)。10分鐘后蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象。確定一個(gè)引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁的角隅上分離的濃度和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度。找出極限后，用新溶液和葉片重復(fù)進(jìn)行幾次，直到確定為止。五、計(jì)算根據(jù)公式= - i c R T，分別計(jì)算植物組織水勢(shì)和滲透勢(shì)。I=1.0T=273+27R=0.0083 LMPa/molKC=體

4、積摩爾濃度，單位mol/L。六、思考題1、為何小液流法測(cè)定的是葉片的水勢(shì)，而質(zhì)壁分離法測(cè)定的是滲透勢(shì)？2、小葉流法中為何加入甲烯藍(lán)，加多加少是否對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響？ 七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、目的2、原理3、實(shí)驗(yàn)步驟4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果-有簽名5、計(jì)算6、分析7、思考題一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握用比色法測(cè)定植物中總鐵量的方法，掌握722分光光度計(jì)的使用及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理Fe2+ + H+ + MnO4- Fe3+ + Mn2+ + H2OFe3+ + 3CNS- Fe(CNS)3 三、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備及材料722分光光度計(jì)、天平、容量瓶;濃鹽酸、硫氰化鉀、高錳酸鉀。實(shí)驗(yàn)三 植株中總鐵量的測(cè)定鮮樣干物質(zhì)C

5、 CO2 H、O H2O N NOx S H2S 、SO2105殺青75烘干600灰化灰分（灰分元素： 少量N，多數(shù)S ,全部的金屬元素和不可揮發(fā)的非金屬元素共60余種）四、實(shí)驗(yàn)步驟灼燒炭化1、灰分100mg + 6mol/LHCl 1.0ml溶解，用0.1mol/LHCl 2ml轉(zhuǎn)移至離心管，搖勻，4000轉(zhuǎn)離心10分鐘，沉淀用0.1mol/L HCl 5ml洗滌，再離心，上清液并入25ml刻度管，蒸餾水定容。2、 試管 0 1 2 3 4 5 6 7 8 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液* 0 0.1 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 0 0 灰分液 0 0 0 0 0 0 0 2.5 2.5 H2O 2

6、.5 2.4 2.1 1.7 1.3 0.9 0.5 0 0各加 KMnO4 1d，6MHCl 1ml，KCNS 1.5ml，丙酮 5ml，邊加邊搖勻，置暗處。 A500nm*：Fe含量為20微克/ ml3、計(jì)算求標(biāo)準(zhǔn)曲線，求相關(guān)系數(shù)值Y=ax+b a= nxy-xy b= y-ax nx2-(x)2 n r = nxy - xy ( nx2-(x)2 ny2-(y)2 )1/2 求灰分中鐵含量。四、思考題高鐵的還原為何用對(duì)苯二酚，其他還原劑是否可替代？ 濕法消化與干法灰化有何區(qū)別與優(yōu)缺點(diǎn)？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握葉綠體色素提取分離方法，進(jìn)一步理解其性質(zhì)，掌握細(xì)胞破壁的一種簡(jiǎn)易方法。 掌握葉綠素a、

7、b的吸收光譜及含量測(cè)定的一種方法，學(xué)會(huì)正確使用紫外分光光度計(jì)。 二、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備及材料天平、研缽、石英砂、碳酸鈣、離心機(jī)、層析紙、層析缸、酒精燈、分液漏斗、紫外分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)四 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)五 葉綠素a、b的吸收光譜及含量測(cè)定光合色素(三大類(lèi))葉綠素類(lèi)(chlorophylls), Chla,Chlb, Chlc,Chld,Chle和細(xì)菌葉綠素a,b等類(lèi)胡蘿卜素類(lèi)(carotenoids) ,胡蘿卜素(carotene) 葉黃素(xanthophyll)藻膽素:藻藍(lán)素(phycocyanobilin) 聯(lián)單藻紅素 (phycoerythrobilin)三、實(shí)驗(yàn)原

8、理在高等植物的葉綠體中，數(shù)量上葉綠素：類(lèi)胡蘿卜素=3：1，a：b=3：1，胡蘿卜素：葉黃素=2：1。不溶于水，溶于有機(jī)溶劑（乙醇、丙酮、石油醚）化學(xué)性質(zhì)-皂化反應(yīng)C32H30ON4MgCOOCH3COOC20H39+ 2KOHC32H30ON4MgCOOCOO+ 2KOH +CH3OH +C20H39OH化學(xué)性質(zhì)-取代反應(yīng)CCCCNCCCCNCCCCNCCCCNHHCCHHCCCH2CHCH3R1H2CH3CCH3CCCCNCCCCNCCCCNCCCCNCuCCHHCCCH2CHCH3R1H2CH3CCH3褐色綠色 吸收光譜四、實(shí)驗(yàn)步驟1、葉綠體色素的提取與分離稱(chēng)取2種新鮮無(wú)大葉脈葉片各1.5

9、g，剪碎，各放入研缽中加純丙酮5ml，少許碳酸鈣(和石英砂)，研成勻漿，倒入離心管,用80%丙酮4ml，沖洗研缽，離心（4000r/min，6分），（上清液即可用于點(diǎn)樣層析）,沉淀再用80%丙酮洗滌后離心，上清液并入25ml刻度管， 80%丙酮定容，即為色素提取液，放暗處。 取長(zhǎng)20cm寬10cm濾紙條，用毛細(xì)管吸取提取液滴在紙條一邊，使色素?cái)U(kuò)展的寬度限制在0.5cm內(nèi)，風(fēng)干后，重復(fù)數(shù)次。然后放在加有50ml 0.5%丙醇（10%丙酮）石油醚的層析缸中展開(kāi)。 待丙醇石油醚將要達(dá)到濾紙邊緣時(shí)取出，吹干后，剪下chla和chlb部分，放在5ml 80%丙酮溶液中，提取純chla和chlb?；蛴勉U筆

10、標(biāo)出各色素位置和名稱(chēng)。2、性質(zhì)測(cè)定螢光現(xiàn)象：取定容液10ml于試管中，用反射光和透射光觀察顏色有何不同，解釋之。光對(duì)葉綠素破壞作用：觀察螢光現(xiàn)象后的溶液分裝兩支試管，一支暗處，一支光下，2hr后觀察顏色變化，解釋之。H+和Cu 2+對(duì)葉綠素分子中Mg 2+的取代作用：取定容液5ml于試管中，加1滴濃HCl，即變成褐色。加醋酸銅晶體一小塊，加熱，則又產(chǎn)生綠色，解釋這一現(xiàn)象。綠色素和黃色素的分離：定容液5ml于分液漏斗中，加乙醚10ml，搖動(dòng)，沿漏斗邊緣加入15mlH2O，輕輕搖動(dòng)，靜止片刻，溶液分為二層，棄下層丙酮和水，再水洗12次。再加3ml30%KOH甲醇溶液，用力搖勻，靜止10min（再加

11、水5ml，搖動(dòng)后靜置），觀察分層，并說(shuō)明。3、吸收光譜曲線及儀器校正 用純的chla和chlb的提取液在紫外分光光度計(jì)上每隔5nm分別測(cè)定其吸收光譜。以波長(zhǎng)為橫座標(biāo)、光密度為縱座標(biāo)，繪制出吸收光譜。 并用其吸收最高峰波長(zhǎng)以作校正。4、葉綠素ab含量的測(cè)定 葉綠素定容液(1/2)在上述校正后的紅光峰值波長(zhǎng)下測(cè)定其光密度值（以80%丙酮作空白）。按下式計(jì)算含量：Ca=12.7OD664-2.69OD645Cb=22.9OD645-4.68OD664 單位： mg/L最后計(jì)算植物葉片中chla和chlb的含量，單位： mg/g鮮重五、思考題1、提取葉綠素時(shí)為何開(kāi)始用純丙酮，后用80%丙酮？2、展層劑

12、還可以用什么溶劑？效果如何？3、為什么要用自己提取的葉綠素溶液進(jìn)行波長(zhǎng)較正？4、如何看熒光現(xiàn)象？5、測(cè)定葉綠素a、b含量為什么要選用紅光的波長(zhǎng)？ 為什么研磨葉片提取葉綠素時(shí)要加入一定量的碳酸鈣?為什么鮮葉干葉的提取液有差別，不同書(shū)上的提取液也有差別，如何比較差異?一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握谷物種子淀粉酶活力的測(cè)定方法，了解淀粉酶的形成，掌握種子萌發(fā)及培養(yǎng)技術(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備及材料天平、培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、具塞刻度試管、研缽、容量瓶淀粉、麥芽糖、檸檬酸緩沖液、小麥種子 實(shí)驗(yàn)六 谷物種子淀粉酶的形成及其活力的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)六 淀粉酶活性的測(cè)定 胚胚乳糊粉盾片胚根三、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)步驟1、麥芽

13、糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作: P175 1 2 3 4 5 6 7麥芽糖標(biāo)液ml 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 蒸餾水 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 03,5二硝基水楊酸 2 2 2 2 2 2 2 搖勻，置沸水浴10分，取出冷卻，定容到25mL。 A540nm麥芽糖標(biāo)液濃度為1mg/mL2、酶液制備: 稱(chēng)取萌發(fā)1天和3天的種子胚乳0.5g（W）于研缽中，加蒸餾水3ml研磨，轉(zhuǎn)入離心管中，再用5ml將研碎物全部洗于離心管中，放置15分鐘，不時(shí)搖動(dòng)，4000r/min離心10分鐘。上清液定容至50ml容量瓶，即為酶液，取5ml，定容于25ml刻度管，即為酶液。3、酶活力的測(cè)定: P175 -1 -2 -1 -2酶液 1.0 1.0 0 0 置70水浴