銀杏葉提取物對大鼠慢性高眼壓視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用

1、銀杏葉提取物對大鼠慢性高眼壓視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用【摘要】目的：討論銀杏葉提取物EGb對實驗性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層RGL神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。方法：取安康SD大鼠60只，正常對照組和正常銀杏葉治療組各6只，其余48只采用燒烙法，烙閉大鼠左眼2條淺層鞏膜靜脈，制作大鼠持續(xù)性高眼壓模型，從中選出眼壓穩(wěn)定在實驗要求程度的大鼠30只，隨機(jī)分為生理鹽水組，治療A組每日EGb50g/kg、治療B組每日EGb100g/kg、治療組每日EGb150g/kg、治療D組每日EGb200g/kg，治療時間為1，處死大鼠后做視網(wǎng)膜全層鋪片，對RGL神經(jīng)元做特異性染色后行神經(jīng)元計數(shù)分析來評估神經(jīng)元的情況。結(jié)果：正

2、常對照組雙眼RGL神經(jīng)元計數(shù)比擬無顯著性差異P0.05，正常對照組與正常EGb治療組RGL神經(jīng)元計數(shù)比擬無顯著性差異P0.05，各濃度EGb治療組實驗眼與正常對照組RGL計數(shù)比擬均有顯著性差異P0.05，各濃度EGb治療組實驗眼與其自身對照眼RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異P0.05，各濃度EGb治療組實驗眼與生理鹽水組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異P0.05，治療A，B，D4組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)兩兩比擬均有顯著性差異P0.05。結(jié)論：單獨使用EGb對正常大鼠RGL神經(jīng)元計數(shù)無影響，EGb可對持續(xù)慢性高眼壓導(dǎo)致的大鼠RGL神經(jīng)元損傷提供部分保護(hù)作用，且在一定范圍內(nèi)保護(hù)作用大小與用藥劑量

3、呈正相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】銀杏葉提取物大鼠高眼壓神經(jīng)保護(hù)PrtetiveeffetfextratfginkgbilbaleavesnretinalneurninjuryinhrnihighintraularpressureratsKEYRDS:extratfginkgbilba;rats;highintraularpressure;neurprtetin0引言青光眼是一組由許多因素引起的以視神經(jīng)凹陷性萎縮和視野缺損為共同特征的疾病，其中病理性眼壓升高是最主要的危險因素。所以臨床上的治療方法大都以降低眼壓為主，但是眼壓降低以后，很多時候視神經(jīng)仍就進(jìn)展性損害，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層神經(jīng)元最終仍將凋亡，因此找

4、到一種能保護(hù)RGL神經(jīng)元的藥物，延緩和減少神經(jīng)元的凋亡，有效保護(hù)視神經(jīng)，已經(jīng)成為了當(dāng)今青光眼研究的焦點和熱點。銀杏葉提取物extratfginkgbilbaleaves，EGb是從植物銀杏葉中提取精制而成的純天然藥物。其主要成份為黃酮類和萜內(nèi)酯化合物，還含有有機(jī)酸、多糖、酚類、氨基酸、聚戊烯醇、甾類和微量元素等。近年來許多研究都已證明EGb具有去除自由基、抑制血小板活化因子、抑制一氧化氮合酶、保護(hù)線粒體、抑制谷氨酸毒性等多種生理作用1,2，在此根底上我們研究EGb能否延緩或減少持續(xù)慢性高眼壓對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層RGL神經(jīng)元的損傷。1材料和方法1.1材料由南華大學(xué)實驗動物學(xué)部提供安康Spra

5、gue-Dalay大鼠60只，雌性，體質(zhì)量200240g，812k齡，經(jīng)檢查無明顯歪頸，角膜透明，虹膜血管明晰，瞳孔等大等圓，對光反響靈敏。實驗性飼養(yǎng)3d后，連續(xù)測量3d眼壓，剔除平均眼壓高于或者低于大鼠正常眼壓波動范圍820Hg者3，挑出合格者納入實驗。銀杏葉膠囊三九藥業(yè)黃石制藥廠，0.15g/粒，含銀杏葉提取物40g/粒。1.2方法隨機(jī)挑選6只大鼠為正常對照組，6只為EGb治療正常組，其余均采用燒烙法3，烙閉大鼠左眼2條淺層鞏膜靜脈，制作大鼠持續(xù)性高眼壓模型，右眼不做手術(shù)，作為自身對照，觀察1k，在左眼眼壓穩(wěn)定在26Hg以上者中隨機(jī)挑選出30只納入實驗，然后隨機(jī)分為生理鹽水組，治療A組每日

6、Egb50g/kg、治療B組每日EGb100g/kg、治療組每日EGb150g/kg、治療D組每日EGb200g/kg，每組6只，進(jìn)展灌胃治療1，每日上午一次性給全部藥量。每周監(jiān)測眼壓1次。各組實驗期滿后取視網(wǎng)膜作全層鋪片，甲酚固紫染色后行RGL神經(jīng)元計數(shù)。每張待測視網(wǎng)膜鋪片通過視乳頭對稱畫線，將其分為顳上、顳下、鼻上、鼻下4個象限，并將每一象限視網(wǎng)膜分為3等份，即中央、中間和周邊3區(qū)，各分區(qū)隨機(jī)取3個點，每點面積為325002，然后對每點的視網(wǎng)膜神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)展計數(shù),然后換算成每平方毫米的細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞數(shù)/2),將每區(qū)3點細(xì)胞密度的均數(shù)作為該區(qū)的神經(jīng)元密度。通過形態(tài)學(xué)圖1易于識別RGL中的血管內(nèi)

7、皮細(xì)胞，具有濃染的核并且無尼氏物質(zhì)的細(xì)胞為膠質(zhì)細(xì)胞，這兩種細(xì)胞均不納入RGL神經(jīng)元計數(shù)。統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均在indsXP環(huán)境下運用SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理。統(tǒng)計學(xué)方法采用單因素方差分析ne-ayANVA和t檢驗,顯著性程度為P0.05。圖1大鼠視網(wǎng)膜鋪片顳上象限甲酚固紫400A：治療A組；B：治療B組；：治療組；D：治療D組2結(jié)果正常SD大鼠右眼和左眼的RGL神經(jīng)元計數(shù)分別為(3483.321.5)個/2和(3491.211.9)個/2,雙眼比擬差異無顯著性(P0.05)。且從中央?yún)^(qū)到周邊區(qū)神經(jīng)元計數(shù)逐漸減少。正常EGb治療組與正常對照組比擬差異無顯著性P0.05，各濃度EGb治療組實

8、驗眼與正常對照組RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異(P0.05)，各濃度EGb治療組實驗眼與其自身對照眼RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異P0.05，各濃度EGb治療組實驗眼與生理鹽水組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異(P0.05)。治療A，B，D4組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)兩兩比擬均有顯著性差異P0.05，表1。3討論青光眼是一種臨床常見眼病，也是主要的致盲眼病之一。青光眼導(dǎo)致的視功能損傷是不可逆，后果極其嚴(yán)重。關(guān)于青光眼的神經(jīng)損傷機(jī)制主要包括機(jī)械學(xué)說和缺血學(xué)說，眼壓升高和視神經(jīng)供血缺乏是兩大主要原發(fā)危險因素，另外興奮性氨基酸的毒性、氧自由的損害、一氧化氮的增加、自身免疫攻擊和生長因子的損耗等都加

9、劇著視神經(jīng)的變性和凋亡4。所以近年來對于青光眼的治療在加強(qiáng)眼壓控制的同時，非常注重在低眼壓的情況下對視神經(jīng)的保護(hù)。谷氨酸受體阻滯劑和鈣通道阻滯效果好但副作用也大，神經(jīng)營養(yǎng)因子價格昂貴且又不易通過血腦屏障，為了找到一種價格更廉價、副作用更孝有效保護(hù)視神經(jīng)的藥物，我們選擇了一種已廣泛運用于臨床的傳統(tǒng)中藥EGb，觀察其對高眼壓所致的大鼠視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。我們采用的尼氏染色法是一種堿性染料染色神經(jīng)組織的方法。神經(jīng)元的胞體中含有大量的核糖核酸，主要以尼氏小體的形式存在，它能與堿性染料結(jié)合。尼氏小體在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中與一般細(xì)胞中的不同之處是其發(fā)育良好，我們可以方便的借助染色了的尼氏小體來識別和鑒定神經(jīng)細(xì)

10、胞的存在與分布。本實驗選用甲酚固紫染色后行RGL神經(jīng)元計數(shù)5，操作比擬容易，計數(shù)準(zhǔn)確?？酥屏私?jīng)上丘逆行標(biāo)記RG的某些缺點6，如上丘注射或包埋的部位不能完全準(zhǔn)確一致，標(biāo)記RG不夠均勻，造成RG計數(shù)誤差較大，且實驗周期長，實驗動物可能不能耐受麻醉或手術(shù)操作和死亡7。本研究結(jié)果顯示，正常大鼠右眼RGL神經(jīng)元密度是3483.321.5細(xì)胞數(shù)/2，左眼是3491.211.9細(xì)胞數(shù)/2。單獨使用EGb對正常大鼠RGL神經(jīng)元密度無影響，也沒有見大鼠全身其他不良反響，說明全身使用EGb對正常大鼠是平安的。各濃度EGb治療組實驗眼與生理鹽水組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)均有顯著性差異P0.05說明EGb起到了RGL神經(jīng)元的部分保護(hù)作用。治療A、B、D4組實驗眼RGL神經(jīng)元計數(shù)兩兩比擬均有顯著性差異P0.05,說明在一定范圍內(nèi)EGb保護(hù)作用的大小與用