浙江省年高中生物疑難問題解決專題培訓(xùn)資料：a-淀粉酶

1、a-淀粉酶的固定化與淀粉水解作用的檢測(cè)知識(shí)結(jié)構(gòu) 二、a-淀粉酶的固定化與淀粉水解作用的檢測(cè)一、固定化技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)一、固定化技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)固定化技術(shù)：利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括吸附法、包埋法、化學(xué)結(jié)合法（將酶分子或細(xì)胞相互結(jié)合，或?qū)⑵浣Y(jié)合到載體上）。包埋法化學(xué)結(jié)合法物理吸附法細(xì)胞多采用包埋法固定酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定化反應(yīng)方式 不管是固相柱還是固相懸浮體，回收后，在一定條件下貯存，還可以利用。1.使底物溶液通過裝有固相酶的柱，柱留出液即為酶催化的產(chǎn)物。2.有時(shí)也可將固相酶或固定化細(xì)胞懸浮于底物溶液中，一定時(shí)間后溶液即成酶催化的產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)原理-淀粉酶 -淀

2、粉酶 糖化淀粉酶 淀粉糊精麥芽糖葡萄糖二、-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè) 運(yùn)用吸附法將-淀粉酶的固定在石英砂上。一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定化的-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈紅色，表明水解產(chǎn)物糊精生產(chǎn)。固定化裝置層析柱實(shí)驗(yàn)材料制備5mmol/L KI-I2溶液稱取0.127g碘和0.83g碘化鉀。加蒸餾水100ml。a-淀粉酶的固定化在燒杯中將5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸餾水中。再加入 5g石英砂，不時(shí)攪拌，30分鐘后裝入層析柱中。用10倍體積的蒸餾水洗滌此層析柱以除去未吸附的游離淀粉酶，流速控制為1ml/min?？扇苄缘矸廴芤喝?0mg可溶性淀粉溶于100m

3、l熱水中，攪拌均勻。實(shí)驗(yàn)步驟2.試驗(yàn)后，用10倍體積的蒸餾水洗滌此層析柱，放置在4冰箱里，幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，看是否有相同結(jié)果。1.將灌注了固定化酶的層析柱放在鐵架臺(tái)上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL /min的流速過柱。在流出5mL后接收2mL流出液，加入1-2滴KI-I2 溶液，觀察顏色。用水稀釋1倍后再觀察顏色。吸附有-淀粉酶的石英砂淀粉溶液HST層析住實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1 2 3 41、2mL水+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉濾液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉濾液+12滴KI-I2溶液+稀釋1倍實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我們就可以控制每分鐘滴管流出量為每分鐘6滴（6=0.3mL/ 50uL）。這樣做的目的是控制流速讓淀粉和淀粉酶充分接觸，反應(yīng)。b.顯色。在流出5mL后接取2mL過濾液，然后向試管中加入1