【檢驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目課件

1、【檢驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目【檢驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目課程設(shè)置學習情境設(shè)計載體學習領(lǐng)域檢測項目體液蛋白質(zhì)檢測項目糖代謝紊亂檢測項目血脂代謝及檢測項目鈉鉀氯和酸堿平衡檢測項目鈣、鎂、磷檢測項目臨床生物化學檢驗技術(shù)基礎(chǔ)物質(zhì)代謝檢測疾病代謝異常檢測器官生理病理檢測酶學技術(shù)及器官功能檢測肝膽生化及檢測項目 腎臟生化及檢測項目心臟標志物的檢測項目內(nèi)分泌功能及其檢測項目腫瘤標志物及其檢測項目特殊生化檢測妊娠的生物化學檢驗項目新生兒的生物化學檢驗項目器 官疾 病對 象物 質(zhì)載體學習情境子情境課程設(shè)置學習情境設(shè)計載體學習領(lǐng)域檢測項目體液蛋白質(zhì)檢測項目臨情境一、基礎(chǔ)物質(zhì)代謝生化檢測體液蛋白質(zhì)檢測項

2、目血脂代謝及檢測項目 糖代謝紊亂檢測項目鈉鉀氯和酸堿平衡檢測項目鈣、鎂、磷及微量元素檢測項目 學習領(lǐng)域?qū)W習情境子情境情境一、基礎(chǔ)物質(zhì)代謝生化檢測體液蛋白質(zhì)檢測項目 學習 子情境1 體液蛋白質(zhì)生化檢測項目概述疾病時體液蛋白質(zhì)體液蛋白質(zhì)測定 子情境1 體液蛋白質(zhì)生化檢測項目概述免疫功能: IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgG subclasses 1-4、IgE、C1抑制物腎臟功能: 白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、IgG 、 a1-微球蛋白、 B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、 Kap-輕鏈、Lam-輕鏈、Cystatin C炎癥: CRP、a1-酸性糖蛋白、 觸珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、

3、銅蘭蛋白、纖維蛋白原類風濕性疾病: RF、ASL、CRP心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoA II、ApoE、Lp(a)、肌紅蛋白、纖維蛋白原、hsCRP營養(yǎng)監(jiān)測: 前白蛋白、白蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白出 / 凝血疾病: 纖維蛋白原、AT3、纖溶酶原、大部分凝血因子貧血: 觸珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體涵蓋最廣泛的臨床檢測指標免疫功能: IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、L第一節(jié) 概 述蛋白質(zhì)（protein)是體內(nèi)含量最豐富的生物大分子。作為生物體的基本組織成分，人體幾乎所有的器官組織都含有蛋白質(zhì)，其含量占人體固體成分45，而在細胞中可達細胞

4、干重的70以上，一個細胞約有30005000種蛋白質(zhì)。在人體生長發(fā)育、組織修復(fù)、物質(zhì)代謝、活動血液凝固、肌肉收縮、防御、細胞之間的信息傳遞等生命活動中，蛋白質(zhì)起著非常重要的、不可替代的作用。第一節(jié) 概 述蛋白質(zhì)（protein)是體內(nèi)含量最豐富的生體液蛋白質(zhì)的檢測：疾病發(fā)生體液蛋白質(zhì)異常體液蛋白質(zhì)的檢測：疾病發(fā)生體液蛋白質(zhì)異常一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類 1、血漿蛋白質(zhì)的組成： 目前已經(jīng)研究的血漿蛋白質(zhì)有500種，分離出純品近200 種，檢驗科常見進行分析大約有 100種。血漿中蛋白質(zhì)含量差別很大，范圍g/L-g/L。 大多數(shù)由肝臟合成，少量由其他組織合成。 2、血漿蛋白質(zhì)的功能： 營養(yǎng)作

5、用 維持膠體滲透壓維持正常PH 運輸作用免疫與防御功能催化作用抑制組織蛋白酶 代謝調(diào)節(jié)凝血、抗凝血及纖溶作用。一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類 1、血漿蛋白質(zhì)的組成：氨基酸性質(zhì)：兩性電離及等電點、紫外吸收、呈色反應(yīng)。生物大分子：膠體性質(zhì)、變性、沉淀和凝固等特點。 蛋白質(zhì)性質(zhì)蛋白質(zhì)的分離透析、沉淀、鹽析、電泳、層析、超速離心氨基酸性質(zhì)：兩性電離及等電點、紫外吸收、呈色反應(yīng)。 蛋白分類：依據(jù)來源、分離方法和生理功能 來源肝生成：絕大多數(shù)血漿蛋白質(zhì)其他組織細胞生成：免疫球蛋白和蛋白類激素3、血漿蛋白質(zhì)的分類分類：依據(jù)來源、分離方法和生理功能 來源肝生成：絕大根據(jù)分離方法：鹽析法：白蛋白和球蛋白兩大類

6、（各種蛋白質(zhì)的親水性和所帶的電荷均有差別。）（pH7.0半飽和的硫酸銨溶液）電泳法（醋酸纖維素薄膜）：白蛋白、1球蛋白 、 2 球蛋白、 球蛋白、纖維蛋白原、球蛋白。 電泳法：瓊脂糖凝膠電泳：13種聚丙烯酰胺凝膠電泳：30種SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：300種-+纖維蛋白原醋酸纖維素薄膜醋酸纖維素薄膜: 5根據(jù)分離方法：電泳法：瓊脂糖凝膠電泳：13種聚丙烯酰胺凝膠電白蛋白（4060）1-球蛋白（1-抗胰蛋白酶、血清類粘蛋白、1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白）2-球蛋白（-脂蛋白、觸珠蛋白、銅藍蛋白、2-巨球蛋白）-球蛋白（轉(zhuǎn)鐵蛋白、血紅素結(jié)合蛋白、 微球蛋白、纖維蛋白原、 脂蛋白、補體）-球蛋白

7、（各種免疫球蛋白主要位置及C-反應(yīng)蛋白）電泳法分類白蛋白（4060）電泳法分類根據(jù)生理功能分類：根據(jù)生理功能分類：（一）、白蛋白（albumin , Alb) 肝實質(zhì)細胞合成，分子量66 458， 半衰期1519天，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占4060。 二、一些臨床常檢測血漿蛋白質(zhì)二、一些臨床常檢測血漿蛋白質(zhì) 白蛋白是血清中含量最豐富的蛋白質(zhì)，占血清蛋白質(zhì)總量的一半以上。在pH8.6條件下電泳分離血清蛋白質(zhì)，它很快向正極方面移動，速度僅次于前蛋白。白蛋白在肝臟合成，占肝臟合成總蛋白質(zhì)量的18。肝細胞不貯存白蛋白，合成后很快被代謝。 由于白蛋白在血漿中濃度高而且分子量小，其主要生理功能是維持血

8、液膠體滲透壓；另外，白蛋白能結(jié)合諸如膽紅素之類的疏水分子，在體內(nèi)擔負轉(zhuǎn)運各種離子、酶類、脂溶性物質(zhì)、激素和藥物的功能；在機體營養(yǎng)作用中也起重要作用。 1、血液中白蛋白 白蛋白是血清中含量最豐富的蛋白質(zhì)，占血清蛋白質(zhì) 2、在腦脊液(CSF)中，白蛋白是最常見的蛋白質(zhì)。由于白蛋白只在肝臟合成，所以CSF中白蛋白 全部來自血液。 CSF中白蛋白增高與血腦屏障通透性增高有關(guān)。 可見于多發(fā)性硬化癥、病毒性腦炎或腦膜炎、細菌性腦膜炎等顱內(nèi)和椎管內(nèi)炎癥性疾病和某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。 參考值范圍： 血清白蛋白3555gL CSF白蛋白134237mgL 2、在腦脊液(CSF)中，白蛋白是最常見的蛋白質(zhì)。由 3、微

9、量白蛋白尿 尿白蛋白： 正常成人 尿白蛋白 大約0-20mg/L 兒童 尿白蛋白 0 13.3mg/24h 尿AlbCr(肌酐) ACR2.5mgmmol 尿中白蛋白超過以上數(shù)值則稱白蛋白尿 （分為微量白蛋白尿及大量白蛋白尿）。 3、微量白蛋白尿 尿白蛋白： 正常成人 尿（二）、前白蛋白（prealbumin, PA） 肝細胞合成，分子量54 000，半衰期1.9天。分子量66 458，參考范圍生理功能 臨 床 意 義PA0.180.45g/L1、組織修補2、運載功能降低具有意義：營養(yǎng)不良、急性炎癥、惡性腫瘤、肝硬化、腎炎時血清濃度降低。Alb3646g/L1、營養(yǎng)2、膠體滲透壓3、維持PH4

10、、運輸作用增高：嚴重失水、輸入過多減少：丟失、肝臟疾病、消耗性疾病、腹水形成、腎病、嚴重感染、膠原病。（二）、前白蛋白（prealbumin, PA） （三）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin , TRF 或 Tf） 由肝及單核吞噬細胞系統(tǒng)合成，分子量76 500，位于球蛋白區(qū)帶，負責運載消化管吸收的及紅細胞降解釋放的鐵，以轉(zhuǎn)鐵Fe3+復(fù)合物的形式進入骨髓，用于合成血紅蛋白。半衰期7天?！緟⒖挤秶?.5-4.3g/L【臨床意義】屬急性時相反應(yīng)蛋白 并用于貧血的診斷,缺鐵性低色素貧血血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白含量增高,但鐵的飽和度很低； 但紅細胞對鐵利用障礙引起貧血時，血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白正?；蚪档停F的飽和度增

11、加。電泳分離：-球蛋白（轉(zhuǎn)鐵蛋白、血紅素結(jié)合蛋白、 2-微球蛋白、纖維蛋白原、脂蛋白、補體）分子量66 458，（三）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin , TRF 或 T（四）、2微球蛋白（ 2microgluobin , BMG 或2m） 由淋巴細胞合成，存在于所有有核細胞的表面，特別是淋巴細胞和腫瘤細胞?？勺杂赏ㄟ^腎小球濾過膜，但在腎小管幾乎全部重吸收，釋放入血循環(huán)。被重吸收的2微球蛋白在腎小管細胞完全降解。 pI 值為5.7，半衰期107 分鐘?？杀O(jiān)測腎小管功能；是HLA鏈的輕鏈部分。 【參考范圍】1.0-2.5mg/L(血清) ；尿： 0.2mg/L以下【臨床意義】 血漿2微球蛋白含

12、量升高見于炎癥、腫瘤、各種類型白血病及腎功能衰竭，尿毒癥患者血清2微球蛋白可達40mg/L。（四）、2微球蛋白（ 2microgluobin , 2微球蛋白（ 2m）血清升高：腎小球濾過功能低下，慢、急性腎炎，腎功能不全腎前性：病毒感染，免疫疾患（SLE，Sjogren），惡性腫瘤。 尿中升高： 腎前性 腎小管障礙： Fanconi， Wilson病 氨基甙類抗生素， 重金屬中毒， 燒傷， 腎小球障礙 2微球蛋白（ 2m）血清升高：腎前性：病毒感染， （五）、C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)第一個被認定為急性時相反應(yīng)蛋白,由肝細胞合成,為圓盤狀多聚體，分子量115

13、 000-140 000,可結(jié)合多種細菌、真菌及原蟲體對內(nèi)的多糖。能激活補體，引發(fā)調(diào)理作用，增強細胞的吞噬功能，對血小板凝聚和血塊收縮有抑制作用?！緟⒖挤秶?.0mg/L【臨床意義】 作為急性時相反應(yīng)的一個敏感指標, C-反應(yīng)蛋白在心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)、腫瘤侵潤時其血漿含量在2448小時內(nèi)迅速升高，可達到正常水平的2000倍。電泳分離：-球蛋白（各種免疫球蛋白主要位置及C-反應(yīng)蛋白）（五）、C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, （六）、 1酸性糖蛋白（1-AG） 0.25-2.0g/L,是電泳1- 球蛋白含量最高部分, 但著色很淺。功能：與免疫防御功能有關(guān)，機制不詳

14、；抑制血小板凝集影響膠原纖維形成；參與脂類運輸。 升高：急、慢性感染，AMI，腎炎，結(jié)締組織病， 自身免疫，過敏，惡性腫瘤。（七）、 1抗胰蛋白酶（1-AT）0.83-1.99g/L ，是電泳1- 球蛋這一區(qū)帶顯色的主要成分功能：蛋白酶抑制物（具有90的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的p依賴性。升高：感染，腫瘤，膠原病， 妊娠，術(shù)后藥物服用 （口服避孕藥，激素） 降低：遺傳性：1-AT缺乏癥后天性：ARDS，重癥肝炎，腎炎，肺損傷，蛋白丟失，營養(yǎng)不良，早產(chǎn)兒，腎移植早期排異。 （六）、 1酸性糖蛋白（1-AG） 升高：急、（八）、 銅蘭蛋白（ceruloplasm

15、in, CP） 0.21-0.53 g/L 肝合成,巨噬細胞和淋巴細胞合成少量；pI 值為4.4， 具遺傳基因多態(tài)性。功能：具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無毒代謝庫. 血清中降低： 先天異常； Wilson病， 營養(yǎng)不良，肝疾患， 蛋白丟失，新生兒。血清中升高： 腫瘤，感染， AMI，貧血， 膽道梗阻， 膠原病，妊娠， 肺氣腫，藥物， 吸煙。（八）、 銅蘭蛋白（ceruloplasmin, CP）血（九）、 觸珠蛋白又稱結(jié)合珠蛋白、 成人：0.52.2g/L肝合成， pI 值為4.1，電泳位a2 -球蛋白區(qū)帶功能：與紅細胞中釋出自由Hb 結(jié)合,防止Hb 從尿中丟失保存鐵, 急性溶血后一周再

16、生恢復(fù)。高效的過氧化物酶。需鐵細菌的天然抑菌劑。血清中降低：血管內(nèi)、外溶血，合成減低，手術(shù)（開胸術(shù)）自家輸血ABO不適合骨髓移植，燒傷后腎功不全，瘧疾，慢性丙型肝炎，自身免疫性溶貧；腎功能不全，自尿中漏出。 血清中升高： AMI， 內(nèi)源性發(fā)熱， 腫瘤。（九）、 觸珠蛋白又稱結(jié)合珠蛋白、 血清中降低：血（十）、 2-巨球蛋白（ 2-macroglobin, 2MG） 是血漿中分子量最大蛋白質(zhì), 1.31-2.93g/L肝細胞與單核吞噬細胞系統(tǒng)中合成，半壽期5天。功能：與多種分子和離子結(jié)合，影響蛋白水解酶活性血清中2MG降低：惡性腫瘤，RA，DIC，溶栓療法，AMI，COPD，尿毒癥，肌萎縮性側(cè)索

17、硬化，胰腺炎，潰瘍性結(jié)腸炎，術(shù)后。遺傳性2MG缺乏。升高：慢性炎癥，肝炎，腎炎，慢性肝病，糖尿病。（十）、 2-巨球蛋白（ 2-macroglobin,（十一）、甲胎蛋白（ 1-fetoprotein,AFP)是胎兒血清中主要的蛋白質(zhì)，位于白蛋白和1球蛋白之間，主要在肝臟合成，妊娠1315周胎兒體內(nèi)甲胎蛋白的合成達到高峰，以后逐漸降低，出生時血漿中濃度僅為高峰期的1%左右，周歲時接近成人水平。成人體內(nèi)的AFP由肝臟產(chǎn)生，血清中含量極微。 【參考范圍】成人：20ng/mL【臨床意義】（1）診斷肝癌（2）協(xié)助判斷肝癌的分化程度及肝癌患者病情和預(yù)后（3）其他腫瘤：胰腺癌、肺癌等患者亦可出現(xiàn)不同程度的

18、升高 （4）鑒別其他疾病：可用于肝癌和其他肝臟疾病的鑒別 （5）羊水中AFP含量測定可用于胎兒產(chǎn)前檢測 （6）生殖細胞癌患者可見血清AFP含量增高（十一）、甲胎蛋白（ 1-fetoprotein,AFP) 纖維蛋白原4.0% 2-巨球2.93% 觸珠蛋白2.2% 銅蘭蛋白0.53% 1抗胰蛋白酶1.99% 1酸性糖蛋白 2.0% 前白蛋白0.45% 轉(zhuǎn)鐵蛋白4.3%白蛋白55% 其他26.59 % 纖維蛋白原4.0% 2-巨球細胞遭到破壞合成減低消耗、丟失異常表達1、炎癥、創(chuàng)傷在急性炎癥或某些組織損傷時,有些血漿蛋白質(zhì)含量會增高,有些會降低,這些血漿蛋白質(zhì)并被稱為急性時相反應(yīng)蛋白。 (acut

19、e phase reactants, APR)包括：1抗胰蛋白酶、 1酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅蘭蛋白、C3、C4、C反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。第二節(jié) 疾病時的體液蛋白質(zhì)細胞遭到破壞第二節(jié) 疾病時的體液蛋白質(zhì) 在炎癥、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、腫瘤等病理情況下時， 除血漿前白蛋白、白蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白含量下降外，其它的急 性時相反應(yīng)蛋白的血漿含量明顯升高。少則升高50，多則 可升高1000倍。這一現(xiàn)象稱為急性時相反應(yīng)。 急性時相反應(yīng)是機體防御機制的一部分，目前的解釋是，在機體受到損傷或炎癥時釋放某些小分子蛋白質(zhì)，如細胞因子，導(dǎo)致肝細胞中上述蛋白質(zhì)的合成增加或減少。 CRP是臨

20、床常用炎癥的標志物。 1、炎癥、創(chuàng)傷: 在炎癥、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、腫瘤等CRP 特性正常含量低 （ 1000 倍） 半衰期短 （24 h）1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP 特性正常含量低 （ 5.0 mg/L？）1、炎癥、CRP 臨床應(yīng)用炎癥的診斷炎癥與非炎癥的鑒別炎癥過程的監(jiān)測療效考核預(yù)后1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP 臨床應(yīng)用炎癥的診斷1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP 參考范圍 100 mg/L 重度炎癥1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP在感染和組織損傷時可升高1001000倍，半衰期46h，對機體有益。CRP 參考范圍 10 mg/L 無急性炎癥CRP和炎癥在發(fā)熱、各種炎癥狀態(tài)、和創(chuàng)傷時，血清CRP水平升高1000倍。肝病

21、,自身免疫失調(diào)和癌癥,血清CRP中度升高。運用高靈敏的CRP方法（hs-CRP)對吸煙、肥胖、老年、以及表面健康的對象的檢測，原先認為是正常的CRP（如：3 mg/L)，研究發(fā)現(xiàn)在“正常”水平內(nèi)的hs-CRP 濃度的高低，和未來發(fā)生冠脈綜合征的危險有關(guān)。引起普遍重視。1、炎癥、創(chuàng)傷: 10 mg/L 無急性炎癥CRP和炎癥在發(fā)熱、各種炎癥狀態(tài)、和創(chuàng)傷時，血清CRP水平升高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP) 采用乳膠增強的比濁技術(shù)大大提高了分析的 靈敏度(檢測低限為0.005-0.10mg/l),在低濃度 CRP(0.15-10 mg/l)測定范圍內(nèi)有很高的準確性. 用這些方法所進行測定的CRP稱為

22、高敏感(high-sensitivity)或超敏感(ultra-sensitive)CRP,縮寫hs-CRP1、炎癥、創(chuàng)傷:高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP) 采用乳膠增強的比濁技術(shù)【檢驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)大量研究資料表明,動脈粥樣硬化的血栓形成除了脂肪堆積過程外,也是一個慢性炎癥過程,而CRP是動脈粥樣硬化血栓形成疾病的介導(dǎo)和標志物。對表面健康的人群預(yù)示未來發(fā)生管脈 綜合征的可能性。1、炎癥、創(chuàng)傷:高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)大量研究資料表明,動脈粥樣硬CRP（C反應(yīng)性蛋白） 參考值：用WHO CRP 標準品定標，測定468名健康人的 均值為0.6

23、8mg/L，多數(shù)主張將臨界值定為1 - 2mg/L者有臨床意義?！緳z驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目 2、肝臟疾病 肝臟合成大多數(shù)血漿蛋白，肝枯否細胞參與免疫細胞的生成調(diào)節(jié)，肝臟疾患可以導(dǎo)致多種血漿蛋白質(zhì)發(fā)生變化。3、腎臟疾病 腎臟病變時早期就可以出現(xiàn)蛋白尿，而導(dǎo)致選擇性血漿蛋白質(zhì)丟失，嚴重腎病時腎小球失去分子篩的作用，可導(dǎo)致非選擇性蛋白丟失。 2、肝臟疾病乙型肝炎肝硬化選擇性蛋白丟失前白蛋白( PA)白蛋白(Alb)N或1-脂蛋白(1-LP)1-酸性糖蛋白( AAG)N1-抗胰蛋白酶(AAT) 2-巨球蛋白(AMG銅藍蛋白(CER)N或結(jié)合珠蛋白(Hp)N或轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)-脂蛋白(-LP)

24、C3N或纖維蛋白原(Fib)NIgGIgAIgMN或C-反應(yīng)蛋白(CRP)N電泳圖譜特征PAAlb略、不規(guī)則寬帶(有時可與溶成一片)PAAlb寬帶Alb2幾種疾病時血漿蛋白質(zhì)的變化乙型肝炎肝硬化選擇性蛋白丟失前白蛋白( PA)白蛋白(4、風濕病： 風濕病可表現(xiàn)為急性或慢性炎癥過程，主要累及結(jié)締組織。 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM升高等。炎癥活動期 1-酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白及C3升高。5、遺傳性缺陷： 某些蛋白質(zhì)發(fā)生變異或量缺乏。多由于編碼相應(yīng)蛋白質(zhì)的基因發(fā)生突變或缺失?？沙霈F(xiàn)遺傳性缺陷的蛋白質(zhì)包括1-抗胰蛋白酶、銅藍蛋白、免疫球蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、補體成分及罕見的無白蛋白血癥等。

25、4、風濕?。貉獫{蛋白質(zhì)測定血漿蛋白質(zhì)測定【檢驗醫(yī)學】體液蛋白質(zhì)生化檢測項目就到這里吧！就到這里吧！體液蛋白質(zhì)測定方法:免疫化學法電泳法化學方法第三節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定學習方法：【測定方法】 【實驗原理】 【參考范圍】 【臨床意義】體液蛋白質(zhì)測定方法:第三節(jié) 體液蛋白質(zhì)測定學習方法：【測定方一、血清總蛋白測定測定依據(jù)：蛋白質(zhì)測定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)1、元素組成測定：含N穩(wěn)定；2、重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)：具有多個肽鍵；3、酪氨酸和色氨酸與Folin-酚試劑反應(yīng)顯色或UV 吸收；4、與色素結(jié)合的能力：與染料以離子鍵或共價鍵連接；5、沉淀后根據(jù)濁度測定：光度計測定；6、光折射測定：折射儀測定。一、血清

26、總蛋白測定測定依據(jù)：蛋白質(zhì)測定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)方法：1.凱氏定氮法參考方法 2.雙縮脲法( 推薦) 3.酚試劑法 4.散射比濁法5.染料結(jié)合法 6. UV 法.折光測定法方法：1.凱氏定氮法參考方法 2.雙縮脲法( 推薦) 1.凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g pro)消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時） 蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)； 吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使H+ ）滴定用已標定的無機酸滴（使H+ 恢復(fù)），計算 總氮量定蛋白（總氮量-非蛋白氮）6.25=蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成

27、正比。 原理：1.凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g 評價：優(yōu)點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參考方法。缺點：操作復(fù)雜，費時，不適合常規(guī)檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是疾病時。 應(yīng)用：標準蛋白的標定及校正其它常規(guī)方法評價：優(yōu)點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參考方法。 (知識回顧）一、分光光度技術(shù)的基本原理 摩爾吸光系數(shù) 1、Lambert-Beer定律： A=KLC mol/L（適于可見光 、紫外光、紅外光和均勻非散射液體） 溶液厚度cm I0 入射光強度T（透光度） =I/I0A（吸光度）= logT logI0/I I透射光強度是利用物質(zhì)對光的吸收

28、作用對物質(zhì)進行定性定量分析技術(shù)，是光譜分析技術(shù)中最常用的一種。光具有波、 粒二象性,不同波長具有不同能量,能量與波長呈反比，用納米（nm)表示。 (知識回顧）T（透光度） =I/I0 I是利：在固定條件（入射光波長、溫度等）下，特定物質(zhì)的值不變，是分光光度法對物質(zhì)進行定性的基礎(chǔ)。2、影響Lambert-Beer定律的因素：光學因素：單色光化學因素：濃度、溫度、溶劑和PH影響化學平衡。導(dǎo)致被測物因解離、締合、形成新的化合物發(fā)生變化，使吸光度與濃度不成線性關(guān)系。二、分光光度計的基本結(jié)構(gòu)：在固定條件（入射光波長、溫度等）下，特定物質(zhì)的值不變，是光源：鹵鎢燈、氫燈單色器：濾光片、棱鏡、光柵比色杯：玻璃

29、、石英檢測器：光電管、光電倍增管顯示器：檢流計、微安表光源：鹵鎢燈、氫燈三、分光光度技術(shù)的定性與定量方法1、分光光度技術(shù)的定性方法：最大吸收峰max 和摩爾吸光系數(shù)2、分光光度技術(shù)的定量方法： 標準曲線法（終點法） A= L C 計算出K值(定標) 濃度=K . 吸光度(K因素法) AC0三、分光光度技術(shù)的定性與定量方法1、分光光度技術(shù)的定性方法：1、血清總蛋白（total protein, TP):【測定方法】雙縮脲法（目前推薦方法）【實驗原理】蛋白質(zhì)是由許多氨基酸通過肽鍵相互結(jié)合而成的，二價銅離子在堿性溶液中與蛋白中的肽鍵（-CONH-)發(fā)生反應(yīng)形成紫紅色絡(luò)合物，在540nm有吸收峰，并與

30、蛋白含量 成正比。蛋白+ Cu2+ Cu 蛋白絡(luò)合物（紫紅色）【參考范圍】6080g/LN 端C 端1、血清總蛋白（total protein, TP):【測定【臨床意義】 血清總蛋白升高：多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、冷沉淀球蛋白血癥等多克隆性或單克隆性免疫球蛋白病，多發(fā)性骨髓瘤患者的血漿球蛋白大于50g/L，總蛋白大多都大于100g/L。血清總蛋白降低：反應(yīng)白蛋白合成減少或蛋白質(zhì)的丟失肝細胞損害合成減少：肝炎、肝硬化、肝癌總蛋白60g/L,白蛋白25 g/L，低蛋白血癥營養(yǎng)不良：攝入不足丟失過多：腎病、燒傷、大出血消耗增加：結(jié)核、甲亢、惡性腫瘤【臨床意義】 血清總蛋白升高：優(yōu)點：簡便，準確，

31、重復(fù)性好，10g-120g/L線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)CV%2%，顯色穩(wěn)定。缺點：靈敏度較差，對蛋白質(zhì)含量低的體液標本不適合。應(yīng)用：常規(guī)推薦方法。手工或上機使用。 【評價】優(yōu)點：簡便，準確，重復(fù)性好，10g-120g/L線性好，特異2、白蛋白（Alb）的檢測【測定方法】溴甲酚綠終點法 （推薦法）【實驗原理】血清中白蛋白與溴甲酚綠（BCG）在pH4.2環(huán)境中結(jié)合生成綠色復(fù)合物，溶液由黃色變?yōu)榫G色，在630nm有吸收峰，其顏色深淺與白蛋白濃度成正比，從而測出白蛋白含量。 白蛋白+BCG 白蛋白溴甲酚綠復(fù)合物【參考范圍】3555g/L【臨床意義】增高：嚴重失水、輸入過多。 減少：丟失、肝臟疾病

32、、消耗性疾病、腹水形成、腎病、 嚴重感染、膠原病，血清白蛋白小于20g/L，臨床可出現(xiàn)水腫。2、白蛋白（Alb）的檢測【測定方法】溴甲酚綠終點法 （推薦【評價及應(yīng)用】優(yōu)點：操作簡便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點：特異性不高；不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致，標準物不易確定。 【評價及應(yīng)用】優(yōu)點：操作簡便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素3、血清球蛋白（globulin）【檢測方法】現(xiàn)多用血清總蛋白減去血清白蛋白 【參考范圍】20-30g/L 白蛋白/球蛋白(A/G):1.5-2.5/L【臨床意義】血清球蛋白升高見于某些自身免疫性疾病、炎癥或感染，還見于惡性M球蛋白血癥。 降低見于合成減少

33、，有低球蛋白血癥或無球蛋白血癥。3、血清球蛋白（globulin）【檢測方法】現(xiàn)多用血清總蛋4、血漿纖維蛋白原（ fibrinogen，F(xiàn)IB）測定 即凝血因子I，由肝細胞合成，分子量340 000的大分子糖蛋白，占血漿蛋白總量23?！緶y定方法】 ：纖維蛋白原凝固法免疫化學法【實驗原理】：纖維蛋白原在凝血酶催化下形成纖維蛋白，纖 維蛋白原含量與形成纖維蛋白所用時間成反比。【參考范圍】2.0-4.0g/L 血液凝塊構(gòu)造4、血漿纖維蛋白原（ fibrinogen，F(xiàn)IB）測定 即【臨床意義】血漿纖維蛋白原為急性時相反應(yīng)蛋白之一,其血漿含量增高常見于某些感染、嚴重組織損傷、休克、外科手術(shù)后、腎炎、風

34、濕熱、惡性腫瘤等。其他放射治療、月經(jīng)期和妊娠期亦可增高。血漿纖維蛋白原含量減少常見于營養(yǎng)不良、嚴重肝功能損傷、彌散性管內(nèi)凝血、胎盤早產(chǎn)剝離、分娩時羊水滲入血管使在血管內(nèi)形成血栓、先天性纖維蛋白缺乏癥等?！九R床意義】血漿纖維蛋白原為急性時相反應(yīng)蛋白之一,其血漿含量5、前白蛋白測定【實驗方法】免疫比濁法(透射比濁)【實驗原理】抗原抗體反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，340nm測定?！緟⒖挤秶?.180.45 g/L【臨床意義】能迅速反映營養(yǎng)攝入處于正平衡或負平衡。而白蛋白的半衰期長,達21 d,即使肝臟停止合成白蛋白, 8 d后外周血中的白蛋白比濃度僅降低約20% ,敏感地反映早期肝損害情況；PA是一種非特

35、異宿主防御物質(zhì),所以在急性感染時, PA在血清中濃度可迅速降低,尤以細菌性感染時更為明顯。5、前白蛋白測定【實驗方法】免疫比濁法(透射比濁)6、 C反應(yīng)蛋白【實驗方法】免疫比濁法(散射比濁/透射比濁)【參考范圍】8mg/L【臨床意義】：最重要的炎癥和組織損傷指標， 敏感的急性期蛋白。比血沉，白細胞計數(shù)更敏感。 細菌性感染，心肌損傷，風濕性疾患與疾病的進程和愈后有關(guān)。 6、 C反應(yīng)蛋白【實驗方法】免疫比濁法(散射比濁/透射比濁7 、尿總蛋白測定正常人腎小球濾液中少量的分子量蛋白質(zhì)9599可經(jīng)腎小管重吸收，因此尿中蛋白質(zhì)很少。尿中少量蛋白質(zhì)2/3來自血漿蛋白，主要是白蛋白，其余來自腎臟和尿路的組織

36、蛋白?！緶y定方法】 1、磺基水楊酸硫酸鈉比濁法。 2、干化學法 3、尿蛋白電泳法7 、尿總蛋白測定正常人腎小球濾液中少量的分子量蛋白質(zhì)95病例1患者：陳某 男 28歲全身高度水腫，伴胸水、腹水，四肢不溫，尿量減少，胸悶氣短，晚上不能平臥，面色蒼白，面部因長期服用激素呈滿月臉。實驗室檢查： 尿蛋白3，24小時尿蛋白定量8.8g， （成人：30130mg/24h）血清白蛋白18g/L 。病例診斷：原發(fā)性腎病綜合征。腎病綜合征形成的機理：主要由于機體內(nèi)產(chǎn)生免疫復(fù)合物沉積于腎小球毛細血管壁，并對其損傷、破壞，導(dǎo)致腎小球基底膜的兩大屏障濾過障礙。當基底膜機械屏障受損，孔徑增大，原本不能濾過的大分子蛋白質(zhì)

37、和血細胞濾過漏出，電荷屏障受損，使帶負電荷的白蛋白大量漏出，且超過腎小球吸收能力，而出現(xiàn)大量蛋白尿。由于大量蛋白尿，使血漿中白蛋白濃度下降，造成低蛋白血癥，血漿肢體滲透壓下降，血漿中大量水分滲出血管外，進入組織間隙而發(fā)生水腫，同時可致血容量下降，有效循環(huán)血量不足，繼發(fā)醛固酮升高，加重鈉水潴留，水腫。病例1患者：陳某 男 28歲全身高度水腫，伴胸水、腹水，四8、尿微量蛋白質(zhì)測定尿微量蛋白質(zhì)指常規(guī)性或定量難以檢測出的一些尿蛋白。它們合成部位、生理功能各不相同。正常生理情況下，尿中這些蛋白質(zhì)的總含量僅為微克或毫微克水平，但在某些病理情況下可較多的出現(xiàn)于尿中。目前臨床生化常做檢測的尿微量蛋白質(zhì)有：白蛋白（Alb ）、 2 微球蛋白（2 m）、1 微球蛋白（1 m）、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）、本周蛋白（BJP）。8、尿微量蛋白質(zhì)測定尿微量蛋白質(zhì)指常規(guī)性或定量難以檢測出的一9、腦脊液蛋白質(zhì)測定 經(jīng)脈絡(luò)膜的毛細血管壁的超濾作用生成的，還有一些蛋白質(zhì)是腦脊液特有的，由中樞神經(jīng)系統(tǒng)合成。含量僅為血清蛋白質(zhì)總量1以下，主要為白蛋白。 蛋白質(zhì)含量隨著年齡增加