抗ena抗體檢測(cè)及臨床應(yīng)用

1、抗ENA抗體檢測(cè)及臨床應(yīng)用中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科第1頁 半個(gè)世紀(jì)以來本身抗體發(fā)覺和檢 測(cè),推進(jìn)了本身免疫性疾病診療和 治療。 第2頁本身免疫病相關(guān)本身抗體產(chǎn)生人體免疫機(jī)制出現(xiàn)異常 本身成份 作為異體抗原 T細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 MHC細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生本身抗體 第3頁 本身免疫發(fā)生機(jī)制、抗體在本身 免疫性疾病中作用以及免疫耐受 損害依然 是研究熱點(diǎn)。第4頁什么是本身抗體 ?本身抗體產(chǎn)生是易感者（易感基因）在環(huán)境原因（病毒等）誘導(dǎo)下對(duì)本身組織或成份異常免疫反應(yīng)。本身抗體是本身免疫性標(biāo)志。本身抗體產(chǎn)生是本身免疫反應(yīng)，與本身免疫性疾病不一樣義，它早于疾病產(chǎn)生。第5頁本身抗體臨

2、床意義 本身免疫生物標(biāo)識(shí) 預(yù)示本身免疫病 早期診療和分類彌漫性結(jié)締組織病 指示疾病活動(dòng)性、預(yù)后第6頁本身抗體是本身免疫性風(fēng)濕病（ARD）生物標(biāo)識(shí)（Bio-marker）結(jié)締組織病 ANA干燥綜合癥 SSA/SSBab SSAab M3Rab肌炎/皮膚炎 Jo-lab Mi-2ab SRPab （合成酶抗體）系統(tǒng)性硬化病 Scl-70ab ACA 核仁型ANA系統(tǒng)性血管炎 ANCA-PR3 ANCA-MPO ENCA （內(nèi)皮細(xì)胞抗體）原發(fā)性膽汁性 AMA AMA-M2ab 核包膜ab 肝硬變第7頁 抗核抗體譜（ANAs）分類 抗DNA抗體（anti-dsDNA，anti-ssDNA ） 抗組蛋白

3、抗體（histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B復(fù)合物） 抗ENA抗體（抗體: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 , ANAs 抗非組蛋白抗體 Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.） 抗著絲點(diǎn)抗體（ anti-CENP -A , B , C ，D，F(xiàn)，G） 抗核仁抗體（抗體: RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1，Th/To, U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA） 抗其它細(xì)胞成份抗體（高爾基

4、體，中心體，紡錘體，線粒體，溶酶體， 肌動(dòng)蛋白，Vimentin，細(xì)胞角蛋白，Lamin) 第8頁第9頁抗可提取性核抗原（ENA）抗體anti-extractable nuclear antigen antibodies 抗ENA抗體是抗核抗體在臨床診療和治療中 應(yīng)用最多 、最特異一族抗體。第10頁可提取性核抗原（ENA）extractable nuclear antigen ENA：是核物質(zhì)中一類核蛋白總稱，這類核 蛋白能夠用鹽水進(jìn)行提取，所以稱為 可提取性核抗原。成份：核酸與核蛋白，不含DNA，組蛋白。功效：參加細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及蛋白翻 譯合成第11頁可提取性核抗原（ENA）ext

5、ractable nuclear antigen起源： ENA抗原能夠從各種組織中取得，無種 屬間差異，但有顯著組織不均一性。理化特征：ENA抗原對(duì)溫度和RNA酶敏感。 第12頁第13頁抗ENA抗體檢測(cè)方法對(duì)流免疫電泳法( CIE)免疫雙擴(kuò)散法(ID or DID)免疫印跡法(IB)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Protein chip）第14頁對(duì)流免疫電泳(CIE)結(jié)果判斷第15頁免疫雙擴(kuò)散(ID)檢測(cè)結(jié)果判斷上圖為抗Sm、U1-RNP抗體陽性滴度均為1:4下列圖為抗SSA、SSB抗體陽性 抗SSA抗體滴度1:64 抗SSB抗體滴度1:16第16頁第17頁第18頁第19頁 抗Sm抗體

6、：SLE標(biāo)識(shí)性抗體（20%- 30%）。 可早于疾病12 年出現(xiàn)，是前瞻及回顧性診 斷指標(biāo)。 Sm 抗原決定族主要在與U1,U2,U4-u6RNA 連接B和D 蛋白多肽上，分子量： （29KD），B（28KD),D (13.5KD)。 第20頁rRNPrRNPsmsm第21頁 Sm和U1RNP是同一分子復(fù)合物中不一樣 位點(diǎn)，常與U1RNP抗體共存。 SmAb和rRNPAb常同時(shí)檢出，同為SLE 標(biāo)識(shí)性抗體。第22頁 抗U1RNP抗體在各種結(jié)締組織病中存 在,高滴度有利于MCTD診療。 在AID中陽性率40%- 60%。 抗原表位分子量: 73 KD 、32 KD 、 17.5 KD 、28/2

7、9 KD。 第23頁 文件匯報(bào)U1RNP和SmB B有共同 氨基酸序列， 不但Sm Ab和B B C末 端富含脯氨酸區(qū)域結(jié)合，這個(gè)區(qū)域在 其它小核核蛋白尤其是 U1RNP中都 存在，所以它不止是SmAb識(shí)別抗原 表位，也是U1RNP主要抗原表位。第24頁RNPRNPRNPRNPsm第25頁SmU1RNPBB 28/29KD69.9%ID法與U1RNP抗體符合率=74.4%ID法不支持抗Sm抗體 N= 2096第26頁COsm u1Rnp sm第27頁 抗U1RNP抗體在IBT檢測(cè)中最具多態(tài)性 ， 與上述4 個(gè)抗原表位可有不一樣排列組合 連接。說明其在本身免疫中是多克隆、 多位點(diǎn)。在不一樣病人中

8、存在著顯著地 異質(zhì)性 。第28頁第29頁 抗SSA抗體是風(fēng)濕免疫性疾病中出現(xiàn)頻率最高 抗體,陽性率大約 ： 6 0 -75% 。 兩個(gè)抗原表位，分子量 52KD, 60KD。 有文件匯報(bào)：用ELISA法為健康人檢測(cè)抗 SSA 抗體，陽性率17%。在抗SSA抗體陽性系統(tǒng)性 紅斑狼瘡和干燥綜合征病人一級(jí)親屬中用同法 檢測(cè), 陽性率達(dá)25%。 第30頁 抗SSA 抗體在SLE和SS中最多見，經(jīng)常和光過敏、 血管炎、血小板降低、紫癜等相關(guān)。ANA陰性 ScLE經(jīng)常有抗SSA 抗體。 抗SSA 、SSB抗體可造成新生兒狼瘡，嬰兒心臟傳 導(dǎo)阻滯等先天性心臟病。 抗SSB抗體： AID 10 -40%，在P

9、SS,SLE中多見。 分子量45KD、47KD、48KD,在各種檢測(cè)方法中與 抗 SSA抗體伴隨出現(xiàn)。第31頁SSAROSSB第32頁COssBRo52 ssA第33頁 60KDSSA抗原為不連續(xù)表位折疊三級(jí)分子 結(jié)構(gòu)，它天然構(gòu)象是SSA抗原性確保。52KD SSA抗原不依賴這種空間結(jié)構(gòu)，它末端可非特 異和血清中蛋白連接而形成線性表位，所以 特異性較差。第34頁 抗Scl-70抗體：SSc中 25 -75%, 標(biāo)識(shí)性抗體。 抗Scl-70抗體陽性者較陰性者肺間質(zhì)變發(fā)生增加 10倍。 抗Jo-1抗體：PM/DM 25%，標(biāo)識(shí)性抗體。在合并 肺間質(zhì)變PM/DM病人中抗Jo-1抗體陽性率高達(dá) 60%

10、。 抗rRNP抗體： SLE特異性抗體（10%-30%） 抗rRNP抗體與dsDNA、與SSA/RO、ACL相關(guān)。 滴度升高僅限于SLE,其它疾病極少見。第35頁第36頁 抗可提取性核抗原（ENA）抗體anti-extractable nuclear antigen antibodies 抗Sm抗體：SLE標(biāo)識(shí)性抗體（20%-30%） 抗U1RNP抗體：MCTD 95 -100%（高滴度） 抗SSA抗體： CTD 6 0 -75% 抗SSB抗體： CTD 10 -40%，PSS,SLE 抗Scl-70抗體：SSc 25 -75%, 標(biāo)識(shí)性抗體 抗Jo-1抗體：PM/DM 25%，標(biāo)識(shí)性抗體 抗

11、rRNP抗體： SLE特異性抗體（10%-30%）第37頁抗ENA抗體檢測(cè)方法對(duì)流免疫電泳法( CIE)免疫雙擴(kuò)散法(ID or DID)免疫印跡法(IB)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Protein chip）第38頁ENA抗體譜芯片 - Luminex技術(shù)第39頁BioPlex 2200第40頁P(yáng)late-Based Multiplex Assay System ArrayELISA第41頁ELISAArrayArrayELISA第42頁Sm RNPSS-ASS-BScl-70Jo-1+-+-+-+ + -+-ENA抗體檢測(cè)結(jié)果( Array-ELISA)Image第43頁本身抗體預(yù)示著本身免疫風(fēng)濕性疾?。ˋRD）易感性 若干年 本身抗體（+）若干時(shí)間（基因） 無癥狀 環(huán)境 環(huán)境 本身抗體先于ARD出