腸道致病菌檢驗(yàn)

1、腸道致病菌檢測(cè)1腸桿菌的共同特點(diǎn)1、相似的形態(tài)染色：G桿狀2、簡(jiǎn)單的培養(yǎng)條件3、活潑的生化反應(yīng) 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌 腸道致病菌多數(shù)不發(fā)酵乳糖；腸道非致病菌多數(shù)發(fā)酵乳糖 葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)：G-桿菌發(fā)酵菌和非發(fā)酵菌 氧化酶試驗(yàn)：鑒別腸菌科和弧菌科 腸菌科氧化酶：；弧菌科氧化酶：+24、抗原構(gòu)造復(fù)雜：O、H、K、Vi抗原5、抵抗力不強(qiáng)6、易變 耐藥性變易 毒力性變易 生化反應(yīng)性變易3第一節(jié) 志賀菌屬（Shigella）可引起人類痢疾及急性胃腸炎。本屬細(xì)菌多侵犯人腸道粘膜，很少侵入血流。臨床上通常以糞便及直腸拭子作分離培養(yǎng)。4一、培養(yǎng)特性液體培養(yǎng)基呈均勻混濁生長(zhǎng)，不形成菌膜及

2、沉淀。血平板：灰白色、半透明、表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊、中等大小、不溶血。MAC、XLD等選擇性分離平板：無(wú)色透明、中等大小、表面光滑濕潤(rùn)（宋內(nèi)氏志賀菌易形成粗糙型菌落）。5二、生化初篩 TSI或KIA：K/A（福氏志賀菌6型可產(chǎn)少量氣體） 半固體上動(dòng)力：6三、血清學(xué)分型 表1 志賀菌屬血清學(xué)分型7注1、四種志賀菌多價(jià)血清僅包括A1、A2、B群多價(jià)和D群血清。2、四種志賀菌多價(jià)血清不凝集時(shí)，應(yīng)考慮有K抗原的存在，將培養(yǎng)物制成濃菌液，10030min水浴后再進(jìn)行凝集。若仍不凝集，用C群多價(jià)血清和A群3型12型血清進(jìn)行凝集。3、四種志賀菌多價(jià)血清凝集，而相應(yīng)的群、型血清均不凝集，且菌落較粗糙，可用宋

3、內(nèi)氏志賀菌相（粗糙型）血清做凝集。8四、系統(tǒng)生化鑒定選用下列之一進(jìn)行：1、選用符合國(guó)家或國(guó)際質(zhì)量認(rèn)可的市售商品化鑒定系統(tǒng)2、葡萄糖銨、西蒙枸櫞酸鹽、V.P、苯丙氨酸脫氨酶、賴氨酸脫羧酶、KCN、水楊苷，志賀菌屬均為陰性反應(yīng)。9五、結(jié)果報(bào)告 根據(jù)生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定結(jié)果，符合志賀菌的，可報(bào)告“檢出XX志賀菌”；如不符合則報(bào)告“未檢出志賀菌”。10第二節(jié) 沙門菌屬（Salmonella）無(wú)莢膜大多數(shù)血清型以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，但有發(fā)生不運(yùn)動(dòng)的突變型。 雞沙門菌、雛沙門菌通常不運(yùn)動(dòng)。11一、培養(yǎng)特性液體培養(yǎng)基內(nèi)均勻混濁生長(zhǎng)；血平板、SS和MAC平板：中等大小、無(wú)色半透明、表面光滑、邊緣整齊。產(chǎn)H2S菌株在

4、SS平板上可形成中心黑色的菌落。大多數(shù)甲型副傷寒沙門菌和部分豬霍亂沙門菌不產(chǎn)生H2S。傷寒沙門菌、丙型副傷寒沙門菌和都柏林沙門菌具有Vi抗原。12二、生化初篩TSI或KIA、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)在TSI或KIA上斜面產(chǎn)酸、底層產(chǎn)酸，同時(shí)賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性的菌株可排除。符合以上生化反應(yīng)加做：靛基質(zhì)、尿素、KCN13表2 沙門菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表序號(hào)H2S靛基質(zhì)尿素KCN賴氨酸A1+-+A2+-+A3-+/-注：+陽(yáng)性；-陰性；+/-陽(yáng)性或陰性。A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇，沙門菌均為陽(yáng)性。A3：補(bǔ)做ONPG，沙門菌為陰性。14三、系統(tǒng)生化鑒定選用符合國(guó)家或國(guó)際質(zhì)量認(rèn)可的商品化生化鑒定系統(tǒng)15四、血清

5、學(xué)試驗(yàn)Vi抗原能阻礙O抗原與相應(yīng)O抗血清凝集。破壞Vi抗原方法：挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸即可。16五、結(jié)果報(bào)告綜合生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告“檢出XX沙門菌”或“未檢出沙門菌”。17第三節(jié) 副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）VP是一種嗜鹽性細(xì)菌，可污染食品，特別是海產(chǎn)品。在我省，VP是引起的食物中毒的主要病原菌之一，占60%左右。形態(tài)：具有多形性，運(yùn)動(dòng)活潑。18一、培養(yǎng)特性生長(zhǎng)條件類似霍亂弧菌，不同之處是VP的嗜鹽性。無(wú)鹽培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，最適鹽濃度是3.5%。TCBS：圓形、光滑濕潤(rùn)、中心顏色較深的綠色菌落。氯化鈉蔗糖瓊脂平板：圓形、光滑濕潤(rùn)、中心顏色較深的藍(lán)綠色菌落。19科瑪嘉弧菌顯色平板：圓形、光滑濕潤(rùn)、中心顏色較深的紫紅色菌落。MAC：不生長(zhǎng)或菌落扁平、半透明。SS：不生長(zhǎng)或小、扁平粘韌性菌落，不易挑起，或能拉絲。EMB：一般不生長(zhǎng)神奈川試驗(yàn)：在我妻氏瓊脂上產(chǎn)生溶血。20二、初步鑒定氧化酶試驗(yàn)：+涂片鏡檢：G，呈棒狀、弧狀等多形態(tài)，無(wú)芽胞。3%氯化鈉TSI：K/A嗜鹽性試驗(yàn)：0%鹽胨水：，3 %鹽胨水：+， 6%鹽胨水：+， 8%鹽胨水：+