細(xì)胞支原體污染原因、來源及預(yù)防措施

1、Word文檔 細(xì)胞支原體污染原因、來源及預(yù)防措施 細(xì)胞株若受到細(xì)菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時(shí)，會嚴(yán)峻的影響試驗(yàn)的結(jié)果。而細(xì)菌、真菌等之微生物污染時(shí)，較易自培育基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時(shí)，細(xì)胞之外觀較無明顯變化，但是其污染會造成細(xì)胞之生長速率緩慢、細(xì)胞產(chǎn)生病變之型態(tài)轉(zhuǎn)變等等變化。 各國細(xì)胞庫支原體污染的統(tǒng)計(jì)表，如下：國家 受支原體污染(%) 報(bào)告年度USAFDA 15 1993(past 30 years)USAATCC 15-20 1992Japan(IFO，RIKEN，JCR 803022 1981 1987-19931998GermanyDSM 36 1990

2、-1994Argentina 65 1987Israel 32 1986-1993China 95 1990造成支原體高污染率的緣由為：1.支原體size 0.10.8 um，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um）2.支原體污染時(shí)，沒有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀看到的特征變化3.過去缺乏簡潔、快速且牢靠的檢測方式4.細(xì)胞流通間缺乏品管，造成試驗(yàn)室間的相互污染5.討論或操作人員忽視污染問題而支原體污染了來源:1.已受污染的細(xì)胞2.操作人員的疏失3.已受污染的培育基、血清4.操作環(huán)境不良、試驗(yàn)器具不潔等由于支原體為人體口腔中之正常菌叢，試驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為污染源，須非

3、常留意。而萬一細(xì)胞已受支原體污染時(shí)，最佳的處理原則為將細(xì)胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它干凈的細(xì)胞株。但是若是堅(jiān)持要作去除支原體污染，有以下幾種方法，只不過結(jié)果會與原始的細(xì)胞特性有差異。去除支原體污染：1. 抗生素處理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer）2. Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine3. Anti-sera預(yù)防與掌握方面可從以下各點(diǎn)加強(qiáng)留意：G 設(shè)備方面：1.使用已作支原體測試ok之細(xì)胞株2.于另一隔離之區(qū)域操作未知是否有支原體污染之細(xì)胞3.使用不添加抗生素的培育基培育細(xì)胞G 檢測方面：定期以標(biāo)準(zhǔn)的支原體檢測方法檢測細(xì)胞、培育基、血清、ddH2O有否被支原體污染。G 試驗(yàn)操作人員之無菌觀念與無菌操作技術(shù)之要求有關(guān)支原體污染之問題與回答：o 應(yīng)如何避開細(xì)胞污染？細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原體。 主要的污染緣由為無菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。 嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境